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1、药 物 分 析Pharmaceutical Analysis主讲教师：王英武吉林大学药物代谢研究中心13844072416;JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE,2,各种药典,中国药典:Chinese Pharmacopoeia（Ch.P）美国药典:The United States Pharmacopoeia，USP（30）美国国家处方集:The National Formulary，NF(25）USP与NF合并出版,2007年版本 USP(30)-NF(25）英国药典:British Pharmacopoeia，BP(2008）日本药局方:The
2、Japanese Pharmacopoeia，JP(15)欧洲药典:European Pharmacopoeia，Ph.Eur/EP(6)国际药典:The International Pharmacopoeia，Ph.Int(3),3,GMP:Good Manufacture Practice药品生产质量管理规范GSP:Good Supply Practice药品经营质量管理规范GLP:Good Laboratory Practice药物非临床研究质量管理规范GCP:Good Clinical Practice药物临床试验质量管理规范AQC:Analytical Quality Control
3、 分析质量管理,三、药品质量管理规范,4,中国药典分为三部一部：收载药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂二部：化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品收载药用辅料。三部：收载生物制品。,中国药典,5,凡例（General Notices）正文（Monographs）附录（Appendices）索引（Index）,药典内容,6,标准品、对照品计量“xxx滴定液（YYYmol/L)”、“YYYmol/L xxx滴定液”%(g/g)、%(ml/ml)、%(ml/g)20C时 以1.0ml水为20滴“(110)”:固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml 加溶剂使成10ml的溶液 甲醇-水（20
4、：80）精密度“约”：10%“称定”：精确到1%，“精密称定”：0.1%试药、试药、指示剂,凡例,7,恒重：是指供试品连续两次干燥或炽灼后的质量差异在0.3mg以下的重量。干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行；炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30min后进行“按干燥品计算”“空白实验”：指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所德的结果，,8,限度数值要求 纯度和限度数值要求95.1%98.3%最后一位数是有效位。原料药的含量百分比有时会出现大于100%的情况，(90%110%)是指用有些分析方法可能达到的数值，并不是真实的含量。如没有规定是指不
5、超过101.0%.制剂的含量百分比一般是按100%投料，如已知某一成分在生产或贮藏期间含量会降低，生产时可适当增加投料。,9,取样量的准确度、实验精密度及限度数值要求,A取样量的准确度、实验精密度“称取”“量取”：其精确度可根据数值的有效数字来确定。0.1g，（0.060.14g）；2g，（1.52.5g）2.0g(1.952.05)“精密称定”：称取重量应准确至所取重量的千分之一；“称定”：称取重量应准确至所取重量的百分之一；“约”：取用量不得超过规定量的10%,10,溶解度,极易溶解易溶溶解略溶微溶极微溶解几乎不溶或不溶,11,常用术语,遮光密闭密封熔封或严封阴凉处凉暗处冷处常温,12,温
6、度以摄氏度()表示,水浴温度热水微温或温水室温冷水冰浴放冷,13,各国药典的药品质量标准内容与区别,14,药品检验工作的基本程序I,取样,鉴别,检查,含量测定,写出检验报告,15,取样均匀、合理（科学性，真实性，代表性）性状综合反映药品内在质量(外观、色泽、物理常数等）鉴别判断药物的真伪(依据化学结构和理化性质）检查判断药物的纯度（限度试验）含量测定测定有效成分的量(采用理化方法）,药品检验工作的基本程序II,16,3.取样量 设样品总件数为x,当x300时，,当x300时，,当x3时，每件取样,17,鉴别方法：,化学反应方法光学分析方法色谱分析方法 其他方法：如溶解性能分析。,18,药物制剂
