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1、HPLC日常维护（二）,色谱柱的使用和维护,每天用足够的时间来平衡色谱柱，会在处理问题方面获得最大的“补偿”，而且色谱柱的寿命也会变得更长！一定得做！新的色谱柱在使用之前进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上的测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。,一、平衡色谱柱 1.反相色谱柱经过出厂测试后保存在乙腈/水中。在用流动相分析样品之前，应使用1020倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水“过渡”。,2.硅胶柱或极性色谱柱经过出厂测试后保存在正庚烷中。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，在使用流动相之前用乙醇或异丙
2、醇平衡。,二、如何平衡色谱柱？新色谱柱，应首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜，然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态。这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。平衡过程中，将流速缓慢地提高 用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡),三、色谱柱的再生 色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这时可以考虑对色谱柱进行再生。进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议：最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
3、 125*4mm 1.6ml 30ml 250*4mm 3.2ml 60ml 250*10mm 20ml 400ml,再生方法：1.极性固定相的再生：正庚烷 氯仿 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 水 2.非极性固定相的再生：水 乙腈 氯仿(或异丙醇)乙腈 水 3.0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,四、注意：1.在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。2.如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M的硫酸冲洗非常有效。,五、色谱柱的维护 1.使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）2.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是27.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围 3.避免流动相组成及极性的剧烈变化 4.流动相使用前必须经脱气和过滤处理 5.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净，并保存在乙腈中 6.压力升高是需要更换预柱的信号,
