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1、ICSxx.xxx.xxXXX团体标准T/CRHAXXX-XXXX尿液有机酸气相色谱-质谱联用检测方法通则Methodofdetectingorganicacidsinurinebygaschromatography-massspectrometry（征求意见稿）XXXX-XX-XX 实施XXXX-XX-XX发布中国研究型医院学会发布目次前言Il1范围12规范性引用文件13术语和定义14缩略语25检测原理26检测技术指标27样本检测要求38样本检测方法4附录A（资料性附录）尿液有机酸气相色谱-质谱联用检测配套通用试剂8附录B（资料性附录）尿有机酸GCMS检测预处理程序9本文件按照GB/T1.1
2、-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。考虑到本文件中的某些条款可能涉及专利，中国研究型医院学会不负责对任何该类专利的鉴别。本文件由中国研究型医院学会临床数据与样本资源库专业委员会提出。本文件由中国研究型医院学会归口。本文件起草单位：XXXo本文件主要起草人：XXXo尿液有机酸气相色谱-质谱联用检测方法1范围本文件规定了使用气相色谱-质谱联用技术进行尿液中有机酸检测方法的术语和定义、缩略语、检测原理、试剂和材料、仪器和设备、检测方法、检测报告。本文件适用于应用气相色谱-质谱联用仪器对尿液中内源性小分子代谢产物有机酸的检测。2范性引用文件本文件参考并规范性引用美国
3、医学遗传学和基因组学会(ACMG)临床遗传学实验室标准和指南、CLIA法规、强制性国标(GB)、卫生组织推荐标准(WS/T)等。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6041-2020质谱分析方法通则GB/T32267-2015分析仪器性能测定术语GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法GB/T32264-2015气相色谱-单四极质谱仪性能测定方法GB/T29791.3-2013体外诊断医疗器械制造商提供的信息标示GB/T33864-2017质谱仪通用规范GB/T26124-2011临床化学
4、体外诊断试剂(盒)GB/T19702-2005体外诊断医疗器械生物源性样品中量的测量参考测量程序的说明CNAS-GLO37临床化学定量检验程序性能验证指南YY/T1244-2014体外诊断试剂用纯化水WSZT408-2012临床化学设备线性评价指南WSZT416-2013干扰实验指南WS/T420-2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证WSZT492-2016临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1气相色谱-质谱联用仪gaschromatographymassspectrometer(GCMS)一种结合气相色谱和质谱特性的分析仪器,鉴别
5、与测定待检样本中不同物质,应用于医学、物理学、食品安全、环境监测等领域。3.2质荷比mass-to-chargeratio(mz)带电离子的质量与所带电荷之比值，以mz表示。3.3质量范围massrange仪器所能测量的离子质量范围，单位为amu(AtomicMassUnit)O3. 4质量分辨率massresolution分辨两个相邻质谱峰的能力，相邻两个质谱峰，其峰谷不大于峰高的10%时，定义为可以区分。3.5质量准确性massaccuracy测定离子的质荷比与实际(理论)质荷比的偏离程度。3.6半峰宽fulIwidthathaIfmaximum(FWHM)质谱峰峰高一半处的峰宽度(W“2