7、含量测定结果的表示方法 占标示量的百分率(浓度单位用mol/L)如：10葡萄糖注射液 当测定结果为9.6时测定结果表示为：占标示量的百分率9.610 10096,19,小 结,1 什么是中华人民共和国药典？2中华人民共和国药典共有几个版本？3 中国药典的基本结构如何？4 中国药典采用计量单位的转换5 专业术语：（溶解度、温度、百分比、溶液的滴、“（110）”）6“称取”或“量取”、“精密称定”、“称定”、空白实验7 常用的国外药典有那些？,20,药品检验工作的基本程序,取样,鉴别,检查,含量测定,写出检验报告,21,第二章药物鉴别,二.鉴别试验的项目,三.药物的鉴别方法,四.鉴别试验的条件,一
8、.概 述,22,一、概述,药物的鉴别试验（identification test）判断药物的真伪 药品质量检验的首项任务,药典收载的鉴别试验均为用来证实贮藏的药物是否为其所标示的药物。这些方法有一定的专属性，但不能赖以鉴别未知物。对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行综合判断。,23,二、鉴别试验的项目,性状-反映了药物特有的物理性质外观聚集状态、晶型、色、臭、味物理常数mp,bp,tD,E1%1cm,等溶解度,24,固体 液体的温度熔融同时分解的温度初熔-全熔的一段温度Ch.P 收载方法第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物要求报告
9、初熔和终熔,熔 点,25,在一定波长（589.3nm）与温度（20C）下，偏振光透过长1dm，含旋光性物质1g/1mL的溶液时测得的旋光度，称为比旋度。tD=是手性药物特性及其纯度的主要指标。,100,CL,比旋度,26,物质的旋光度与化学结构、溶液的浓度、液层的厚度及测定时的温度有关=c l:旋光度;：物质的比旋度 c：浓度(g/ml);l：液层厚度(dm)c=/l 若c以百分比表示则c=100/l 测定方法：,比旋度,27,吸收系数在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度（C）、单位液层厚度（L）时的吸收度，称为吸收系数（E1%1cm 或）。,C=1%或1mol/L，L=1cm,
10、E1%1cm=A/CL,吸收系数,28,29,反应原理如下：,30,阴、阳离子的特殊反应例 钠盐、钾盐、钙盐的焰色反应,取铂丝，盐酸湿润，蘸取供试品，无色火焰中燃烧，火焰显各离子的特征色,钠离子,钾离子,钙离子,31,加热,铵盐鉴别方法,供试品,32,氯化物鉴别供试液 硝酸 硝酸银 白色 白色 氨试液沉淀溶解 硝酸 白色硫酸盐鉴别供试液 氯化钡 白色 白色 硝酸（盐酸）沉淀不溶,33,光谱鉴别法紫外法在指定溶剂中测定23个特定波长处的吸收度比值（峰值与峰值比或峰值与峰谷比），以提高专属性。,例 地蒽酚的鉴别试验：取含量测定项下的溶液，照分光光度法测定，于240400nm的波长范围内测定吸收度，
11、在257、289与356nm的波长处有最大吸收。规定：A257/A289应为1.061.10；A356/A289应为0.900.94。,34,综上所述，紫外鉴别方法通常有（1）max，min（2）-A（3）-吸收系数（4）A1/A2（5）化学处理后测定产物的光谱特性,35,红外光谱鉴别法 红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于用其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品。,36,中国药典试样制备有四种方法：压片法用于固体（溴化钾）糊法用于固体膜法用于液体溶液法用于液体测定前应录制聚苯乙烯薄
12、膜光谱图，并与标准谱图对照，以检查仪器性能。,37,色谱（TLC，HPLC，GC）鉴别法 利用物质各自的特征色谱行为（Rf值或tR值）进行鉴别试验。采用与对照品在相同条件下进行色谱分离，根据两者保留行为和检测结果是否一致来验证药品的真伪。,第九章 药物的杂质检查,第一节 杂质和杂质限量检查,39,种类：按来源分：按结构分：按性质分：,无机杂质有机杂质,一般杂质特殊杂质,信号杂质有害杂质,40,三、杂质的限量检查,杂质限量（L）=式中：杂质最大允许量=(浓度C 体积V)标所以：L=C V/S 100%,41,例1 对乙酰氨基酚中检查氯化物。取对乙酰氨基酚1.0g,加水100ml,加热溶解后冷却，
13、滤过，取滤液25ml，依法检查氯化物，发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml 相当于10ug 的Cl）制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少？,42,例2 葡萄糖中检查重金属。取葡萄糖4.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，依法检查重金属，含重金属不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少ml（每1ml 相当于10ug的Pb）?,43,例3 溴化钠中砷盐检查，规定含砷量不得过0.0002%，药典规定，取标准砷液2.0ml（1ugAs/ml）。应取供试品多少克？,44,例4 磷酸可待因中检查吗啡。取本品0.10g，加盐酸溶液（91000）使溶解成5ml，加
