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1、网织红细胞检测技术 及临床应用,任燕歌,概 念,网织红细胞（reticulocyte,Ret或Reti）界于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞。因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后，呈现点状或线网状结构，故名网织红细胞。,多能干细胞,红细胞发育过程图,各种网织红细胞,网织红细胞检测技术,网织红细胞计数方法,活体染色手工镜检 血液自动分析仪法 流式细胞术检测法,手工镜检法,原理 活体染料的碱性着色基团（带正电荷）可与网织红细胞RNA的磷酸基（带负电荷）结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成有色的点状、线状甚至 连缀成网状结构，而血红蛋白着色相对较淡。借此在光镜下与成熟红细
2、胞相区别。,操作方法,取干净试管一只，加入10g/L煌焦油蓝溶液23滴，然后加入等量的血液混匀后放置1520min，使红细胞充分染色；取少许染色好的血液，在洁净载玻片上推成薄而均匀的血膜，干燥后用瑞氏染液复染(也可不复染）；在显微镜低倍镜下选择细胞分布均匀着色清晰的部位，用油镜在血片上计数至少1000个红细胞分布区域内的网织红细胞再除以1000计算出网织红细胞的百分率。同时进行红细胞计数，可计算网织红细胞的绝对值。,活体染色图,常用仪器检测,ADVIA120仪器 对Retc可提供6个参数，包括网织红细胞总数（Retic#）、网织红细胞百分比（Retic%）、网织红细胞平均体积（MCVr）、单个
3、网织红细胞平均血红蛋白浓度（CHCMr）、网织红细胞分布宽度（RDWr）、单个网织红细胞血红蛋白含量（CHr）等其中意义最大的除了总数，百分比以外，最重要的网织红细胞血红蛋白含量（CHr）参数。最大的优点之一是随时可计数Retic,十分便利，而且计数的细胞多，故很准确。,检测仪器,根据网织红细胞发射荧光强弱来判别区分网织红细胞成熟程度，不同成熟阶段的网织红细胞含有不同量的RNA，从而根据荧光强度而获得低、中、高荧光强度网织红细胞群。,L,M,H,检测技术,流式细胞术（flow cytometry）原理 RNA经碱性荧光染料处理后，根据荧光强度反映细胞内RNA含量，可将Reti分为高荧光强度网织
4、红细胞（HFR）、中等荧光强度网织红细胞（MFR）和低荧光强度网织红细胞（LFR）三部分。利用上述三个指标可计算网织红细胞的成熟指数（reticulocyte materation index,RMI）。RMI对评价骨髓移植后造血功能恢复情况和EPO的疗效，以及监护放、化疗对骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。,检测图示,网织红细胞平面散射图,方法学评价,手工镜检法的优点是便捷、成本低。目前仍为临床实验室的常规检验方法。但致命的缺点是影响因素多、重复性差，CV20%，以低Reti的标本尤为明显。即使进行绝对值计算，也因Reti计数不准确、某些贫血网织红细胞提前释放而失去其可靠性。这些不足严重影响了
5、该指标的临床应用。须加强质量控制，必要时对计数结果加以校正。,方法学评价,自动化仪器在许多方面具有标准化程序，试剂稳定、反应时间一致，计数细胞量大、具有质控和校准能力，因此在精密度和准确度上明显优于显微镜计数法。但仪器价格比较偏高，试剂成本和质控成本大，影响到基层医院、小型实验室的使用期望及推广。,临床应用部分,临床参考范围,目前临床上网织红细胞的参考范围为成人：0.8%2.0%,绝对值（2575）*109/L新生儿：2.0%6.0%网红的总数或百分比对贫血的临床诊断及疗效观察非常有价值，是血液最常做的项目之一。,临床意义,网织红细胞不仅仅是个计数参数问题，更有许多新的参数被引入临床应用、科研
6、和基础研究。网织红细胞的增加或减少直接反映了骨髓红细胞的生成能力，主要用于对红细胞减少性疾病、溶血性贫血、治疗监测或骨髓移植后骨髓造血功能的恢复、监测放疗和化疗对骨髓造血功能的影响评估等方面。,网织红细胞增高,提示骨髓造血功能旺盛见于各种增生性贫血如缺铁性贫血、巨幼细胞性(缺乏叶酸、维生素B12)贫血、失血性贫血,尤以 溶血性贫血时增加最为显著,常10%。缺铁性贫血及巨幼细胞性贫血在给予铁剂、维生素B12、叶酸治疗之后,可见网织红细胞明显增加。,小细胞贫血,单个网红内血红蛋白含量（CHr）,小红细胞比率（%Micro）/低色素红细胞比率（%Hyp）即M/H对缺铁性贫血是很好的指标。,缺铁性贫血
7、,缺铁性贫血,正细胞贫血,网织红细胞减低,提示骨髓造血功能低下,常见于 再生障碍性贫血。绝对值低于5109/L可做为急性再生障碍性 贫血的辅助诊断指标。此外，还可见于骨髓浸润性贫血如急性白血病等。,图2 骨髓浸润性贫血,图1 再障性贫血,大细胞贫血,网织红细胞反应,缺铁性贫血或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2-3d后，网织红细胞计数值开始上升，7-10d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。该过程表示贫血得到纠正。若网织红细胞居高不下，提示尚未达到治疗效果。,重要分析参数,网织红细胞血红蛋白含量（CHr）BAYER ADVIA120 血液
8、分析特有的测定参数之一，目前被认为具有诊断和疗效观察价值的新的网织红测定参数。CHr已经被FDA认可作为临床报告参数，正常人CHr 28.0 pg/L,网织红细胞成熟指数,网织红细胞成熟指数（RMI）计算参数计算公式：RMI=（MFR+HFR）/LFR 100%RMI对评价骨髓移植后造血功能恢复情况和EPO的疗效，以及监护放、化疗对骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。,临床价值,血液病的诊断和治疗 网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，在周围血液中的数值可反映骨髓红细胞的生成功能，因而对血液病的诊断和治疗反应的观察均有其重要意义。放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。,前景展望,网织红细胞分析具有很广泛的应用前景，新技术和新参数的应用给临床诊断治疗 和监测带来新的研究方向和发展。,谢谢！,