6、)表示，简称半峰宽,单位为U。3.7线性Iinearity在检测样本时，可以直接按比例得出分析物含量(一定范围内)的能力。3.8线性范围Iinerrange指覆盖检测系统可接受线性关系的范围，非线性误差小于设定标准。3.9干扰interference在混合样品中分析一个组分时，影响分析结果准确性的因素。3. 10信噪比signaItonoiseratio(SN)被测物信号强度与该检测条件下基线噪声的比值。4. 11检测限Iimitofdetection(LOD)又称为检出限，指由基质空白所产生的仪器背景信号的3倍值的相应量，或者以基质空白产生的背景信号平均值加上3倍的均数标准差。这一指标只能用
7、于限度检查，而不能用于报告定量结果。5. 12定量限LimitofQuantitation(LOQ)样本中被测物质定量测定的最低量(也是成线性范围的最低浓度或量)，其测定结果应符合准确度和精密度要求。可衡量方法灵敏度与定量检测能力。常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比(S/N)为10:1时相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。4缩略语下列缩略语适用于本文件。Tle:总离子流图(totalionchromatogram)SIM：选择离子扫描(SeleCledionmOniloring)OA：有机酸(organicacid)AA：氨基酸(aminoacid)GC：气相色谱(gaschromatogr
8、aphy)MS：质谱仪(massspectrometer)EI：电子电离(electronionization)1.OQ：定量限(limitofquantitation)1.OD：检测限（limitofdetection）RSD：相对标准偏差（relativestandarddeviation）5分析原理5.1 GCMS检测原理采用含内标的样本萃取液对尿液或尿滤纸片中的有机酸进行萃取，提取物经衍生化后复溶用GCMS仪进行分析。GCMS由气相色谱仪和单级四极杆质谱仪两个部分组成，利用气相色谱仪的分离能力对尿中多种有机酸代谢物有效分离后，再通过质谱部分鉴定分离的组分（定性），使用GSMS数据库检索
9、系统进行数据分析。基于内标标准曲线定量计算出各检测指标相应含量，同时测定尿液或尿滤纸片的肌酎含量,以mmol/LmmolCr为单位。5.2 校准尿有机酸分析需采用至少两种以上的标准物质作为内标，内标的选择因实验室而异，但内标必须是不存在于人体样本中，并且可以通过气相色谱法与其他化合物分离的可识别物质。内标一是用于评价提取效率,并将患者样本中的代谢物浓度与校准标准进行直接比较。常用的内标包括十七酸、2-苯基丁酸、托品酸、2-酮基己酸、对氯苯甲酸和二甲基丙二酸等。内标二在衍生化之前（也可在样本提取时）加入，用于评价仪器状态与衍生化程度，通常采用二十四烷作为第二种内标。5.3 定量尿有机酸浓度的定量
10、尽可能通过内标标准曲线法完成。为程序中定量的每个分析物准备校准曲线,校准曲线线性范围必须涵盖人体正常范围和目标疾病阳性浓度范围。校准曲线系列溶液应包括定量有机酸的至少5个以上浓度梯度以及加入已知量的内标物。在待测物中加入与标准曲线相同量的内标物，可以使用化合物的单个定量离子进行定量，计算目标化合物与内标的峰面积比，然后使用校准曲线斜率（相对校正因子）获得定量结果。不建议在不使用特定参考标准的情况下进行定量。6定量检测技术指标1.1 线性评估线性时至少要求五个不同浓度水平样本，每个浓度水平重复测定3次，分析结果做回归分析，一元线性回归曲线，R20.9900o1.2 线性范围标准曲线应覆盖样品可能
11、的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120%,下限为样品最低浓度的80%（但应高于LoQ）。1.3 精密度在规定条件下所获得独立检测结果的接近程度，用测定6次结果进行相对标准偏差（RSD）评价。1.4 准确度采用标准物质进行对照试验，在无标准物质或标准方法时，常用加入被测组分的纯物质进行回收试验来估计和确定准确度。两个及以上浓度样本检测回收率在80%120%以内。1.5 重复性即检测结果的重复性，在相同检测条件下对同一待测物进行连续多次测量所得结果的一致性。在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。1.6 定量限定量限应不大于报告范围的最低浓度，定量限确定一定要是连续进样，
