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1、2023/8/5,真菌,1,第二十二章白假丝酵母菌,2023/8/5,真菌,2,重点1.白色假丝酵母菌的生物学特性2.白色假丝酵母菌的微生物学检查,2023/8/5,真菌,3,真菌学概述,概念：是一类有典型的细胞核和完善的细胞器，不含叶绿素，无根、茎、叶分化的真核细胞型微生物。,2023/8/5,真菌,4,真菌的形态特性,（一）单细胞真菌呈圆形，如酵母菌。（二）多细胞真菌由菌丝和孢子组成，称丝状菌或霉菌。菌丝和孢子的形态因菌而异，是鉴定真菌的重要依据。孢子又分为多种，如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。,2023/8/5,真菌,5,单细胞真菌酵母菌：孢子，无菌丝类酵母菌：芽生孢子，假菌丝多细胞
2、真菌 丝状菌（霉菌）：孢子和菌丝菌丝和孢子的形态因菌而异，是鉴定真菌的重要依据。孢子又分为多种，如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。,真菌的形态特性,2023/8/5,真菌,6,单细胞真菌形态,2023/8/5,真菌,7,类酵母菌白假丝酵母菌,孢子,假菌丝,2023/8/5,真菌,8,多细胞真菌形态,2023/8/5,真菌,9,真菌菌落特性1酵母型菌落：是单细胞真菌的菌落，形态与细菌菌落相似，较大，表面光滑湿润柔软、边缘整齐，如新生隐球菌。2.类酵母型菌落：如白假丝酵母菌，形成假菌丝，伸入培养基中。3霉菌型菌落：是多细胞真菌的菌落。菌落呈棉絮状、绒毛状，并产生不同的色素，如皮肤癣菌。,2023
3、/8/5,真菌,10,酵母型菌落,2023/8/5,真菌,11,类酵母型菌落,2023/8/5,真菌,12,霉菌型菌落菌,2023/8/5,真菌,13,培养特性,真菌培养要求不高，常用沙氏(Sabouraud)培养基(含1蛋白胨、4葡萄糖或麦芽糖、2琼脂)培养，适宜温度2228，但深部真菌为37。适宜PH值为。菌落是鉴别真菌的方法。注意以下几点：菌落性质：酵母菌还是霉菌；菌落大小，病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；菌落颜色 病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深；致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开裂；污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。真菌依靠孢子及菌丝进行无性或有性繁殖,2023/8/5,
4、真菌,14,变异性抵抗力,易发生变异形态、培养性状和毒力等抵抗力较强对干燥、紫外线及一般消毒剂抵抗力强对热敏感，601小时菌丝、孢子均被杀死对2%石炭酸、0.1%升汞、2.5%碘酊或10%甲醛敏感对作用于细菌抗生素不敏感，对二性霉素B制霉菌素、咪康唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑敏感。,2023/8/5,真菌,15,致病性与免疫性,致病性1.致病性真菌感染：浅部真菌：角蛋白酶、机械刺激、代谢产物 深部真菌：慢性肉芽肿、组织溃疡2.条件致病性真菌：假丝酵母菌3.真菌超敏反应性疾病4.真菌性中毒症5.真菌毒素与肿瘤免疫性天然免疫获得性免疫：体液免疫、细胞免疫,2023/8/5,真菌,16,真菌感染的病
5、原学诊断,标本的采集临床标本类别：1皮肤的角质性物质：毛发、指(趾)甲、皮屑等。2各种分泌物和排泄物：生殖道、分泌物、耳垢、痰、粪便、尿 液等。3血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。4脓汁及渗出物。,2023/8/5,真菌,17,采集标本注意事项：,1.采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同的临床标本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取病发。深部真菌感染应取血液、脑脊液、脓汁等。2在用药前采集标本 一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。3采集的标本量要足 血液和脑脊液5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份(
6、一份病理检查，一份镜检和培养)。4严格无菌操作 并进行消毒处理，尤其是采集血液和脑脊液标本，要避免污染杂菌。5采集标本立即送检 深部真菌标本最长不得超过2h。,2023/8/5,真菌,18,检验程序P354,检验方法直接检查不染色和染色镜检,2023/8/5,真菌,19,培养检查法培养基的选择培养方法：直接法、试管法、大培养、小培养真菌的鉴定生化反应用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。1.糖(醇)类发酵试验 37孵育，观察糖发酵情况。2.同化碳源试验 含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养 基(45)混合，然后在培养基上分别加糖，置25孵育观察 结果。若24h后无变化可重复加糖。如能同
7、化周围有生长圈，否则无生长。3.同化氮源试验 同化碳源试验相同，但需用无氮源的培养基，不要加糖类，而加入硝酸钾。4.明胶液化试验、尿素分解试验、测定淀粉样化合物5.分解牛乳试验,2023/8/5,真菌,20,抗原检测常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫法。均应设对照，防止发生假阳性和假阴性。动物实验实验的目的是分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究药物对真菌的作用等。如假丝酵母菌接种家兔或小白鼠，肾脏明显肿胀，肾皮质部位有白色脓疡。核酸检测从核酸碱基G+C mol分析、限制性片段长度多态性(RFLP)、Southern印迹分析到脉冲场凝胶电泳(PFGE)、PCR指纹、随机扩
