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1、烟草中硒蛋白对癌症的影响,小组成员：杨秀梅 王雨晴 杨中敏 陈燕梅 罗娇娇,新疆大学生命科学与技术学院,一、研究背景二、研究目的和意义三、研究内容四、技术路线五、提取流程六、可行性分析七、实验结果八、社会效益及应用前景九、经费预算,人们大都把注意力集中在提高作物结实器官的蛋白质含量上，较少关注植物叶蛋白的开发利用，烟叶蛋白除了具有蛋白质的基本功能特性外，还具有许多特殊的功能特性。烟叶蛋白中富含硒，以硒蛋氨酸和硒半胱氨酸或其他形式存在。硒具有广泛的医疗保健作用，补充硒能预防癌症、肝炎、心血管疾病等，硒对癌症病人的化疗有防止白细胞减少的作用。然而，硒又是营养剂量与毒性剂量范围很窄的微量元素，因此，
2、发展具有低毒高效属性的硒产品，用于预防与治疗相关疾病意义重大。利用烟叶对无机硒的代谢，可得到蛋白质态硒；无机硒在转化为蛋白质态硒的过程中，毒性大大降低，主要表现为急性毒性的大幅下降。烟草中的蛋白质分为可溶性蛋白和不溶性蛋白。12左右的可溶性蛋白是叶绿体蛋白(Fraction I protein，F I蛋白)。另外12为其他可溶性蛋白质的复合物(Fraction 1Iprotein，F蛋白),一、研究背景,二 研究目的和意义,烟草蛋白是一种极具利用潜力和发展前景的植物蛋白资源，深入研究开发这种资源对于提高烟草的综合利用价值，稳定烟草种植和增加烟农收入，促进我国烟草行业可持续发展和产业结构调整均具
3、有重要意义。,二 研究目的和意义,特异,三、研究内容,从烟草中提取硒蛋白,四、技术路线,1.生物材料的选择2.细胞的破碎：借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。3.生物大分子的提取：磷酸缓冲液对蛋白质的稳定性好 4.生物大分子的纯化：亲和层析,五、提取流程,纯度分析：标准曲线的制备,图1 牛血清白蛋白（BSA）考马斯亮蓝染色标准曲线,提取率(%)=提取蛋白质质量花生质量 100%,五、提取流程,烟草蛋白的提取方法：烟叶捣碎加水磨浆碱溶（用KOH溶液提取）（200目滤布）过滤滤渣再碱溶两次滤液离心（4800rpm，20，30min）除杂上清液酸沉离心（4800rpm，4，30min）沉淀蛋白富硒
4、花生含硒蛋白样品的制备脱脂富硒花生粉加碱液搅拌离心分离得上清液调节pH 至等电点离心分离透析24h干燥得蛋白样品a.水溶性含硒蛋白的提取:准确称取5g 蛋白样品于100mL 蒸馏水中，60搅拌20min，4000r/min 离心20min，用少量蒸馏水洗涤残渣，离心合并上清液。透析24h，冷冻干燥得蛋白样品。b.醇溶性含硒蛋白的提取:取所得残渣1g，加入100mL 75%乙醇，提取方法同a。c.盐溶性含硒蛋白的提取:取所得残渣1g，加入100mL 0.5mol/L 的NaCl 溶液，提取方法同a。d.碱溶性含硒蛋白的提取:取所得残渣1g，加入100mL 0.1mol/L 的NaOH 溶液，提取
5、方法同a。1.2.2 矿物质元素的分析富硒花生和普通花生通过粉碎、石油醚脱脂、干燥制备成细粉，在电炉上用混合酸(HNO3 HClO4=41)消化后使用火焰原子吸收光谱法对钙、镁、锌、硒含量进行测定，三次重复,五、可行性分析,课题组成员均进行过实验培训研究，具备相关实验技术和方法,新疆大学生物资源基因工程重点实验室设备齐全：电泳设备，PCR仪，高速冷冻离心机，全自动高压灭菌锅，振荡培养箱，蒸馏水器，超净工作台，酶标仪等,材料不受季节的本课题思路明确，技术路线可行,可行性分析,六、预 期 成 果,NbL42纳米抗体的构建,NbL42纳米抗体的克隆表达,NbL42纳米抗体的分离及纯化,NbL42纳米
6、抗体的蛋白定量测定,整理并发表论文1-2篇,使得NbL42抗体的框架作为小分子抗体通用移植骨架成 为可能，为研发新的抗体提供基础。,七、社会效益及应用前景,烟草烟草是分子遗传学中研究最多的植物材料，用烟草花叶病病毒将新基因导入烟草植株，使新基因得到表达，在收获的烟叶里含有这种新基因的蛋白质，用这种方法已经得到人的血红蛋白成分由于绝大部分的蛋白基因都能被导入烟草花叶病毒中，也就是说可以从烟草中得到任何一种遗传工程蛋白。将来烟草还可以生产出抗癌抗艾滋病等大量有用物质。未来不但会培育出高香气、低蛋白、低危害的烟草用于卷烟，而且还会培育出食用和药用高蛋白的烟草造福人类。,八、经费预算,谢谢观赏,蛋白质
7、的提取柱层析结晶法、双水相萃取法,蛋白质纯化及纯度分析考马斯亮蓝、,双水相萃取法,Balasubramaniam等啪1研究了烟草蛋白在双水相系统中分配系数变化。通过改变PEG(聚乙二醇)的分子量、PEG浓度、无机盐的种类和浓度、pH值等条件来得到烟草蛋白在2相中的最佳分配系数，从而确定最佳的双水相萃取条件。随着转基因技术在烟草中的成功应用，烟草通常用来生产各种转基因蛋白。这些微量蛋白的分离，通常采用双水相萃取法来实现。,柱层析结晶法Lowe等o摒弃了传统的超滤和透析脱盐处理，采用Sephadex G-50交联葡聚糖凝胶柱对烟草蛋白提取液进行脱盐除杂处理，结晶蛋白得率比传统方法高。但是，Lowe的方法在烟草蛋白的提取过程中，必须将大量新鲜烟叶投入到少量浓氯化钠溶液(5 molL)中进行匀浆，操作比较困难，容易损坏捣碎机。此外，提取液需要经过l根粗大的葡聚糖凝胶柱。这些均限制了烟草蛋白结晶的制备规模。,
