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1、实验 二血液标本采集血涂片制备,【目的】掌握血涂片的制备和染色。【原理】把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞吉氏染液染色。不同的细胞种类及细胞的不同成分，对酸性及碱性染料的结合能力不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点。【器材】载玻片、推片、微量吸管、乳胶吸头。【标本】EDTA抗凝静脉血。,染色【试剂】1瑞吉式染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、吉式燃料0.5g、纯甲醇600ml、甘油15ml。(2)液:磷酸盐缓冲液(pH6.46.8)，含磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至 1 000ml。,【操作】,(1)采血(2)推片，推片与载片夹角30-45度平稳地向前移动，血膜应呈
2、舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。,(3)干燥:晃动。37温箱中促干。(4)染色:将玻片平置于染色架上，滴加(液)35滴，约0.5lmin后，滴加等量缓冲液(液)，摇动玻片混匀。(5)冲洗:5-10min后用流水冲去染液，待干。(6)观察结果:将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。,一张良好血涂片的要求：,厚薄适宜 头体尾明显 细胞分布均匀 边缘整齐 两端和两边留有空隙,标准血涂片,血涂片分布不均主要原因：推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁,pH 的影响：H：碱性染料亲和力下降，增强伊红着色，出现红染OH：酸性染料亲和力下降，增强美蓝着色，出现 蓝染PBS缓冲液：pH 6.46.8 以维持恒定的pH环境,5.注意事项 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落；染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好；染液不能过少，以防蒸发沉淀；,冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长；染色过淡时可复染，复染时先将染料稀释好；染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色；分类最佳区域为体、尾交界处。,4.影响瑞氏染色效果的一些因素：A.染料放置时间；B.溶液的酸碱度；C.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。,