12、通常建议平行测定6次（因其要符合准确度和精密度要求），且6针信噪比（S/N）均要l（kl.1.7 分析灵敏度全扫描灵敏度（电子轰击源EI）：IPg八氟蔡，信/躁比（S/N）200:1;选择离子扫描灵敏度（电子轰击源ED：20fg八氟蔡，信/噪比（S/N）10lo1.8 患者结果可报告范围测量仪器的误差在特定范围内的一系列分析物的测量结果，计算测定值与预期值比值R,取80%R120%的浓度范围为可报告范围。6. 9参考范围每个实验室应根据其使用方法建立参考范围，并定期验证所有报告的定量化合物的参考范围，参考范围应利用内源肌酎浓度进行归一化。当使用基于文献报道的参考范围时，必须定期验证。7半定量检
13、测技术指标国内大部分实验室已经建立了尿液有机酸代谢谱库，并通过有机酸代谢物特征离子与内标峰面积比值进行半定量测定。正常人尿液中，有机酸指标的含量与肌酸酎含量之比有固定的数值范围，因此,有实验室以人尿液中排泄量较为稳定的肌酸酎作为内标，用有机酸特征离子的质谱色谱峰面积与肌酸酎特征离子的质谱色谱峰面积比值作为半定量结果。也有以较为稳定的内标（如托品酸、十七烷酸）进行半定量分析。每个实验室根据所采用的的方法建立相应的本地化参考区间。8样本分析要求6.1 样本要求7. 1.1尿液推荐使用原始尿液进行检测，建议采集量26mlo新鲜尿液应收集在不含防腐剂的干净容器中，尽快冷冻，并冷冻保存直至分析。未冷冻尿
14、样，低温冷藏（28）保存不宜超过4小时。如果尿液样本出现以下任一情况将视为不合格：a）无检测申请单或检测申请单内容与样本信息不符；b）容器有破损：管壁有裂缝或开盖、盖子未盖紧等；c）样本量不足：尿量小于2mL；d）没有及时寄送的样本，未采取冷藏（2C8C）或冷冻保存；e）样本递送未采取冷链运输，冻存样本融化。7. 1.2干尿滤纸片无冷藏、冷冻条件的可制作干尿源纸片。制作过程参考如下：（1）使用2片新华3号滤纸（4cmX4cm）完全浸透于尿液中；（2）浸泡时间215min,于干燥阴凉避光处晾干，自封袋密封保存；（3）及时常温快递或冷链运送。如果干尿滥纸片样本出现以下任一情况将视为不合格：a）无检
15、测申请单或检测申请单内容与样本信息不符；b）放置时间过长：样本自采集至晾干超过1天。自制作完成至到达实验室超过20天；c）样本潮湿、发霉，有笔迹黑点等污染（晾干过程尿流纸片最好悬空不与物体接触，若必须接触应保证接触物干净无污染）；d）样本非自然晾干（推荐晾干方式：室温下放置约24小时自然干燥）；严禁将尿滤纸片放置于如电吹风、暖气、电炉、阳光及强光灯等热源下烘烤；e）样本量不足：尿滤纸片少于2张或者尿滤纸片载尿时未完全浸透仅负载少量尿样，实际复溶出的尿液不满足实验用量）。2、7.1.3采集时机及长期保存采集随机尿液，无需晨尿。采集前避免短时间内大量饮水、服药。如果患者出现疑似疾病急性发作（或失代
16、偿），推荐采集急性（失代偿）期尿样。因为在目标疾病急性期尿液中的诊断标志物浓度最高，利于疾病的检出和鉴别。尿液或滤纸片送至实验室后，应保存在-20或更低温度，尽快完成检测。完成检测后的样本推荐在-20C冷冻保存3年，以备复测。8.2检测试剂与材料a）检测用纯化水：检测用纯化水应符合YY/T1244-2014要求；b）尿素酶：尿素分解试剂，用于样本前处理除去尿液中的尿素；c）十七烷酸：内标，用于各检测物质定量；d）二十四烷：二级内标，用于评价衍生化效率；e）托品酸：二级内标，用于评价仪器检测性能；f）乙酸乙酯：样本提取试剂，用于样本纯化；g）盐酸羟胺：质化反应试剂，用于样本前处理过程；h）硅烷化