14、亚硝酸钠试液2ml，放置15分钟，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡溶液取无水吗啡2.0mg，加盐酸溶液（9 1000）使溶解成100ml5.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量为多少？,45,一、氯化物检查法,供试液：取规定量供试品，加水溶解成25ml，加稀硝酸10ml；如不澄清，应过滤，置50ml纳氏比色官中，加水成40ml标准液：规定量标准氯化钠溶液，加稀硝酸10ml，置50ml纳氏比色官中，加水成40ml于供试液、标准液中，分别加入硝酸银1.0ml，用水稀释到50ml，在暗处放5min，在黑色背景下从上到下比较。,46,二、硫酸盐检查法,供试液：取规定量供试品，加水溶解成40
15、ml，如不澄清，应过滤，置50ml纳氏比色官中，加稀盐酸2ml，摇匀。标准液：规定量标准硫酸钾溶液，置50ml纳氏比色官中，加水成40ml，加稀盐酸2ml，摇匀。于供试液、标准液中，分别加入25%氯化钡5ml，用水稀释到50ml，在暗处放10min，在黑色背景下从上到下比较。,47,三、铁盐检查法,O,H,SCN,NO,H,SCN,HNO,2,2,+,+,+,+,-,-,+,+,+,+,+,+,2,4,4,2,4,3,8,2,2,4,2,),(,2,),(,2,SO,SO,NH,Fe,O,S,NH,Fe,H,48,四、重金属检查法,重金属是指在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、
16、贡、铜等。主要以铅为主。,49,硫代乙酰胺法取各药品项下规定量的供试品,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水适量使成25ml,加硫代乙酰胺2ml,放置2min后,与标准铅溶液一定量按同法制成的对照液所形成的棕色进行比较。.CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S H2S+Pb2+PbS+2H+,50,第二种方法,将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查用于在水、乙醇中难溶或能与重金属形成配位化合物而干扰检查的有机药物。温度影响较大，500600度为宜。必须蒸干除尽氧化氮。否则形成亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。蒸干后加盐酸使成盐酸盐，再蒸干残留的盐酸，加水溶解
17、，以氨调pH至中性，加醋酸盐缓冲液(Ph3.5)微热溶解，依法测量。对照液按同法处理，保持平行,51,第三法 在碱性条件下，以硫化钠为试液，适合于不溶于稀酸而溶于碱的药物。取供试品适量+NaOH+H2O溶解+Na2S试液，与一定量标准铅液同法处理后的颜色比较。第四法 微孔滤膜过滤法，适合于重金属含量低的药物（原理与一法同）。显色后用 50ml注射器转移至滤器中进行压滤，取下滤膜，干燥，比较生成的斑点颜色。,52,53,五、砷盐检查法,砷盐是有毒的物质中国药典（2000年版）采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）检查药物中的砷盐。,54,第一法 古蔡法原理:As3+3Zn+3H+A
18、sH3+3Zn2+AsO33+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+3HgBr2 3HBr+As(HBr)3（试纸）砷斑与2ml标准砷溶液同法操作。砷斑：As(HgBr)3(黄色)；AsH(HgBr)2(棕色)；As2Hg3(棕黑色),55,第二法 二乙基二硫代氨基甲酸银法 简称 Ag(DDC)法AsH3+6Ag(DDC)+3吡啶 As(DDC)3+6Ag（红色胶态银）+3吡啶 HDDC,于510nm波长处测定吸收度，以Ag(DDC)溶液为空白。,56,七、干燥失重（Loss on drying）是指药物在规定的条件下经干燥后所减失的重量。主要指水分，也包括其他挥发性杂质。测定方
19、法有：1 常压恒温干燥法（105）适用于受热较稳定的药物。将样品（研细）平铺于扁称量瓶中，厚度5mm。干燥时间一般在达到指定温度后干燥2-4h，称重，再干燥，直至恒重。,57,2 干燥剂干燥法本法适用于受热易分解或易挥发的药物。将样品置干燥器内干燥至恒重。常用干燥剂有：硅胶、硫酸、无水氯化钙、五氧化二磷等。其中五氧化二磷吸水效力最强，但P2O5吸水后产生H3PO4，若样品对酸不稳定，可能会受影响。,58,3 减压干燥法适用于mp低，受热不稳定及难除去水分的药物。减压干燥时可用减压干燥器或恒温干燥箱，一般压力2.67KPa20mmHg。,通常分析一个药物时，干燥失重与含量测定应同时进行，然后根据
