《最新研究重组人白细胞介素演示文稿4.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新研究重组人白细胞介素演示文稿4.ppt（24页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、重组人白细胞介素-2,Recombinant Human Interleukin-2,赵丽娜 李文生20094710140生物技术1班,白细胞介素,定义1.由白细胞分泌的一类调节细胞生长、分化和免疫活性的细胞因子。（狭义）2.一组由多种类型细胞所分泌的、结构和功能各异的可溶性蛋白，参与细胞间信息交换，目前已发现IL-1IL-33。（广义）3.一般具有多来源、多功能和多作用途径的特点。其立体结构有三叶草型、4-螺旋束型和 三明治型等。信号转导方式有胞外因子-受体复合体相互作用和胞内信号传递途径等。,主要内容,一、作用用途二、生产制备三、药物信息四、注意事项五、发展前景,一、作用用途,为多肽类免疫
2、增强剂，是一种淋巴因子。刺激B细胞增殖分化和分泌抗体，也用于先天或后天免疫缺陷症的治疗。诱导干扰素和多种细胞因子的分泌用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗。也可各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎等。对乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有一定的治疗作用。,二、生产制备,生产制备的方式主要有两种：1、传统工艺制备2、基因工程制备其中以第二种方法为主,传统工艺流程,鸡瘟病毒，PHA,培养液,启动诱生 37,人白细胞粉,诱生白细胞培养液,灭活病毒，分离,HCl,NaOH,pH=22.5,pH=7.27.4,离心,上清液,35%硫酸铵,4，24h，离心,上清液,85%硫酸铵,4，24h，离
3、心,沉淀,10mmol/LPBS透析,pH=6.5，24h,透析内液,亲和层析上Sepharose柱,pH=6.5,亲和载体I,洗涤0.4mol/LNaCl，PBS,pH=6.5,亲和载体,吸收1.0mol/LNaCl,PBS透析,pH=6.5,IL-2组分,凝胶层析上Utrogel柱,pH=6.5,凝胶载体,0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸,pH=7.6,IL-2,基因工程制备流程,IL-2 cDNA 文库的构建,IL-2表达,利用mRNA杂交筛选,IL-2 cDNA克隆,与质粒载体pLY-4连接，并转入大肠杆菌,纯化的IL-2,制备包涵体，
4、并用凝胶过滤层析纯化,cDNA文库的构建,IL-2mRNA,逆转录酶,逆转录成单链cDNA,末端脱氧核苷酸转移酶,cDNA末端连接dCMP残基，寡聚（dG）1218为引物,DNA聚合酶I,双链cDNA,蔗糖密度梯度离心,cDNA片段,G-C加尾法,插入到pBR322质粒的PstI位点,重组质,粒转化大肠杆菌,得到IL-2 cDNA文库,三、药物信息,药典中有以下三种药物含有重组人白细胞素介素-2：注射用重组人白细胞介素-2重组人白细胞介素-2注射液注射用重组人白细胞介素-2（）,注射用重组人白细胞介素-2,1.性状及功效高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人
5、白细胞介素-2冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。用于治疗成人转移性肾细胞癌（RCC）及黑色素瘤等恶性肿瘤，也适用于癌性胸腹水的控制,2.用法用量,（1）.全身用药静脉滴注：10万一80万国际单位；皮下注射：50万100万国际单位；介入动脉灌注：40万l00万国际单位,2.用法用量,（2）.区域与局部给药 胸腹腔注射：30万l00万国际单位；肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量。一般剂量为一次20万国际单位(IU)。注：药物采用氯化钠溶解。,重组人白细胞介素-2注射液,1.性状及功效(1).性状高效表达人白细胞介素-2
6、的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为无色或者微黄色澄明液体。,(2).功效1.用于肾细胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直肠癌、淋巴癌、肺癌等恶性肿瘤的治疗，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的杀伤细胞的培养。2.用于手术、放疗及化疗后的肿瘤患者的治疗，可增强机体免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷症的治疗，提高病人细胞免疫功能和抗感染能力。4.各种自身免疫病的治疗，如类风湿性关节炎等。5.对某些病毒性、杆菌性疾病、胞内寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻风病、肺结核等具有一定的治疗作用。,2.用法用量,（1
7、）.全身用药：1)皮下注射：重组人白介素-2（125 Ala）60100万IU/m2，皮下注射3次/周，6周为一疗程。2)静脉注射：4080万U/m2加生理盐水500ml，滴注时间不少于4小时。3)介入动脉灌注50100万IU/次，24周一次，24次为一疗程。,2.用法用量,(2).区域与局部用药：1)胸腔注入：用于癌性胸腔积液，重组人白介素2（125 Ala）100200万IU/m2次，尽量抽去腔内积液后注入。2)肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量，每次用量不少于10万IU，隔日一次,46次为一疗程。,注射用重组人白细胞介素-2（）,1.性状及功效高效表达人白细胞介素-2（）基因的大
8、肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2（）冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体。人白细胞介素-2（）基因是人白细胞介素-2基因序列中原125位编码半胱氨酸的序列突变为编码丝氨酸的序列后的突变基因,2.用法用量,1.全身用药：1)皮下(或肌肉)注射：重组人白介素-2()20-100万国际单位/次，加2毫升无菌生理盐水溶解，皮下(或肌肉)注射，1-2次/天。2)静脉注射：60-200万国际单位/次，加无菌生理盐水500毫升，滴注时间不少于4小时。3)介入动脉灌注：100-200万国际单位/次。,2.用法用量
9、,2.区域与局部给药：1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔积液，重组人白介素-2()100-300万国际单位/次，尽量抽去腔内积液后注入，2-3次/周。2)心包积液：心包内注射，200万国际单位/次，尽量抽去心包积液后注入，1次/周。3)肿瘤病灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量，10-20万国际单位/次，隔日一次。,四、注意事项,不良反应：各种不良反应中最常见的是发热、畏寒、疲乏等，多与用药剂量有关；个别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状；皮下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛；使用较大剂量时，可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、末梢水肿等。神经系统受到影响，可发生行为变化、认知障碍,五、注意
10、事项,禁忌：1、对本品成份有过敏史的病人。2、严重低血压者、心肾功能不全者、高热者、肺功能异常或进行过器官移植者。3、重组人白细胞介素-2既往用药史中出现过与之相关的毒性反应。,五、发展前景,目前研究是对其在用药前进行化学修饰，主要采用PEG修饰：具体有三聚氯氰活MPEG修饰MPEG 硝基苯基碳酸盐修饰。修饰物和rhlu-2的投入比、反应环境的PH、修饰反应的时间、1%PEG4000的加入都会影响到修饰产物的活性。,五、发展前景,修饰后的产物经过疏水层析和凝胶过滤即可被提纯。目前已经证明rhIL-2 经不同的 PEG 化处理后，其循环半衰期均有不同程度的提高，其水溶性也得到极大提高，可不用 SDS 助溶在常温下保持长期稳定。,谢谢！,