17、试剂：N,。-双（三甲基硅）三氟乙酰胺（含三甲基氯硅烷）（N,OBis（trimethylsilyl）triAuoroacetamidewithTrimethylchlorosilane,BSTFA:TMCS=99:1）,用于有机酸衍生化；i）正己烷：辅助试剂用于设备以及进样针清洗；j）丙酮：辅助试剂用于设备以及进样针清洗；k）甲醇：辅助试剂用于设备以及离子源清洗；D盐酸：月亏化反应试剂，用于有机酸预处理；）质控:托品酸及二十四烷作为内标质控,可准确监测样本前处理和仪器分析是否符合质控要求。如使用商品化检测试剂盒，则按说明书进行相应操作。8.3检测设备a）有机酸提取设备：电热恒温箱，符合仪器出
18、厂标准；b）有机酸浓缩设备：氮气吹干仪，符合仪器出厂标准；c）有机酸纯化设备：低速离心机，符合仪器出厂标准；d）有机酸检测设备：气相色谱-质谱联用仪，符合仪器出厂标准。所有使用设备应定期校准并符合强制性国标要求。8.4样本检测体系的要求8.4.1检测试剂检测试剂来源分商品化试剂和实验室自建试剂，所有化学试剂均要求色谱级或以上。（1）如条件允许且检测性能满足需求，应优先选择商品化试剂；（2）自配试剂和标准溶液必须遵守操作规程，试剂配制完成后及时贴标注明试剂名称、浓度、配制日期、批号、有效期和配置人；（3）试剂存管规范化：专人负责，分类存放，并定期检查使用及余量情况。领用时需填写记录,过期或失效试
19、剂经审核后作报废处理；（4）建立危化品及易制毒试剂管理程序，分类并使用专柜存放，由两人以上保管，需填写相关实验记录，保护人员安全。8.4.2检测性能用于尿有机酸检测的检测体系，应至少经过以下性能指标的确认：仪器校验、标准曲线线性、线性范围、分析灵敏度（最低检测限/检出限）、准确度、精密度、稳定性、重复性、干扰物质、参考范围等。8.4.2.1仪器校验使用仪器检测前需进行校验，完成设备调谐：仪器只有在密封性、质量数、响应度良好的条件下才能保证分析结果可靠,因此在首次装机或进行维护后对气相色谱-质谱联用仪进行漏气检查及仪器调谐。打开灯丝，通过检测水峰、氮气峰、氧气峰的比例（即水和氮气相对丰度比小于2
20、00%；氧气和氮气相对丰度比小于25%）,判定仪器是否存在漏气，若漏气需检查进样口端、载气净化单元、色谱柱接口部分等位置排除漏气问题。不同品牌、型号的仪器调谐指标略有差异，调谐指标有7点：（1）检查m/z69、m/z219.m/z502的FWHM（半峰宽）值是否在0.50.7之间；（2）检查检测器电压是否有超过2kV；（3）检查基峰值是否为质荷比（mz）18或69；（4）检查质荷比（m/z）502的相对强度比率是否至少为2%；（5）检查质荷比（m/z）69的峰强度是否至少是质荷比（m/z）28峰强度的两倍；（6）检查峰形是否有明显的分叉，峰型是否对称；（7）检查质荷比（m/z）理论值与实际测定
21、值相差是否在0.1之内。8.4.2.2标准曲线线性所有有机酸标准品检测采用定值标准物质（如I：国际参考品、国家参考品、厂家参考品）进行确认，标准曲线的斜率，每一个标准品标准值的允许偏差，和回归线性（R2O.99OO）都应该建立一个接受标准，只有满足要求的标准曲线才能用于样本分析。在实际运营中，建议1个标准曲线设置至少6个浓度的标准品，最多允许一个浓度不纳入标准曲线斜率的计算，这样就不会因为一个标准品的离群值而影响整个批次的分析结果。8.4.2.3线性范围采用定值标准物质进行确认，线性范围上限不低于样品最高浓度的120%,下限不高于样品最低浓度的80%（但应高于LOQ）。8.4.2.4分析灵敏度
22、（最低检测限/检出限）检测体系应进行分析灵敏度/最低检测限/检出限(以下称检出限)的确认。有定值标准物质(如I：国际参考品、国家参考品、厂家参考品)时，采用定值标准物质进行确认，尿有机酸分析检测系统灵敏度常采用八氟祭作为标准品进行验证，全扫描灵敏度(电子轰击源EI):Ipg八氟蔡：信/躁比(S/N)200:1；选择离子扫描灵敏度(电子轰击源ED：20fg八氟蔡,信/噪比(SN)10:1。检出限应不大于报告范围的最低浓度，通常建议采用特定浓度标准物质连续进样平行测定6次(因其要符合准确度和精密度要求)，且6针信噪比(S/N)均要l(kl.8.4,2.5准确度检测体系应通过与参比方法进行比较，评估
