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1、湖南省地方标准普通丝瓜杂交种纯度鉴定SSR法技术规程编制说明一、任务来源根据湖南省质量技术监督局下发的关于下达2022年度第1批地方标准制修订项目计划的通知，对湖南省地方标准普通丝瓜杂交种纯度鉴定SSR法技术规程进行制定。本标准的主要起草单位为湖南省蔬菜研究所，由湖南省农业标准化技术委员会归口。二、制定目的、意义丝瓜系葫芦科丝瓜属一年生攀缘性草本植物，是长沙市人民喜食的瓜类蔬菜，也是常见的药食同源植物(Partapetal,2012),不仅具有较高的营养价值，还具有清热化痰、凉血解毒等医疗保健作用和消除雀斑、美白去皱的美容价值(邵兴云等，2004；单承莺等，2016)。我国栽培的丝瓜主要有普通
2、丝瓜【LuffaCylindrica(L.)Roem.)和有棱丝瓜【Luffaacutangula(L.)Roxb.两个栽培种，原产于印度，主要分布于热带、亚热带地区(Baletal,2004)o其中，普通肉丝瓜在湖南省近年来种植面积逐年扩大，据省农业农村厅调查统计，2022年全省丝瓜播种面积达47万亩，对于保障我国丝瓜市场供应起了重要作用。丝瓜杂交种纯度鉴定主要采用形态学鉴定、生化鉴定及分子标记鉴定3种方法Q其中，应用最广的是形态学鉴定，即主要根据种子、子房形状等形态学特征进行鉴定，该方法实用性强，但存在周期长、占地面积大等缺陷。生化鉴定由于可利用的生化标记多态性差，电泳谱带分辨率低，严重限
3、制了其应用范围。相较于形杰学鉴定和生化鉴定，分子标记鉴定具稳定性好、信息量大等优点，已被广泛应用于农作物和蔬菜种子纯度质量检测。其中SSR标记由于具有数量丰富、多态性高、稳定性好、操作简便及结果准确性高等优点，已成为分子生物学研究的首选分子标记之一，广泛应用于大豆、水稻、玉米、油菜等农作物的种子纯度鉴定，在玉米、水稻品种真实性和纯度鉴定中，已经作为标准技术体系纳入到国家或地方行业标准。丝瓜杂交种纯度鉴定的SSR法一直以现行的其它物种的国家标准为依据，造成鉴定时间、成本的浪费，不能满足快速鉴定丝瓜杂交种纯度的需求。为规范市场、保护种业公司和种植者权益，提升丝瓜杂交种的质量和市场竞争力，为丝瓜种子
4、的生产、加工、销售和行业管理部门提供科学依据，研究、制定规范丝瓜杂交种纯度鉴定的技术标准十分必要、意义重大。三、制定标准的原则1 .合规的原则本文件充分遵照国内相关法律法规，并按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。2 .安全的原则制定本文件遵循确保质量安全的原则，标准中有关质量安全控制必须符合GB/T3543.1农作物种子检验规程和GB16715.1瓜菜作物种子，瓜类中质量要求。3 .科学的原则制定本文件需要从内在规律出发，充分掌握普通丝瓜的SSR分子标记特性、生长特征特性及植物DNA扩增检测的方法，标准主要内容和各项指标力求科学合理。4 .
