《HIV病原学与实验室生物安全.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIV病原学与实验室生物安全.ppt（57页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、HIV病原学及实验室生物安全,病毒所 关恒云,1,获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV),3,一、HIV病原学,HIV的结构,病毒呈球形，直径100120nm，电镜下可见一致密的圆锥状核心核心：2个逆转录酶-将RNA转录成DNA。蛋白酶(p11)-将大片断蛋白切小。整和酶(p32)-将HIV原病毒DNA插入宿主细胞DNA中。核衣壳蛋白(p24,p17)包膜：脂质膜：“借用”宿主细胞的细胞膜。gp120-病毒的膜蛋白，可与被感染细胞CD4相结合部分。
2、gp41-病毒的膜蛋白，跨脂质膜的部分。,HIV基因结构,HIV基因组由两条单链RNA组成，每个RNA基因组约为9.7kb，编码9个基因。3个结构基因gag、env和pol，6种调控基因tat,vif,vpr,vpx(vpu),nef,rev。,5,gag基因编码病毒的核心蛋白；pol基因编码病毒复制所需要的酶类（逆转录酶、整合酶和蛋白酶）；env基因所编码病毒包膜蛋白。调控基因编码辅助蛋白，调节病毒蛋白合成和复制。,6,HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合,第二受体,与HIV有关的辅助受体有2类：CC型辅助受体：CCR1,CCR2b,CCR3,CCR5 CXC型辅
3、助受体：CXCR4CCR5是最主要的第二受体，第二受体基因在不同人种中遗传的突变率有明显差异。,8,现有两型HIV：HIV-1和HIV-2种类HIV-1M（Major）组AD、FH、J和 KO（Outlier）组ON（Non-M non-O）组NHIV-2A H特点 不同亚型传播途径和致病性不一,对抗-HIV药物引起耐药不同 亚型重组意义 流行规律、传播途径、诊断质量、药物与疫苗评估,9,10,急性感染期无症状期艾滋病期,11,二、HIV感染史,感染艾滋病病毒后12周左右。HIV大量复制,CD4细胞急剧下降，5070%的感染者出现HIV病毒血症和免疫系统急性损伤所产生的临床症状。主要表现在全身
4、性以及皮肤、神经系统和肠道的症状。,12,Weeks,CD4 T Cells/mm3,Plasma Viremia Titer,0,3,6,2,11,1,10,9,12,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100,1100,Years,3,4,5,6,7,8,9,0,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512,Primary Infection,Possible acute HIV syndrome Wide dissemination of virusSeeding of lymphoid orga
5、ns,Clinical Latency,Constitutional symptoms,Opportunistic disease,Death,13,急性HIV感染后，绝大多数有一个较长的、存在个体差异的无症状期，8-10年左右。有5%左右的HIV-1 感染者没有任何临床症状，而且能够维持正常的免疫状态达12年以上，称之为感染HIV-1的长期不感染者。,14,Weeks,CD4 T Cells/mm3,Plasma Viremia Titer,0,3,6,2,11,1,10,9,12,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100,1100,Year
6、s,3,4,5,6,7,8,9,0,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512,Primary Infection,Possible acute HIV syndrome Wide dissemination of virusSeeding of lymphoid organs,Clinical Latency,Constitutional symptoms,Opportunistic disease,Death,15,在长时间的无症状期或表现为ARC以后，病人可以出现不明原因的渐进性消瘦、发热、乏力，继而发生“机会性”感染，如卡氏肺囊虫性肺炎或中
7、枢神经系统的感染，这是大多数AIDS病人死亡的直接原因。未经治疗者平均生存期为1218个月。,16,Weeks,CD4 T Cells/mm3,Plasma Viremia Titer,0,3,6,2,11,1,10,9,12,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100,1100,Years,3,4,5,6,7,8,9,0,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512,Primary Infection,Possible acute HIV syndrome Wide dissemination of
8、virusSeeding of lymphoid organs,Clinical Latency,Constitutional symptoms,Opportunistic disease,Death,17,HIV感染的三种临床类型,典型进展者 在感染早期，其免疫功能未受损害，但在810年内免疫能力逐渐下降，最后发展成为艾滋病。,2-6 weeks,mean of 10 years,Asymptomatic phase,Flu-likeDisease,Symptom-atic phase,AIDS,Infection,Seroconversion,Death,CD4 T cell deplet
9、ion,HAART,HIV 感染的临床过程(典型进展),快速进展者 CD4细胞计数在25年内迅速下降。快速进展者中最显著的特征是HIV感染后一直维持较高的病毒载量，而且分离的HIV有均一性。,HIV 感染的临床过程(快速进展),2-6 weeks,mean of 5 years,Asymptomatic phase,Flu-likeDisease,Symptom-atic phase,AIDS,Infection,Seroconversion,Death,CD4 T cell depletion,HAART,长期存活者(长期不进展者)维持健康状态8-10年以上，CD4细胞计数维持正常。810%