23、方法符合率。参比方法包括但不限于：金标准方法、行业公认方法、经性能验证符合要求满足预期用途的方法等。各检测指标定量结果较理论浓度偏差值20%O8.4.2.6精密度检测体系应通过与参比方法进行比较，评估方法符合率。参比方法包括但不限于：金标准方法、行业公认方法、经性能验证符合要求满足预期用途的方法等。在性能评价过程中需运用实验室的常规质控程序以及物质，推荐使用两个或两个以上可能接近实验室内“医学决定水平”浓度的样本，最少操作天数20天进行独立精密度评价。在每个测试天，需分析两个样本两个独立的批次(当“批”是目标仪器操作运行的一项重要成分时)至少两个水平的分析物浓度。在每批中至少检测一个质控样本。
24、批内检测值CVVI5%,批间检测值CV20%为合格。8.4.2.7稳定性应对整个检测体系的保存稳定性进行测试，可采用加速实验确认。对成品试剂，也可采信厂家声明的保存期限。8.4.2.8重复性检测体系应保证同一检测体系下检测结果的可重复性，在批内和批间检测中，同一样本同一检测体系下获得的检测结果应一致。尿有机酸检测重复性性能验证时，采用八氟蔡(OCtaflUOrOnaPhthaIene,OFN)100pgL,连续5个数据峰面积重现性CV5%,保留时间重现性CV1机8.4.2.9干扰物质的影响由于尿液样本中的杂质较多，部分目标化合物保留时间附近可能存在干扰峰，可以将目标物质谱图与NIST谱库中标准
25、质谱图进行比较并确认。同时，可采用背景扣除结合提取离子，使谱库检索更精确。8.4.3信息分析系统检测体系应有对应的数据分析系统，包括气相色谱-质谱联用仪数据采集、定性定量分析及报告显示软件系统产生的数据文件与质控分析报告：(1)设备软件系统对检测样本进行各种有机酸目标物与内标的峰面积积分，可快速批处理样本检测结果及单个样本的快速分析；允许设置定量积分参数进行检测结果校正；计算出多种分析物的定量数据文件；(2)数据文件，包含样本编号、各检测物质浓度、匹配度、保留时间等数据信息；（3）质控分析，将各质控物质浓度导入分析系统，自动计算均值与相对标准偏差，生成质控监测图，并标注出超出质控范围的结果；（
26、4）报告分析系统，将分析物浓度与患者信息自动匹配导出结果数据，并与设定的正常参考区间进行自动比较，显示标注超出正常参考区间的结果。8. 4.4检测人员临床检验诊断学、临床理化检验、分析化学或相关专业背景，根据相关技术标准、规范完成相关检测工作。9尿有机酸分析8.1 仪器分析选择气相色谱-质谱联用仪时，需考虑：（1）精密度、检出限、离子化效率、离子源峰型、数据采集时间、分辨率、检测效率、背景噪声、灵敏度等；（2）仪器检测通量，即每天可检测的标本量；（3）其他因素：实验室使用习惯、仪器成本等。首选用于新生儿遗传代谢病尿液有机酸的检测仪器是气相色谱-单四级杆质谱联用仪（GCMS）。该仪器配备的电子轰
27、击源（CleCtronioniZation,ED是最常用的离子化模式，电离效率高，谱图特征性和重复性好，通过碎片模式可得到大量的结构信息，被90%的气相色谱-质谱联用仪所采用。其次，四级杆质量分析器适用于中小分子有机酸化合物的定性和定量分析，实验人员可灵活配置和调用全扫描（full-SCan）模式（用于定性）和选择离子扫描（SeIeCtedionmonitoring,STM）模式（用于定量），更好地服务于临床实验。8.2 检测体系的性能验证/确认检测前应对检测体系进行性能验证/确认。对于检测体系的性能验证应涵盖实验及分析的全流程。指标应至少包括分析灵敏度（最低检测限/检出限）和方法符合率。并根
28、据实际检测需要，对检测体系的其他检测性能指标进行验证。检测体系的验证/确认应由实验室负责人审批并有书面记录。在检测流程发生变更时，需进行重新验证/确认。再次验证/确认实验需覆盖全部或部分步骤，视操作程序的修改程度而定。8.3 检测准备9. 3.1检测申请及检测信息登记根据检测需求，制定检测申请/检测信息登记内容。应至少包括：样本来源信息、样本唯一性标识、样本类型、申请的检测项目、样本采集日期等信息。9. 3.2样本采集及保存运输实验室应根据实验要求，制定样本采集及保存运输的相关标准，并对样本采集人员、样本保存和运输人员进行培训。样本保存运输过程中，应有对保存运输条件是否符合要求的监控措施，并匹