5、可操作的原则本文件所确定的普通丝瓜杂交种纯度鉴定SSR法技术的各项要求力求准确，有较强的操作性。五、标准制定的过程1.前期准备工作2022年3月开始启动标准制订工作，3月上旬召开地方标准起草启动会，确定本文件制定由湖南省蔬菜研究所起草，成立编制组,制定了工作计划，起草人员由韩小霞、胡新军、闵子扬、李勇奇等组成，确定了人员分工，确定了标准制定的方法与思路，明确了各阶段的任务与目标。5 .开展调查研究及初试2022年4月-2023年6月月，编制组成员收集与起草标准有关的资料，查阅了国家和省内的法律、法规，国内外的标准文本，湖南省相关的发展规划与政策性文件等。期间多次赴湖南湘研种业有限公司、湖南兴蔬
6、种业有限公司、湖南湘妹子种业有限公司等大型瓜类蔬菜种子生产基地进行实地考察,了解我省瓜类蔬菜杂交种制种、纯度鉴定技术应用现状及进展，为文件起草打下了充分的基础。6 .标准的征求意见稿2022年6月-7月，编制组成员将收集到的与标准起草有关的资料和交流意见进行整理，完成了标准文本的撰写，形成标准征求意见稿，同时撰写了编制说明。7 .征求意见2023年6月-7月，编制组进行了网上和函件标准意见征求。征求了湖南农业大学、衡阳市蔬菜研究所、长沙市农业科学研究院、等单位或部门的意见，并征求了6位专家的意见，共征集意见条，见附表Io8 .编制标准送审稿2023年8月，编制组将收集到的反馈意见，经过分析、整
7、理，对标准的内容进行了逐项修改和完善，形成了标准送审稿Q9 .标准审查会2023年8月日，湖南省农业农村厅组织有关专家在长沙对湖南省蔬菜研究所编制的普通丝瓜杂交种纯度鉴定SSR法技术规程（送审稿）进行了审查。专家组听取了标准起草单位的编制说明，对标准文本内容逐条逐款地进行了质询，专家组一致同意该标准通过审查，并建议标准起草组根据专家组的意见（见审查会议纪要）对该标准进行修改完善后报湖南省农业标准化技术委员会批准发布。10 标准报批稿根据评审专家的意见，标准编制组对标准文本进行了修改和完善,形成了标准报批稿。五、制定标准的依据在编制该项标准的过程中，我们依据的标准有GB/T3543.1农作物种子
8、检验规程和GB16715.1瓜菜作物种子，瓜类。六、标准的主要内容说明1.标准的适用范围本文件适用于普通丝瓜杂交种纯度鉴定。2.标准的主要内容（1）本文件规定了普通丝瓜杂交种纯度鉴定术语和定义、鉴定原理和流程等要求。（2）本文件根据按照GB/TL1-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。（3）根据目前杂交种纯度鉴定成功经验和做法，本文件从丝瓜种子发芽、DNA提取、PCR反应、电泳检测、结果统计与计算等流程上规范了普通丝瓜杂交种纯度鉴定SSR法的具体操作流程。种子发芽的章节，针对不同类型丝瓜品种选择浸种方法，并对催芽过程中遇到的长菌斑问题指导处理；DNA提取章节，
9、提供了两种DNA提取方法,对于需要长期保存的样品DNA采用常规CTAB法,对于现提现用样品采用快速碱煮法；PCR反应章节，通过摸索不同试剂配比，提出节约成本的10l反应体系，为节约时间，减少PCR扩增的循环数；电泳检测章节，介绍了2种检测方法，对于扩增条带大小差别不大的扩增产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，扩增条带大小差别较大的扩增产物建议采用普通琼脂糖凝胶电泳。对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法和操作步骤进行简化，与快速碱煮法相结合节约了试验成本和鉴定时间，大大提高了鉴定效率。七、标准结构框架本文件文本包括的主要章节内容如下：前言1范围2规范性引用文件3术语和定义4原理5主要仪器设备和试剂耗材6试
10、剂配制7引物8鉴定流程9纯度计算附录A（资料性）常用试剂配方附录B（资料性）引物信息八、标准预计产生的经济、社会效益本标准利用SSR分子标记法对普通丝瓜杂交种纯度进行鉴定，与传统的田间形态学鉴定相比，该鉴定方式克服了田间鉴定成本高、周期长、鉴定结果受经验和环境影响较大的缺陷，具有简单、快速、省时省工、准确率高、重复性好的优势。根据该技术规程，科学合理使用鉴定方式，以筛选纯度合格的杂交种为关键，保障了丝瓜种子的质量安全，具有较高的经济效益。该鉴定方法还可有效减少农田使用，简接减少农药用量和农药残留，有利于提升品牌竞争力。同时，通过减少农田土壤污染，使农业生态环境得到保护，可有力推动绿色生态农业生产发展，社会效益和生态效益显著。附表1湖南省地方标准修改单征求意见处理汇总表标准编号标准名称普通丝瓜杂交种纯度鉴定SSR法技术规程归口单位湖南省农业标准化委员会意见分发和回收情况单位政府部门行业协会企业科研机构检验检测机构认证认可机构消费者代表发出份数00收回份数00意见及处理情况序号意见或建议提出单位或个人处理情况I2345678910111213141516171819202122232425262728备注