20、干燥失重%，将样品折算成干燥品，再计算含量。,59,八、水分测定法,I2+SO2+H2O=2HI+SO3,(A-B)F,供试品中水分含量=*100%,W,60,九、有机溶剂残留量测定法用以检查药物在合成过程中引入的有害有机溶剂。ChP规定：二氧六环 0.038%吡啶 0.02%苯 0.0002%甲苯 0.089%氯仿 0.006%二氯甲烷 0.06%环氧乙烷 0.001%,61,第三节 特殊杂质检查方法色谱法（TLC、HPLC、GC）光谱法化学分析法物理分析法,62,TLC法杂质对照品法（A）供试品自身对照法（高低浓度法）（B）对照物质法（C）不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量）,样
21、对,样 对,样 对,A B C,63,HPLC（GC）法峰面积归一化法,A杂总/A总100%=杂%A总=A杂1A杂2A样,64,内标法校正因子测定液=对照品内标样品测定液=样品同样量内标 分别进样，记录色谱图。校正因子F=A内/A对m对/m内m杂=FA杂/A内m内杂质限量%=m杂/W样100%,65,F=(A内/A对)(m对/m内),m杂=F(A杂/A内)m内,对照,样品,杂质限量%=m杂/W样100%,66,外标法m杂=A杂/A对m对杂质限量%=m杂/W样100%,杂质对照品,样品,67,不加校正因子的主成分自身对照法A杂总/A自C自/取样100%=杂质%,样品测定液,1 2 3,A杂总=A
22、1A2A3,自身对照液,（1%）,68,第三章 药物的杂质检查,药物的纯度概念 杂质的来源(生产和贮藏)杂质的种类(一般和特殊)杂质的限量检查(L=C V/S 100%)一般杂质检查(Cl,SO4,Fe,重金属,砷等)特殊杂质检查(TLC,HPLC,UV等),69,AsO,70,71,TLC法杂质对照品法供试品自身对照法（高低浓度法）对照药物法不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量）,HPLC（GC）法峰面积归一化法不加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法内标法外标法,72,第四章 药物定量分析与分析方法验证,二.定量分析方法的特点,三.药物分析方法的验证,四.生物样品分
23、析方法的基本要求,一.定量分析样品的前处理方法,73,第一节 定量分析样品的前处理方法,不经有机破坏,经有机破坏,直接测定,配位滴定法氧化还原滴定法,水解后测定,碱水解酸水解,经还原分解后测定,湿法破坏凯氏定氮法,干法破坏,高温灼烧法氧瓶燃烧法,74,75,一、容量分析方法,1.滴定度,每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物浓度。,被测药物,滴定液,第二节 定量分析方法的特点,76,77,第二节 定量分析方法的特点,二、光谱分析法,(一)紫外-可见分光光度法,仪器校正 空白溶剂校正 吸收峰波长确定 A(0.30.7),78,第二节 定量分析方法的特点,含量测定方法,1.对照品比较法,原料药,
24、79,特点：灵敏度高，可达10-1010-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定,(二)荧光分析法,80,定量分析的方法(外标法),81,定量分析的方法(内标法),82,第三节 药品分析方法的验证,目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标：评价分析方法的尺度,效能指标包括:精密度,准确度,检测限,定量限,选择性,线性与范围,耐用性,83,一、准确度（accuracy）,系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。,(一)含量测定方法,回收率(Recovery),回收试验,加样回收试验,33，至少9个测定结果,84,二、精密度(Precisi
25、on),系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。,表示：偏差(d)、标准偏差(s),、相对标准偏差(RSD),重复性:同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性:不同实验室，不同人测定的精密度,85,三、专属性(Specificity),指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。,目视法信噪比法 S/N=3,四、检测限(Limit of Detection,LOD),药物能被检出的最低浓度(g/ml),五、定量限(Limit of Quantitation,LO
26、Q),药物能被定量测定的最低浓度(g/ml),信噪比法 S/N=10,86,影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等,六、线性与范围(Linearity And Range),待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。Y=a+bx（r=0.9999),七、耐用性(Robustness),测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度,87,已有重现性验证，不需验证中间精密度,如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充,视具体情况予以验证,88,第四节 生物制品分析方法的基本要求,一、常用样品的种类、采集和贮藏,(一)血样 血浆(plasma)血清(
