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1、抗菌药物敏感试验,细菌室 李巍,抗菌药物敏感试验,定义、目的、方法培养基、接种菌量、培养条件结果阅读判断标准,什么是抗菌药物的敏感性试验 测定抗菌药物在体外抑制病原微生物生长的效力，称为抗菌药物对细菌的抑制试验，或称为细菌对药物的敏感性试验。,为什么要做药敏试验？,供医师选用抗菌药物时的参考细菌耐药性检测和耐药性变迁评价新抗菌药物的药效学特征对细菌耐药谱分析和分型有助于某些菌种的鉴定作为医院内感染流行病学调查的手段之一,如何进行药敏试验,方法学 1.稀释法-试管稀释法-平板稀释法 2.扩散法（纸片法）3.E-TEST 4.自动化仪器,几个重要的指标,MIC（最低抑菌浓度）在体外能够抑制细菌生长
2、的最低药物浓度 MBC(最低杀菌浓度)在体外能够使细菌的总数减少或杀灭99.9%以上的最低药物浓度临界浓度根据MIC，结合常用剂量时该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗菌药物敏感或耐药的界限,如何制备菌悬液？,如何取菌落？为什么至少取3个菌落？可能丢失耐药细菌（携带有耐药质粒的耐药菌株）,扩散法：K-B,操作：-制备0.5麦氏度菌液-无菌棉签蘸取菌液，在管壁将多余菌液旋转挤去，在琼脂表面均匀涂布3次，最后沿着平板内缘涂抹一周-室温或35度干燥510分钟-将纸片紧贴于表面-纸片间距20厘米，离平板内缘15厘米,如何阅读结果（纸片法）,工具：游标卡尺、尺子光源：反射光、透射光阅读：背衬不反光的
3、黑色背景用肉眼观察，也可用BIOMIC机器阅读,纸片法结果的正确阅读,反射光不反光的黑色背景完全抑制的抑菌圈直径，包括纸片的直径抑菌圈的界限应该是以肉眼观察没有明显的可见细菌生长区域在抑菌圈边缘微弱生长的、仅能在放大镜下才能观察到的细小菌落应忽略,应注意葡萄球菌、肠球菌的阅读,苯唑西林、利奈唑胺和万古对葡萄球菌的抑制圈万古霉素对肠球菌的抑制圈任何有可见的菌落生长均视作对上述抗菌药物耐药需在透视光下阅读，遇不敏感的结果需用稀释法测MIC确证,应注意磺胺类药物的结果阅读,培养基可能含有拮抗物如胸腺嘧啶、核苷类物质，允许有轻微生长的薄菌苔忽略20%或更低生长的薄菌苔，测量抑菌圈直径较为明显的细菌生长
4、界限下列细菌均注意：肠杆科、不动、伯克、葡萄、嗜血、肺链、弧菌属、脑膜炎奈瑟菌,应注意变形杆菌属的阅读,生长呈迁移性在一些抗菌药物抑菌环可见雾霾样迁徙生长的菌苔雾霾样生长忽略不计忽略迁移性,应注意溶血性细菌的结果阅读,链球菌-溶血链球菌-草绿色链球菌-肺链应忽略溶血区，读取生长完全被抑制处,注意产色素细菌的结果阅读,有些细菌在生长的过程中产生色素-铜绿-黄杆菌-沙雷菌应忽略色素分泌圈，读取生长完全被抑制处,解读注意事项,1、药敏试验是参照美国的CLSI推荐的标准制定的。2、细菌全自动分析仪的药敏组合是固定的。3、某些细菌对某类抗生素天然耐药，则不需要做药敏试验。4、试验的药物代表一类药，而不是
5、一种药。,解读注意事项,5、对葡萄球菌一代比三代头孢治疗效果好。6、有些药物不适用于单独使用，仅用于联合用药，如利福平。7、因为是体外药敏试验，有些药体外试验敏感，可能临床治疗无效。8、同一菌株可能出现亚种，导致连续药敏结果不吻合。,细菌耐药概念,多重耐药（MDR）:指细菌同时对三种以上结构不同（作用机制不同）抗菌药物耐药，如头孢菌素、喹诺酮类、氨基糖苷类；泛耐药（PDR）:细菌对本身敏感的所有药物耐药；超级细菌:并非科学概念，一般指PDR与部分MDR，没有确切定义，以下细菌属于此列：MRSA/VRSA;VRE;MDR-PA,PDR-AB;ESBL(+)+AmpC(+)肠杆菌产碳青霉烯酶肠杆菌