10、。目前最长已达17年。这些无症状者可在血友病患者、静脉吸毒者、异性接触者和新生儿中发现。,HIV 感染的临床过程(缓慢进展),HIV 感染的临床过程(缓慢进展),2-6 weeks,mean of 20 years,Asymptomatic phase,Flu-likeDisease,S,Infection,Seroconversion,Death,CD4 T cell depletion,A,HAART,三、实验室生物安全,25,保证实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害符合相关法规、标准等对实验室保证生物安全责任的要求,实验室生物安全
11、 laboratory biosafety,实验室的生物安全管理,三个宝典：病原微生物实验室生物安全管理条例实验室生物安全通用要求GB 194892008人间传染的病原微生物名录,人间传染的病原微生物名录,名录涉及的病原微生物种类,应依据国家相关主管部门发布的生物危害分类名录，在风险评估的基础上，确定实验室的生物安全防护水平。,人间传染的病原微生物名录,生物安全防护水平的确定,HIV在外界环境中的生存能力弱 对消毒剂敏感 对臭氧敏感 对紫外线不敏感 56,30min灭活 干燥环境：数分钟内死亡,实验室采用的消毒灭菌条件,表面消毒：75%乙醇 喷洒或擦拭浸泡消毒：0.5%次氯酸 30min空气消
12、毒：30mg/m3臭氧 30min 24%甲醛 熏蒸12h高压蒸汽灭菌条件：121 30min,HIV传播途径,不经空气传播，血、性、母婴垂直传播。经破损皮肤感染是HIV职业暴露的主要途径。禁入：免疫力低下、感冒发烧者、皮肤破损者禁用：锐器：剪刀、针头、刀片、玻璃器材穿个人防护装备，戴双层乳胶手套，“检漏”,生物安全实验室标准的良好工作行为,建立并执行准入制度。,实验室技术培训合格,生物安全培训合格,对个人行为的要求，如在实验室工作区不要饮食、抽烟、处理隐形眼镜、使用化妆品、存放食物等,个人防护装备,1、眼镜（安全镜、护目镜）2、口罩、面罩、防毒面具 3、帽子 4、防护衣(实验服、隔离衣、连体
13、衣、围裙)5、手套 6、鞋套 7、听力保护器等,工作时穿防护服。在处理生物危险材料时，穿着适用的指定防护服。离开实验室前按程序脱下防护服。用完的防护服要消毒后再洗涤。工作用鞋要防水、防滑、耐扎、舒适。,防护面罩,一次性面罩,紧急洗眼（常用装置）,便携式洗眼装置,固定式洗眼装置,清洁地面的时间视工作安排而定，不在日常工作时间做常规清洁工作。用浸有清洁剂的湿拖把清洗地板是最常用的方法；家用型吸尘器不适用于生物安全实验室使用；不要使用扫帚等扫地。,GB 194892008,气溶胶,离心、研磨、混合、剧烈振荡或混匀、超声破碎、动物的鼻腔内接种、从动物或胚胎中收集感染性组织、吸管吹吸混匀、摔碎菌液瓶等均
14、可产生。80%的实验室操作可产生气溶胶。正确使用生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。生物安全柜同时也能保护环境。,职业暴露：指医务人员从事诊疗、护理、检验等工作过程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其他锐器刺破皮肤，有可能被艾滋病病毒感染的情况。摘自全国艾滋病检测技术规范（2009）,影响针头刺伤后的危险性因素,伤口的深度有可见的血液从伤口溢出针头刺破了静脉或动脉污染源来自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒载量高),步骤1：确定暴露级别（Exposure Code）,步骤2：确定H
15、IV暴露源严重程度,HIV暴露源级别不明,步骤3：根据暴露级别和暴露源级别选择预防性用药的推荐处理方案,基本用药程序：两种逆转录酶抑制剂，使用常规治疗剂量，连续服用28天。如双汰芝（AZT与3TC联合制剂300mg/150mg）1片/次，每日2次，用药时间为连续服用28天。或参考抗病毒治疗指导方案。本程序适用于轻度低危暴露。强化用药程序：基本用药程序加一种蛋白酶抑制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗剂量(400mg/片，2片/次，Q8h)，连续服用28天。本程序适用于严重暴露。,职业暴露后，存在感染艾滋病毒的危险性，但实际感染艾滋病毒的机率是很低的。研究资料表明，医务工作者被艾滋病病毒污染
16、的针具刺伤后，发生艾滋病病毒感染的机率为 0.33（20/6135），粘膜表面暴露的感染艾滋病病毒的机率为 0.09（1/1143）,最主要的职业是护士和实验室技术员；除三名实验室人员是暴露于艾滋病病毒培养以外，其余全部是由于污染血液或体液；外科医生和被缝合针刺伤的暴露者中没有发生肯定的艾滋病病毒感染。,到1997年7月为止，美国共发生52名职业暴露后艾滋病病毒感染 者，发现其中：,应在暴露当时、暴露后4周、8周、12周、6个月，定期抽血检测HIV抗体。,52,暴露了怎么办？,记住4原则：急救 报告 保密 知情及时处理原则：局部急救处理报告原则：按规定程序上报，与急救同时进行。目的：尽早评估，
17、尽早用药。保密原则：对职业暴露涉及的人员，应做好保密工作。不向无关人员泄露相关信息。知情同意原则：是否吃药，需要您自己决定。,53,记住4步曲：挤压 清洗 消毒 包扎 刺激出血：如皮肤有伤口，应当在伤口旁端轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液。用洗手液和流水清洗伤口或污染的皮肤。如果是粘膜，用大量生理盐水冲洗。受伤部位的伤口冲洗后，用0.5%碘伏进行消毒，并包扎伤口。到艾滋病专业防治机构进行进一步咨询和处理。,54,需要由专家组进行评估，根据暴露级别和暴露源病毒载量的水平估计HIV感染的危险，确定是否进行预防性用药及采取何种预防方案。,55,暴露后预防性用药应在暴露后立即开始，一般在1h之内服药效果最好。对于感染危险性很高的暴露者，即使间隔时间很长（比如12周），也应考虑使用预防性治疗；因为即使不能防止感染，早期治疗对HIV急性感染也有好处。由于服用4周AZT才有一定保护作用，如果无很大的副作用，预防性治疗用药时间应持续4周。,56,谢 谢,
