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1、实验简单流程,直标抗体表面染色,收获细胞洗涤，浓度调节封闭FC受体加入适量抗体，避光孵育洗涤加入适量PBS上机检测,注意,用到PE-CY7,APC-CY7时，可以使用BD Stabilizing Fixative 339860固定再上机，以保证荧光强度红细胞裂解液可能会对一些表面分子有破坏作用，建议表面抗体标记后使用固定剂对一些抗体会造成荧光减弱，注意说明书提示同型对照加入量根据抗体量决定克隆号,辅助试剂,Lysing solutionCytofix固定剂可用1%多聚甲醛,间接标记,加入没有标记的一抗孵育后，洗涤加入二抗孵育，洗涤加入其他抗体洗涤，悬浮上机检测,注意,对照可以直接加入二抗即可一
2、定先把间标试剂标完后再标记直标抗体不能同时进行多个间标抗体的标记可以达到信号放大的作用生物素的方法类似,细胞内染色,收获细胞洗涤，调节浓度标记表面抗体固定和破膜细胞内标记洗涤上机检测,注意,一定先标记表面抗体有一些固定破膜液处理时间过长会导致表面标记丢失或荧光变弱,辅助试剂,CytopermCytofixCytofix/permPerm/wash,细胞周期,收获细胞70%冰乙醇固定缓冲液洗涤RNA酶PI染色,注意,混匀可结合其他表面分子检测注意乙醇可能造成的影响不适合GFP同时检测,试剂,CycleTEST PlusPI/RNase A,CBA,溶解标准品逐级稀释混合捕获微球，分配至对应管加入检测抗体，对应检测对象孵育处理仪器设置样本，调节仪器设置洗涤上机,注意,严格按照说明书对血清样本需要增加相应步骤仪器设置模版和数据收集模版都可以在网上找到,