6、（产KPC酶、包括产NDM-1细菌）,MRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌VRSA：耐万古霉素金黄色葡萄球菌VRE：耐万古霉素肠球菌ESBLs：超广谱-内酰胺酶KPC酶：产碳青霉稀酶的一种KPC型NDM-1：型新德里金属-内酰胺酶 下面就以上几种情况分别解读,与临床沟通中常见问题,1、我们想用的药物在药敏试验中 没有做？可能是天然耐药可能是药物的敏感性被其他药物所预报,与临床沟通中常见问题,2.为什么有的菌报告很多种药物，有的仅报告几种药物？报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少,CLSI药敏建议,与临床沟通中常见问题,3、是否
7、能将所用的药都做药敏试验?没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准）,与临床沟通中常见问题,4、在药敏试验报告中MIC越小的抗菌药物效果越好吗？如何根据MIC联合用药？感染菌对同一种药物的MIC越小，效果越好不同种抗菌药物之间MIC无可比性目前很多仪器报告的是检测折点，而不是真正的MIC,与临床沟通中常见问题,5、培养阳性的细菌都需要用抗菌药物治疗吗？不是的培养阳性感染，可能为污染（血培养），可能为定植（痰培养）任何结果必须结合临床情况进行评价（很重要）感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌
8、药物更加重要改善患者全身情况：器官功能支持，纠正酸碱平衡，电解质紊乱，低蛋白血症，高血糖等,与临床沟通中常见问题,6、选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一般来说，耐药治疗无效；敏感治疗有效。可能不是真正的致病菌（污染或定植菌）细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）感染部位与药代动力学因素细菌的MIC，给药剂量和用药方式药敏试验药物中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合用药药物剂型及生物利用度（纯品、商品）,与临床沟通中常见问题,7、涂片镜检结果与培养结果不吻合？涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养的目的是检出致病菌。一些苛氧菌需在特殊的
9、环境或培养基上才能生长。,与临床沟通中常见问题,8、取的明显就是脓液标本，为何鉴定报告为无菌生长？我们做的是有氧培养，脓液可能为厌氧菌感染。可能细菌被大量的中性粒细胞吞噬。,与临床沟通中常见问题,9、鉴定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏结果？四联球菌为微球菌，一般不引起人体致病，为非致病菌，故考虑污染可能。药敏结果参照CLSI标准，目前革兰氏阳性菌没有参照标准，故暂不能做药敏试验，若需治疗可参照阳性球菌用药。,与临床沟通中常见问题,10、一般培养不是三天出结果吗，今天第四天了怎么还没出来？一般培养经48小时后，即第三天出报告，若需分离致病菌的则第四天出报告。,与临床沟通中常见问题,11、今天的培养结果怎么与前天的不一样？取材是否规范。痰标本，有时选优势菌做，就可能导致两次不一样。,与临床沟通中常见问题,12.明显稀便，培养结果为何正常？大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染，致病性大肠杆菌我们没有鉴定血清。怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养。可能病毒感染(轮状病毒)。,小 结,耐药菌，尤其是多重耐药菌的出现，使临床抗感染治疗面临着困难的用药决策细菌药敏试验在选择抗菌药物种类上为临床提供参考（经验治疗）；可以指导临床个体化治疗。临床实验室检验有自身的局限性各科室间交流非常重要！,谢谢大家的聆听！,
