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1、甘草黄酮高效提取及分离纯化研究,小组成员：范雲 季越 唐静 李利芹,甘草是豆科蝶形花亚科多年生草本植物，是我国重要的传统中药，有着重要的药理作用和保健功能。本实验由乌拉尔甘草为原料，探索其黄酮的提取和分离工艺。黄酮类化合物泛指两个苯环，通过中央三碳相互联结而成的一系列化合物。现代药理研究结果表明，甘草中黄酮类化合物具有较强的生理活性，具有抗炎、抗病毒、利胆、强心、镇静和镇痛等功效，是一种有效的活性成分，具有许多潜在的药用价值，如抗肿瘤作用，抗氧化作用，抗菌作用，抗病毒作用，抗心律失常作用，保肝及对消化系统的其它作用。,实验思路1：提取提纯初步鉴定分离结构测定实验思路2：提取分离纯化检测,甘草中
2、黄酮的提取方法,冷凝回流法超声微波协同提取法超声辅助法,黄酮的提取得率受到很多因素的影响，根据文献报道及初步实验，本文选择提取的料液比，提取时间，提取温度，乙醇浓度及提取次数五个因素进行分析,超声-微波协同萃取技术,提取时间15 min，料液比130，提取温度50，提取1次的条件下，考察乙醇浓度为50%，60%，70%，80%，90%时黄酮的提取得率，确定乙醇浓度。,固定乙醇浓度80%,超声功率50 w，微波频率2450Hz。,通过以上分析并结合单因素分析可以确定关于提取得率的最佳的因素水平组合为：提取时间 15min，料液比 115，提取温度 50，提取次数 3 次，在此条件下进行重复实验，
3、得到平均提取得率为 98.80%，RSD 为 0.31%。,冷凝回流法 固定乙醇浓度为80%。,综合上述考虑并结合单因素实验结果，选择：提取时间为 90 min，料液比为 115，提取温度为 70，提取次数 3 次为最优条件，在此条件下平均提取得率为 99.10%，RSD 为 0.61%，重复性较好。,超声波辅助萃取法 设定超声波功率为50 w，固定乙醇浓度为80%。,综合考虑确定最佳提取条件为 A3B2C3D3，即提取时间 60min，料液比 115，提取温度 70，提取次数 3 次，在此条件下，甘草总黄酮提取得率为 98.19%，RSD 为 0.92%。,将三种提取工艺进行比较，结果发现，
4、在提取得率相近的情况下，超声-微波萃取法所需的时间大大缩短，显示超声微波协同萃取技术具有低能耗及高效快速的优点，适合于黄酮类化合物的提取。,甘草中黄酮的分离纯化方法,大孔吸附树脂柱层析分离纯化甘草黄酮本实验采用AB-8型号的大孔吸附树脂。装柱：充分吸胀的树脂在搅拌下倒入层析柱(801500 mm)中，装柱后液体必须高于树脂2040mm。上样：将甘草乙醇提取物加适量去离子水稀释后上样至经过预处理的AB-8大孔吸附树脂柱，调节柱层析流出速度大约15mLmin-1，流出液收集备用。洗脱：先用去离子水洗脱，再用体积分数分别为30%、40%、50%和95%的乙醇梯度洗脱，流出液以500 mL/瓶收集。,
5、薄层层析,展开剂的选择：通过反复实验以寻找最合适的展开体系与配比，最后展开剂选用体系：氯仿：甲醇9 1 显色剂：茴香醛（1%）：硫酸（10%）=11 操作步骤：a.点样 b.展开 c.显色 d.测定比移值,甘草中黄酮的检测,紫外光谱分析 紫外光谱分析可以帮助鉴定黄酮类化合物的类型。以甲醇为参比液，将产物的甲醇溶液在200-400nm范围内进行紫外扫描。从图中可以看到，在275nm处有一个强吸收，310nm处有一肩峰，显示有黄酮类化合物特征吸收，可以初步判定为黄酮类化合物。,颜色反应,从表 3-10 可以看出，由大孔吸附树脂提取的粗品，可以和颜色试剂反应产生黄酮类化合物特征的颜色，因此可以判断含
6、有黄酮类化合物。根据和不同试剂产生的不同的颜色，对照表2-4，可以进一步推断出，粗品中的黄酮类化合物可能是二氢黄酮（醇）类或黄酮类。,主要结论,本文以乌拉尔甘草为研究对象，采用不同的提取技术对其中的有效成分黄酮进行系统的提取，采用柱色谱并结合沉淀法分离提纯甘草黄酮，并应用薄层色谱、紫外光谱对产品进行分析鉴定，具体结论如下：1利用超声微波协同萃取技术对甘草中的总黄酮进行提取并进行了工艺优化，得出最佳工艺条件为：提取时间15min，料液比1:15，提取温度50，乙醇浓度80%，提取3次，平均提取得率为98.80%。2利用超声波辅助萃取法和冷凝回流法提取甘草中总黄酮，并进行工艺优化得出最佳工艺条件。同时将这两种提取方法与超声-微波协同萃取法的工艺进行比较，结果说明了超声微波协同萃取技术是一种高效快速的提取方法，具有提取工艺操作简便，杂质含量小，提取成本较低，节约能源等优点，适合甘草黄酮的提取，前景广阔。3将甘草的乙醇提取物先用AB-8大孔吸附树脂柱处理，获得黄酮类物质，含量为96%以上。,以下是本小组经过讨论设计的试验因素表冷凝回流提取法,采用薄层层析分离提纯，用颜色反应进行鉴定。,除此之外还可采用的提取方法：水煮法 超临界流体提取法分离纯化方法：沉淀法 薄层层析法检测方法：薄层色谱 气相色谱 高效液相色谱,Thank you,
