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原生质体的制备,细胞生物学实验六,目的要求,掌握植物原生质体的分离制备技术，观察原生质体的形态。,实验原理,分离原生质体常采用酶解法。其原理是根据由纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶配制而成的溶液对细胞壁成分的降解作用，而使原生质体释放出来。原生质体的产率和活力与材料来源、生理状态、酶液的组成、以及原生质体收集方法有关。酶液通常需要保持较高的渗透压，以使原生质体在分离前细胞处于质壁分离状态，分离后不致膨胀破裂。渗透剂常用甘露醇，山梨醇，葡萄糖或蔗糖。酶液中还应含一定量的钙离子，来稳定原生质膜。游离出来的原生质体可用过筛法收集。,实验用品,一、材料菠菜二、器材显微镜，擦镜纸，剪子，镊子，小平皿，吸管四支，直式漏斗，300目尼龙网，10ml离心管，载玻片，盖玻片。三、试剂1.洗涤液：甘露醇 0.6 M；CaCl22H2O 8 mM NaH2PO4H2O 2 Mm，pH 5.62.酶液：,实验方法,1、酶液的制备 2、材料准备 3、酶解4、洗涤,观 察,纯化后的原生质体,胚性愈伤组织亦是原生质体分离的主要材料,思考题,1、何为原生质体2、分离得到的原生质体可有哪些用途？3、为什么酶解材料时，酶解液要保持较高的渗透压？,