27、serum)全血(二)唾液(三)尿液 用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度，药物代谢物及其代谢途径、类型、速率等的研究；临床上用于判断患者是否违反医嘱用药。,89,有机破坏(硝酸-高氯酸消化),第四节 生物制品分析方法的基本要求,90,三、定量分析方法的验证,药典附录 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则国家食品药品监督管理局新药评审中心 化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则 化学药物临床药代动力学研究技术指导原则 化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则,91,(一)特异性(二)线性和范围(三)精密度与准确度(四)定量下限(五)稳定性(六)提取回收率(七)质控样
28、品(八)质量控制(九)测定结果,92,第五章巴比妥类药物的分析,二.鉴别试验,三.特殊杂质检查,四.含量测定,一.基本结构与主要性质,93,一、基本结构与主要性质,环状丙二酰脲类化合物,(一)基本结构,94,(二)主要性质,性状白色结晶或结晶性粉末溶解度微溶或极微溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂 钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂,1.弱酸性(pKa:7.38.4),95,2.水解反应,96,一、基本结构与主要性质,3.与金属离子反应,a.与银盐的反应,b.与铜盐的反应,巴比妥类铜吡啶,显色,巴比妥类紫色或紫色沉淀,硫巴比妥类绿色,97,5.紫外吸收光谱特征,240nm,255nm,A.H2SO4液(0
29、.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离),1,5,5-三取代巴比妥类药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。,98,一、基本结构与主要性质,硫代巴比妥的紫外吸收光谱A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L),6.薄层色谱行为特征,99,二、鉴别试验,1.司可巴比妥钠的鉴别,I2,褪色,Br2,KMnO4,100,二、鉴别试验,2.苯巴比妥的鉴别,a.硝化反应,b.硫酸-亚硝酸钠反应,苯巴比妥与NaNO2-H2SO4反应生成橙黄色橙红色,c.甲醛-硫酸反应,苯巴比妥与甲醛-H2SO4反应生成玫瑰红色环,区分苯
30、巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物。,101,二、鉴别试验,3.硫代巴比妥类的鉴别硫色素反应,硫代巴比妥类与巴比妥类的区别,102,三、特殊杂质试验,1.酸度,中间体乙酰化不完全时，与尿素缩合产生的杂质,苯基丙二酰脲,酸性较强,检查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1min，放冷，滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色,103,2.乙醇溶液澄清度,三、特殊杂质试验,检查中间体、等乙醇中不溶物。,取本品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3min，溶液应澄清,3.中性或碱性物质(提取重量法),副产物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解产物 不溶于NaOH T.S.而溶于醚,104,第
31、六章芳酸及其酯类药物的分析,二.鉴别试验,三.特殊杂质检查,四.含量测定,一.典型药物的分类与性质,五.体内药物分析,105,第二节 鉴 别,(二)重氮化-偶合反应,贝诺酯,橙红色,106,(三)氧化反应,第二节 鉴 别,甲芬那酸H2SO4深蓝色,随即变为棕绿色,(四)水解反应,107,第三节 特殊杂质检查,一、阿司匹林,生产工艺,ASA,副产物,SA,溶液澄清度 水杨酸 易碳化物 炽灼残渣 重金属,108,第三节 特殊杂质检查,1.双相滴定法(Ch.P),样品0.3g,合并乙醚液,HCl滴定液滴定,消耗滴定液不得超过0.30ml,109,第四节 含量测定,三、双相滴定法(Titrimetry
