石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅含量.ppt

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1、石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅的含量,马 璐,石墨炉原子吸收光谱测定人血中铅的含量,实验目的实验原理及意义实验步骤及方法注意事项实验报告,实验目的,1.了解石墨炉原子吸收法检测血铅的基本原理。2.理解血铅的测定在职业铅中毒诊断和职业性健康检查中的意义。3.了解不同基体改进剂对石墨炉原子吸收法测定血铅的影响。,实验原理,职业性慢性铅中毒:由于接触铅烟或铅尘所致的以神经、消化、造血系统障碍为主的全身性疾病,铅的代谢及分布,铅尘、铅烟,肺,血液(红细胞、血浆),骨骼,肝、肾、脑,尿液,铅中毒,线粒体卟啉代谢紊乱,-氨基-r-酮戊酸(ALA),血原卟啉(FEP),血锌原卟啉(ZPP),血红素合成抑制,

2、神经系统:周围神经病 中毒性脑病消化系统:腹绞痛血液系统:贫血 点彩红细胞血管、肾脏:牙龈铅线 Fanconi,中毒诊断血铅2.9mol/L(0.6mg/L、600g/L)轻、中、重,铅中毒实验室诊断,结合职业接触史、作业环境调查、临床表现作出诊断(GBZ37-2002),观察对象血铅1.9mol/L(0.4mg/L、400g/L,),石墨炉原子吸收法-血铅,基本原理:血液经硝酸处理后进入石墨炉原子化器中进行原子 化,被测元素(Pb)形成基态原子蒸气;铅空心阴极灯辐射出的特征谱线283.3 nm通被基态原子态吸收,生成相应吸光度值;在一定实验条件下,其吸光度与试样中的铅浓度成正比,据此进行血液

3、中铅的定量分析。,石墨炉原子吸收法-血铅,基本步骤:,干燥,灰化,原子化(收集信号),氩气(保护、清除 基体蒸汽及杂质),调整气流量、温度、持续时间对试验条件进行优化,石墨炉原子吸收法-血铅,基体改进剂作用:保护被测物质 消除基体干扰血铅:Triton X-100、磷酸二氢铵,意义及应用,血液中95%的铅在红细胞中,其浓度与机体铅吸收、分布、排出处于平衡状态 当生活或生产环境不变,铅暴露基本稳定的情况下,血铅不仅反映了近期的铅接触水平,也一定程度上作为内暴露水平反映体内的铅负荷采样方便、不易污染、灵敏度高,血铅常被用于反映铅对人体危害的指标,实验器材与试剂,仪器:原子吸收分光光度计(有石墨炉原

4、子化 器和背景校正装置);铅空心阴极灯;器材:15ml、1.5 ml 离心管;肝素钠抗凝真空采血管 烧杯、100ml容量瓶、移液管、胶头滴管、移 液枪(1ml及200ul)及枪头试剂:血样;铅标准储备液(1.00 mg/ml),硝酸(G.R);Triton X-100(G.R);磷酸二氢铵溶液(A.R);高纯水。,实验方法与步骤,(一)溶液配制 铅标准应用液、基体改进剂、血铅标准液,实验方法与步骤,铅标准应用液配制(已配好)1.00 mg/ml的铅标准储备液用1%的硝酸稀释为:1 mg/L Pb标准应用液I,0.1 mg/L的Pb标准应用液II。,实验方法与步骤,基体改进剂基体改进剂1 100

5、 ml溶液含0.1%Triton X-100(WS/T 20-1996),0.1%硝酸基体改进剂2 100 ml溶液含0.2%磷酸二氢铵,0.3%Triton X-100,0.1%硝酸,实验方法与步骤,血铅标准液配制(基体改进剂-血液-Pb标准液)分别用基体改进剂1、基体改进剂2配置两组血铅的标准溶液,浓度分别为0,10,,20,40,80,g/L,实验方法与步骤,(二)被测样品制备1.采用肝素钠抗凝真空采血管采集被测血样,混匀后保存于4C冰箱;2.吸取100 l血样分别加两种基体改进剂,稀释至1ml,充分混匀,配成血液检测样,分别储存于1.5 ml 离心管中备用。,实验方法与步骤,(三)样品

6、检测1.选定被检测元素,设置检测条件及参数;2.对血铅标准液进行测定,得出吸光度值并拟合标准曲线;3.对样品进行检测,将吸光度值与标准曲线进行比对,得出血液检测液浓度。,实验方法与步骤,信号收集,读数,样品检测,注意:样品检测前,清洗清洁池及进样管;进样程序开始前,先对石墨管进行空烧,排除上次检测的余样,减少干扰;上样前需将样品充分混匀,减少测量误差,实验方法与步骤,结果分析1.绘制血铅的标准曲线,得出标准方程式2.样品的吸光度值减去试剂空白的吸光度值,由标准曲线算得的浓度即为稀释血样中的铅浓度c0(g/L)。3.血样中铅的浓度:c=c0*s,注意事项,所有实验使用的器皿都用20%硝酸浸泡48

7、h,然后依次用去离子水和高纯水冲洗,晾干备用;血样采集、运输、保存及配置过程中也应避免铅污染;操作时,避免实验器皿触碰到皮肤及桌面,以防止外源的铅污染,影响实验结果;正确使用移液枪,精准加样;如果血样含铅量超出标准曲线的测定范围,可增加稀释倍数。,实验分组及分工,全班分两个组(12人/组)组1:基体改进剂1 基体改进剂1作为溶剂的血铅标准液及被测血样的稀释 组2:基体改进剂2 基体改进剂2作为溶剂的血铅标准液及被测血样的稀释注:每组2份被测血样,分别来自不同的受检个体实验结果全班共享,两组对实验结果进行整合及比较,完成结果讨论及分析,实验报告,实验目的实验方法:简单叙述操作步骤实验结果1.绘制标准曲线,计算样品含铅浓度;2.根据国家职业卫生标准对被测者血铅浓度进行初步评价及诊断;若要确诊,还需哪些资料的补充?3.讨论:加入基体改进剂对血铅的测定有什么影响?,实验试剂的配制,基体改进剂基体改进剂1 100 ml溶液含0.1%Triton X-100(WS/T 20-1996),0.1%硝酸基体改进剂2 100 ml溶液含0.2%磷酸二氢铵,0.3%Triton X-100,0.1%硝酸检测样品配制 吸取100 l血样加入基体改进剂,稀释至1ml,充分混匀,配成血液检测样,分别储存于1.5 ml 离心管中备用,血铅标准品配制,谢 谢!,

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