29、配必须的硬件。9.4样本检测流程9. 4.1样本接收检测实验室接收样本时，应对检测申请/检测信息登记进行核对；应对到达实验室的样本是否合格进行判断。判断的内容包括但不限于：样本采集是否合格，样本保存运输过程中是否符合要求，待测样本容器和待测样本标签是否完整，样本到达实验室时状态是否符合要求等。以上判断应有相关的操作说明。判断合格的样本方可进入实验室进行检测。9.5样本前处理：有机酸提取9.5.1样本预处理样本前处理基于溶液进行，如采用尿滤纸片，则需要进行超纯水复溶，流程如下：(1)取一片尿滤纸片，剪至1cm1Cln合计16个碎片，放置于IOmL离心管中，加入2.5ml,超纯水，浸泡IOmin；
30、(2)离心4000rpm,5分钟，取上清液(注意须无纸片残渣)。9.5.2尿肌酎测定尿肌酢为尿液中最稳定的代谢产物，参考尿中肌酊分光光度测定方法(WS/T97-1996)标准，采用紫外分光光度计对尿液或尿滤纸片更溶液中的尿肌酊进行定量检测。9.5.3半定量样本前处理取0.2mg肌酎当量的尿液或尿滤纸片复溶液进行前处理，流程包括去除尿素、添加内标、眄化反应、液液萃取、氮气吹干、衍生反应、转移上机等。(1)去除尿素：尿样中加入20尿素醐(40units),混匀后37恒温孵育30分钟，分解尿素，消除干扰；(2)添加内标：孵育完的尿样和质控液中分别加入40HL内标(含十七烷酸、托品酸)，纯水定容至2m
31、L,振荡IOS充分混匀；(3)后化反应：加入5N(molL)的氢氧化钠调节PH值至1214,加入5%盐酸羟筱，充分振荡混匀后室温下反应60分钟，再加入盐酸(37%)调节PH值至L0;(4)液液萃取：加入3ml乙酸乙酯，充分混匀后400OrPm离心5min,上层有机相转移至干燥洁净的离心管，重复上述萃取转移操作一次，合并有机相；(5)氮气吹干：将离心管置于可加热型氮吹仪中，在常温或60C下，将有机提取物氮吹至干,约耗时30min;(注意应避免吹干过度造成降解以及不完全干燥造成的衍生化效率降低)；(6)衍生反应：加入N,0-双(三甲基硅基)三氟乙酰胺(含1%三甲基氯硅烷)(BSTFA+TMCS,9
32、9:1)或成分类似的商业试剂，在70C孵育30min,让尿液提取物中的有机酸形成稳定的甲基硅烷化衍生物；(7)转移上机：待衍生物自然冷却至室温后，转移至色谱进样瓶内插管，上机分析。9.5.4定量样本前处理用移液器加入IoOUL待测尿液或尿施纸片复溶液进行前处理，流程包括去除尿素、添加内标、蛋白沉淀、月弓化反应、氮气吹干、衍生反应、转移上机等。(1)去除尿素：尿样中加入20尿素陋(40UnitS),混匀后37恒温孵育30分钟，分解尿素，消除干扰；(2)添加内标：孵育完的尿样和质控液中分别加入40uL内标(含十七烷酸、托品酸)，纯水定容至2mL,振荡IOS充分混匀；(3)沉淀蛋白：ImL移液器移取
33、900HL冰乙醇，涡旋5s后，在冷冻离心机中以4C,14000rpm冷冻离心IOmin。注意提前开启离心机，以达到所需温度(4)月号化反应：用IOoUL移液器移取0.2%羟胺乙醇溶液50IlL至每个离心管，振荡5s,60反应10分钟；(5)氮气吹干：将离心管置于可加热型氮吹仪中，在常温或60C下，将有机提取物氮吹至干,约耗时30min;(注意应避免吹干过度造成降解以及不完全干燥造成的衍生化效率降低)；（6）衍生反应：加入100HLN,0-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺（含1%三甲基氯硅烷）（BSTFA+TMCS,99:1）或成分类似的商业试剂，在70孵育20min,让尿液提取物中的有机酸形成稳定的