32、 in two phases),苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断 因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法,分出H2O层，置具塞锥形瓶乙醚层用H2O 5ml洗涤，洗液并入锥形瓶加乙醚20ml，继续用HCl滴定，至水层显持续的橙红色,110,第七章 芳香胺类药物的分析,二.苯乙胺类药物的分析,三.苯丙胺类药物的分析,一.芳胺类药物的分析,111,芳香胺,芳胺类,芳烃胺类,benzocaine,procaine hydrochloride,paracetamol,lidocaine hydrochloride,对氨基苯甲酸酯类,酰胺类,adrena
33、line,dopamine hydrochloride,oxprenolol,carteolol hydrochloride,苯乙胺类,苯丙胺类,112,三氯化铁反应,（蓝紫色）,金属离子反应,与铜和钴离子反应（具有芳酰胺结构的，如盐酸利多卡因）硫酸铜/碳酸钠试液蓝紫色配合物氯仿层显黄色 氯化钴/酸性溶液亮绿色细小钴盐沉淀,Identification,113,吡啶类,喹啉类,托烷类,吩噻嗪类,苯并二氮杂卓类,杂环类,第八章 杂环类药物的分析,114,第一节 吡啶类药物的分析,吡 啶(Pyridine),异烟肼(Isoniazid),尼可刹米(Nikethamide),硝苯地平(Nifedip
34、ine),115,一、主要性质与鉴别试验,第一节 吡啶类药物的分析,戊烯二醛反应（kning反应）,尼克刹米,戊醛二烯,116,第一节 吡啶类药物的分析,在无水的条件下，吡啶及其衍生物与3,4-二硝基氯苯混合共热或加热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。,二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）,异烟肼氧化成羧基；尼克刹米水解成羧基,117,二、Identification,一、绿奎宁反应（Thalleioquin）奎宁和奎尼丁鉴别,二醌基亚胺的胺盐,取其水溶液加溴试液23滴和氨试液1ml，即显翠绿色；加酸至中性显蓝色；酸性则呈紫红色；翠绿色可转溶于醇、氯仿中不溶
35、于醚。,118,一、托烷生物碱一般鉴别试验(Vitaili反应),取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇23滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。,二、Identification,119,第四节 吩噻嗪类药物,4.金属离子络合显色,未氧化的硫可与金属钯离子形成配位化合物，而氧化产物亚砜、砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性。,取本品约50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化钯溶液3ml，既有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。,120,A,B1,C,D,E,Vitamins,第九章 维生素类药物的分析,121,第二节 VitB,
36、Vit B1(Thiamine Hydrochloride),氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),122,第二节 VitB,一、Identification,1.硫色素荧光反应为维生素B1所特有,H2O,123,溶于丁醇，显蓝色荧光,第二节 VitB,124,第三节 VitC,烯二醇结构,共轭酸性强,酸性弱,内酯结构,125,第三节 VitC,一、主要性质,溶解性 酸性 旋光性 还原性,L-抗坏血酸,(有生物活性),L-二酮古罗糖酸,L-去氢抗坏血酸,无生物活性,126,第三节 VitC,二、鉴别,1.与AgNO3反应,2.与2,6-二氯靛酚反应,氧化型,还原型,酸式色碱式色,3.与氧化剂反应,
37、127,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,第十章 甾体激素类药物分析,128,第三节 Purity Test,游离磷酸盐检查,钼酸铵,磷钼酸,740nm，UV,129,第一节 药物制剂分析的特点 Special feature 第二节 片剂和注射剂的分析 General detection in Tablets&Injection 第三节 片剂和注射剂中药物的含量测定 Assay Interferences&their elimination 第四节 复方制剂分析 Assay of compound preparations,第十二章 药物制剂分析,13
38、0,第二节 片剂和注射剂的分析,片剂的检查项目,【重量差异】(weight variation)【崩解时限】(disintegration)【含量均匀度】(content uniformity)【溶出度】(dissolution)【释放度】,General detection in Tablets&Injection,131,附加剂 附加剂一般有渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂等。抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等。常用的抑菌剂及其浓度(g/ml)为苯酚0.5%、甲酚0.3%、三氯叔丁醇0.5%等。抑菌剂用量应能抑制注射液内微生物的生长。加有抑菌剂的注射液，仍应用适宜
