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1、基于遗传及非遗传因素对华法林个体化给药方案的研究,前 言,华法林的缺点,优点,缺点,治疗窗窄，难以掌握用药的合理剂量，易出现抗凝不足或过量,作用时间长、服用方便、副作用小,价低,预防和治疗血栓形成和复发,华法林,用途,研究背景,遗传药理学,分子生物学,基因个体化给药方案,个体差异,研究背景,VKORC,华法林,无活性的凝血因子,VitK环氧型,由VKORC1编码,有活性的凝血因子,VitK氢醌型,药物代谢酶CYP2C9*3,研究目的,本研究选取中国汉族人群为研究对象，探讨CYP2C9*3、VKORC1基因在中国汉族人群的分布情况，同时分析这些基因的多态性（遗传因素）以及患者的基线信息（非遗传因
2、素）与华法林用药剂量之间的关系，以期建立适合中国汉族人群的华法林基因给药模型。,材料与方法,主要试剂,主要仪器,病例选择,年龄大于18周岁，需要华法林治疗并要求维持INR在1.82.5之间；患者需要长期服用抗凝药华法林至少3个月以上，INR值稳定（连续3次复查INR均达到目标INR范围内）；中国汉族人。,心功能级或以上；妊娠期及哺乳期妇女；近30天内参与其他干预试验者；长期合并应用与华法林有相互作用的药物者，如：三周内服用利福平者；因伴有合并症而不能使用标准剂量者（如：肝、肾功能不全等）。,纳入,排除,实验流程,样本取血（228例）,目标基因片段PCR扩增（CYP2C9、VKORC1）,纳入及
3、排除目标病例,收集病人的基线信息,基因组DNA提取,确定病例基因型,伦理委员会，研究注册,由遗传及非遗传因素建立华法林给药模型,比较不同基因型个体用药剂量的差异,数据统计,实验内容,采集患者信息,基因分型,基线信息,DNA采集,CYP2C9*3VKORC1,确定基因类型,PCR扩增,基因的多态性与华法林用药剂量之间的关系,实验内容,比较不同种族间CYP2C9*3、VKORC1基因分布频率 分析CYP2C9*3、VKORC1基因多态性与华法林维持剂量间的关系,实验内容,因变量为华法林日剂量（mg/d）,自变量包括年龄、性别、身高、体重、CYP2C9、VKORC1基因型,多元回归统计方法，制定给药
4、模型,统计学分析,实验数据采用SPSS17.0统计软件分析应用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率,基因频率 和等位基因频率采用同组中构成比比较的2检验。患者与Hardy-Weinberg（H-W）平衡的符合程度采用2 检验，P0.05 样本具有群体代表性。计量资料数据采用mean SD。不同基因型间华法林剂量比较采用t检验。P0.05，差异有统计学意义。,结果与讨论,表1 CYP2C9*3基因分布频率（n=228，%）,实验结果,注：华法林抗凝治疗人群中，CYP2C9*3基因以AA型为主，AC和CC型少见,表2 患者CYP2C9*3基因多态性与H-W平衡的符合程度检验（n=228）,表3
5、不同种族CYP2C9*3基因型频率及等位基因分布频率对比（%）,表4 VKORC1基因分布频率（n=228，%）,注：华法林抗凝治疗人群中，VKORC1基因以AA和AG型为主，GG型少见,表5 患者VKORC1基因多态性与H-W平衡的符合程度检验（n=228）,表6 不同种族 VKORC1基因频率分布情况对比（%）,表7 不同基因型间的患者基本情况比较,注：#CYP2C9*3 AA和AC型华法林平均剂量比较，P0.05；#VKORC1 AA和AG/GG华法林平均剂量比较，P0.05,表8 不同年龄段患者的华法林用药剂量比较,图1 不同CYP2C9*3/VKORC1基因型患者间的剂量比较,AA
6、and AA AA and AG AA and GG AC and AA AC and AG n=183 n=34 n=2 n=8 n=1,表9 患者基线信息的单因素回归分析,表10 多元回归统计方法制定给药模型,结 论,本实验条件下：228例华法林抗凝治疗患者中，CYP2C9*3、VKROC1基因存在多态性，基因频率与其他种族存在一定的差异。CYP2C9*3基因突变的个体所需华法林的日平均剂量低于野生基因型的个体。VKROC1基因的突变导致患者服用华法林的剂量增加。非遗传因素中，患者的年龄、身高与华法林用药剂量存在相关性。,本实验条件下：本研究得出的华法林个体化给药模型 Dose(mg/d)=-2.330.306Sex0.027Age0.008Weight0.017Height0.063CYP2C9*31.501 VKORC1可解释 33.4%的剂量差异。本研究只能解释33.4%的华法林剂量差异，这提示我们要就影响华法林发挥抗凝活性的遗传及非遗传因素进行扩大研究。,结 论,
