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1、幽门螺杆菌感染的实验诊断,讲课内容,第一节 幽门螺杆菌特点 第二节 幽门螺杆菌感染的检测方法第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用,123,第一节 幽门螺杆菌特点,幽门螺杆菌（Helicobacter pylori 简称HP），呈弧形或S形，有12个微小弯曲，属微需氧菌，在pH值为68时繁殖最为活跃，该菌具有丰富的尿素酶，可分解食物中的尿素产生氨，该菌生长于胃粘液深层，胃粘膜表面，多在胃窦部以胃小凹、上皮皱褶的内折及腺腔内为多。,H.Pylori感染和十二指肠溃疡,H.Pylori感染 D/G细胞功能改变遗传易感性壁细胞总体增加B型慢性胃窦炎 胃泌素 胃酸分泌量H.Pylori的迁移十二指肠粘膜
2、胃上皮化生十二指肠球炎十二指肠球溃疡,H.Pylori感染和胃癌的关系,浅表性胃炎正常胃粘膜基因损伤H.Pylori感染弥漫性胃癌萎缩性胃炎环境因素胃粘膜肠上皮化生 高CagA+-HP滴度宿主因素 的H.pylori菌株感染肠型早期胃癌进展期胃癌,3.HP的毒力作用,取决于 定植能力 菌株的基因型 细菌的圆球体样型态 对抗菌药物的敏感性,第二节 幽门螺杆菌感染的检测,侵入性检测方法,非侵入性检测方法,快速尿素酶试验病理切片染色培养黏膜涂片革兰氏染色基因方法:PCR等,13C-或14C-尿素呼气试验 Hp粪便抗原试验 Hp血清抗体试验,试验原理,HP能产生丰富尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨
3、，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。,操作过程,活检同时取2块组织进行检测（胃窦和胃体各1块），标本放置于试剂后观察颜色变化。,注意事项,检测结果受试剂pH值、取材部位、组织大小、细菌量、观察时间、环境温度等因素影响,（一）快速尿素酶试验RUT,一、创伤性检查,胃镜检查胃黏膜取材,直接涂片革兰氏染色，也可包埋切片，常规HE染色或银染，直接镜检观察Hp。,直接镜检,其它组织学,（二）组织学检查,1.免疫组化染色特异性高。2.HE染色可同时作病理诊断；3.荧光原位杂交（FISH）具有较高敏感性,1.在胃镜取胃粘膜放在转运培养基中。2.接种于Hp牛脑浸液培养基，分区划线。3.置5-12CO2培养箱35
4、-37，3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环。,培养过程,诊断Hp最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”。一般用于药敏试验和科研。,特点,（三）细菌培养,幽门螺杆菌的尿素酶(A、B、C、D)基因、16S-rDNA基因、VacA及CagA基因均已克隆成功，根据幽门螺杆菌不同的耙基因，设计不同的引物，从而建立不同的PCR系统，扩增产物可经凝胶电泳分析.,原理与方法,特点,（四）聚合酶链反应试验(PCR检测技术),1.与细菌培养和组织学染色镜检比较无明显优越性。2.现在可收集胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高，但可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应,注：HP的基因分型（H
5、P菌属亚群）及致病性,VacA基因表达空泡毒素87KDCagA基因表达细胞毒素相关蛋白128KDCagA基因仅出现于VacA产生细胞毒效应时，是VacA产生效果的标志,原理和过程,HP能产生丰富尿素酶，能分解胃中的尿素，当整粒摄入含同位素碳-13的尿素胶囊后，碳-13尿素在尿素酶作用下，分解为氨和碳-13二氧化碳，碳-13二氧化碳被小肠上段吸收后，进入血循环，并随呼气排出，分析呼气中的碳-13就可诊断该细菌的存在,特点和注意事项,1.易于操作；可反映全胃Hp感染状况。2.检测前一个周内应停用抗生素、铋剂、质子泵抑制剂等药。3.孕妇、哺乳期妇女及儿童不宜做。,（一）13C-或14C-尿素呼气试验
6、,二、非创伤性检查,多采用ELISA双抗体夹心法，或胶体金试条法。留取晨粪便，用稀释液稀释，再加入试条或微孔板检测。,原理与方法,特点,（二）幽门螺杆菌粪便抗原检测,1.粪便抗原检测灵敏度高、准确性好，HP死亡但抗原成分仍保留下来，故在治疗前后都可用。2.适用于所有年龄和类型的患者（儿童）。,多采用ELISA双抗原夹心法，或胶体金试条法。可快速检测人血清、血浆或全血中幽门螺杆菌抗体。,原理与方法,特点,（三）幽门螺杆菌血清抗体检测,1.检测的抗体是IgG，反映一段时间内Hp感染情况，部分试剂盒可同时检测CagA和VacA抗体。2.主要适用于流行病学调查。,第三节 幽门螺杆菌检测方法的临床应用,小结：几种HP检测方法的比较,