39、的方法灭菌。注射量超过5ml的注射液，添加的抑菌剂必须特别审慎选择。供静脉(除另有规定外)或椎管注射用的注射液，均不得添加抑菌剂。,132,【装量】【装量差异】【可见异物】【无菌】【热原】/【细菌内毒素】【不溶性微粒】,133,概述,鉴别实验,杂质检测,含量（效价）测定,生物制品,第13章 生物制品分析概论,第一节 概述,生物药物（biopharmaceutics或biopharmaceuticals）是利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学等学科的原理与方法制得的天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。生物药物主要包括生化药物（biochemical dru
40、gs）、生物技术药物（bio-technology drugs)和生物制品（biological products)等。,135,生物制品种类与特点,生物制品种类疫苗类抗毒素及抗血清血液制品重组DNA制品诊断制品其他制品,136,疫苗类细菌类疫苗病毒类疫苗联合疫苗双价疫苗及多价疫苗,137,生物制品种类与特点,生物制品特点分子量大不是定值生化法结构确证需检查生物活性要求安全性检查需做效价测定,第二节 鉴别反应,理化鉴别法化学法紫外分光光度法高效液相色谱法生化鉴别法酶法电泳法生物鉴别法血清学法生物学法,第三节 杂质检查,特殊杂质检查宿主细胞蛋白残留量外源性DNA残留量产品相关杂质残余抗生素安全性
41、检查无菌热源细菌内毒素异常毒性与特异性毒性过敏反应,第四节 含量（效价）测定,理化分析法滴定法光谱法HPLC生化分析法电泳法酶法生物检定法基本概念应用实例,141,按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：分配色谱：分配系数 亲和色谱：亲和力 吸附色谱：吸附力 离子交换色谱：离子交换能力 凝胶色谱（体积排阻色谱）：分子大小而引起的体积排阻,HPLC分类I,142,分配色谱又可分为：正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占6070。固定相（柱填料）：固定相又分为两类：一类是使用最多的微粒硅胶；另一类是使用较少的高分子微球：优
42、点是强度大、化学惰性、使用pH范围大(pH=114)；缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和 凝胶色谱。,HPLC分类II,143,X,A,B,h,Fs1.05 拖尾峰Fs0.95 前延峰,144,基本概念,t0,tR1,tR2,4,2,0.607h,0.5h,h,W1/2h,145,分离度的概念,146,检测器,紫外-可见光检测器示差折光检测器荧光检测器放射性检测器电化学检测器质谱检测器,147,真空系统,样品入口,检测器,数据系统,质量分析器,离子源,质谱仪的组成,大气,离子源 离子生成质量分析器 离子分离检测器 离子收集,148,MS/MS Product Ion Scan,m1+fixe
43、d,m3+scanned,149,MS/MS Precursor Ion Scan,m3+fixed,m1+scanned,150,MS/MS Neutral Loss Scan,151,MS/MS MRM(Multiple Reaction Monitoring),152,质谱检测的优势,153,The transfer of ions present in a liquid phase into the gas phaseGentlest ionization techniqueApplicable to polar and ionic substances,Electrospray io
44、nization(ESI),154,Electrospray ionization Ion Evaporation,M+nHn+,Quasi-molecular ion(or multicharged ion)Protonated molecule,155,ESI Multiply Charged Ions,Molecules which can be multiply protonated or deprotonated can exist in more than one charge statePeaks at M nHn(n=number of charges),156,Atmospheric Pressure Chemical Ionization(APCI),Ionization occurs in the gas phasecorona dischargepolar to non-polar thermally stable compounds,