34、甲基硅烷化衍生物；（7）离心、转移上机：硅烷化反应完成后，冷却至室温，转移至色谱进样瓶内插管并以1400OrPm常温离心4min后，上机分析。9.6样本检测结果9.6.1质谱检测结果质谱检测结果应包含但不限于以下内容：检测样本标识信息、检测目标化合物名称和通用标识、目标化合物浓度值、参考范围等信息。9.6.2样本检测报告样本检测报告包含但不限于以下内容：a）样本信息：样本来源信息、样本唯一性标识、样本类型、样本状态、采样日期、送检日期、以及用于判断结果所必须的其他信息等；b）检测信息：检测方法、检测项目、检测范围、必要的检测性能指标、实验室名称、实验室联系方式、检测人员、审核人员、检测结果对应
35、的解释或数据资料、样本接收日期、报告日期等。9.7检测质量控制与管理9.7.1实验室要求a）实验室区域设置和环境需要满足实验环节和仪器的要求，并根据应用领域，符合相关检测实验室的规范；b）检测人员、分析报告人员等应具备相应的专业背景，经过专业培训并取得上岗资质；c）实验室检测体系应优先选用商品化的检测试剂；d）实验室自建方法应有严格的试剂制备标准操作规程，并经性能验证合格后方可使用。9.7.2检测过程的质量管理a）实验室应建立质量管理体系,对检测全流程进行管理。对样本采集和保存运输、检测实验操作、分析和报告等各个环节均需建立相应的标准操作规程（SOP）；b）实验设备应妥善管理，所有实验设备均需
36、有相应的标准操作规程，根据仪器需要进行定期维护和校准；c）检测体系需经过性能验证后方可投入使用；d）实验过程应设置相应的质控品进行室内质量控制，通过商品化途径购买的或自行配制的质控品，其产品说明书中需标明靶值及适用范围、生产批号、有效期。实验室自配质控品需标注生产批号、生产日期、有效日期，-20以下冷冻保存。实验室需对质控品检测结果进行记录和评价，并定期进行回顾分析；e）内标质控品：通过内标质控化合物二十四烷和托品酸实际保留时间、与十七烷酸峰面积比值，监测整个样本检测流程；f）室内质控品：以尿液为基质的室内质控品，至少设定两个及以上浓度水平，浓度区间需包含目标化合物的阳性测定值；g）质控规则：
37、实验室应建立适用的质控规则用来监控随机误差和失控原因。首次启用质控品进行多次质控测试（220次），计算平均值和标准偏差，选择WCStgard质控规则，绘制质控图每次质控结果做好质控记录：h）样本监控：实验室对健康人群分析物结果数据进行监测，每个化合分析物的平均值在每次实验条件不变的情况下计算，得到数据累计平均值及标准方差，将单次结果与累计数据展开对比，若本次结果超出累计数据结果，则表明本次实验过程可能出现偏差，问题点可能发生在检测试剂成分或使用环节错误、尿滤纸片的收集或复溶错误、尿肌肝浓度测定误差，或样本运输保存环节错误。发现问题应即时遵从质量控制纠错方案执行改正优化工作；i）保留时间的监测：
38、离子对是质谱特异性的指标，而保留时间则是色谱特异性的指标，使用这个指标可以有效地排除干扰物。分析物的相对保留时间的接受标准应该在验证的阶段就建立起来，在接受标准（0.01min）以外的色谱峰很可能是样本中与目标分析物色谱行为非常相似的干扰物所产生；j）实验室应定期参加相关检测项目的室间质量评价或能力验证，或者通过实验室间比对，判断检测结果的可接受性。附录A尿有机酸GCMS检测配套通用试剂尿有机酸GCMS检测配套通用试剂宜采用成熟的预处理试剂，包括但不限于有机酸萃取、的化反应,硅烷化反应、标准曲线、酶解等试剂，在不同应用条件下可进行适应性调整，推荐配方如下：表A.1尿基质配方表试剂名称质量(mg)体积(UD尿素1800/尿酸10/肌醉150/葡萄糖10/无水硫酸钠100/氯化钠400/氯化钾200/牛血清蛋白50/瓜氨酸20/盐酸溶液/170氨水/150超纯水/1680磷酸二氢钠400表A.20.2%羟胺乙醇溶液配制配方表配制总量(11)L)称取羟胺质量(mg)乙肝体积(mL)510-1.96127146.9表A.30.2mol/L盐酸溶液配方表试剂名称浓度体积(mL)浓盐酸37%1超纯水/9附录B尿有机酸GCMS检测预处理程序尿有机酸GCUS检测预处理程序包括但不限于样本前处理、酶解（除尿素）、添加内标、月亏化、液液萃取、硅烷化反应等。推荐程序如下：前处理程序图需改动步骤操作