8、增多态性DNA(RAPD)以及DNA特殊片段测序等。,2023/8/5,真菌,21,主要致病性真菌,真菌按其侵犯部位和临床表现分为：表面感染真菌 浅部感染真菌 皮肤癣真菌 皮下组织真菌感染 深部感染真菌：新生隐球菌 条件致病性真菌：假丝酵母菌,2023/8/5,真菌,22,深部感染真菌,深部真菌是侵犯皮下组织和内脏，引起全身性感染的真菌。多数能引起慢性肉芽肿样炎症、溃疡及坏死等病变深部感染真菌分两大类：1.致病性真菌：此类真菌在正常人体内部不存在，一旦侵入机体，即可致病，如组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌等，属外源性，我国少见；2.条件致病性真菌：是人体正常菌群的成员，当机体抵抗力下降时才致病，如
9、新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。,2023/8/5,真菌,23,假丝酵母菌俗称念珠菌，有81个种，其中有11种对人有致病性：白假丝酵母菌、为最常见的致病菌。此外，热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引起疾病。白假丝酵母菌（canidia Albicans）又称白色念珠菌，广泛存在于自然界，也存在于正常人口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病。为条件致病性真菌。,2023/8/5,真菌,24,1微生物特性,白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径2-4m。革兰阳性。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，孢子可伸长成芽管，如不与母细胞脱离而形成假菌丝
10、。,2023/8/5,真菌,25,营养要求不高，在普通琼脂、血琼脂、和沙保培养基均生长。需氧，室温或37，甚至42生长良好。菌落呈酵母样，有大量向下生长的营养假菌丝，表面光滑，呈灰白色或奶油色，有酵母味，如时间长，菌落增大成蜂窝状。在玉米粉吐温-80培养基中可长出厚膜孢子。,沙氏斜面,普通平板,血平板,2023/8/5,真菌,26,2致病性和免疫性本菌可侵犯人体许多部位，机体也可它产生的免疫力,过敏,2023/8/5,真菌,27,3微生物检验 1.标本采集：所致疾病不同，取不同标本。2.检验程序P3543.检验方法及鉴定,1）直接显微镜检查：取脓汁、痰和局部炎症性分泌物直接涂片，有些标本需用K
11、OH先消化，革兰染色后镜检，显微镜见到革兰阳性(着色不均匀)、圆形或卵圆形菌体或孢子及假菌丝，厚膜孢子较少见。,2023/8/5,真菌,28,2）培养检查：将标本接种在沙氏培养基上，25或37培养12d后，可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。,2023/8/5,真菌,29,3)鉴定试验芽管形成试验：将假丝酵母菌接种于0.20.5ml血清中，37孵育1.5h观察有无芽管形成。白假丝酵母菌可形成芽管，其他假丝酵母菌不形成芽管。,芽管,芽管,芽管,2023/8/5,真菌,30,厚膜孢子形成试验：将假丝酵母菌接种于玉米粉培养基25孵育1-2d后，白假丝酵母菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚
12、膜孢子。,厚膜孢子,2023/8/5,真菌,31,糖同化和糖发酵试验：凡发酵某种糖一定能同化该糖，故只需做那些不发酵糖的同化试验。将假丝酵母菌接种糖发酵管，25孵育，一般观察23d，对不发酵或弱发酵管可延长至10d或24周。观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。现在商品化的产色培养基可快速鉴定白假丝酵母菌和其他假丝酵母菌。,2023/8/5,真菌,32,TZC试验：将白色念珠菌接种于含0.005氯化三本四氮唑的沙保培养基中，经2225，2448h培养，白色念珠菌不变色或仅淡红色，其他念珠菌或酵母菌呈红色或深红色(被还原为红色的三苯甲)。血清学试验：取病人血清作ELISA、免疫印迹法等检测白假
13、丝酵母菌抗原。核酸检测：用PCR法将白假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具有较好的敏性和特异性。动物试验：,2023/8/5,真菌,33,新型隐球菌,新型隐球菌又名溶组织酵母菌，是土壤，鸽类，牛乳、水果等的腐生菌，也可存在人口腔中。可侵犯人和动物，一般为外源性感染，但也可能为内源性感染，对人类而言，它通常是条件致病菌。,2023/8/5,真菌,34,较大球形，直径可达520um，有肥厚的荚膜，折光性强，一般染料不易着色，难以发现，称隐球菌，用墨汁阴性显影法镜检，可见到透明荚膜包裹着菌细胞，菌细胞常有出芽，但不生 成假菌丝。,生物学特性,2023/8/5,真菌,35,在沙保氏琼脂及血琼脂
14、培养基上，于25及37皆可生长，而非病原性隐球菌在37不能繁殖。酵母型菌落，呈白色。本菌能分解尿素，以 此与酵母菌和念珠菌鉴别。,2023/8/5,真菌,36,致病性,本菌大多由呼吸道转入，在肺部引起轻度炎症，或隐性传染。侵犯中枢神经系统，发生脑膜炎、脑炎、脑肉芽肿等。此外可侵入骨骼、肌肉、淋巴结、皮肤粘膜引起慢性炎症和脓肿。,2023/8/5,真菌,37,微生物学检验,1直接镜检：常用墨汁涂片法。2分离培养：在沙保培养基上，室温、3723天即可长出典型酵母型菌落。有荚膜者菌落粘稠。,2023/8/5,真菌,38,3糖同化及发酵试验：本菌不发酵各种糖类，但能同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、肌醇，不同化乳糖。4酚氧化酶试验：在含多巴橘橼酸铁和咖啡酸培养基中，经天培养，新型隐球菌出现棕黑色菌落。尿素酶试验：新型隐球菌产生尿素酶，在尿素培养基（含尿素及酚红指示剂）中分解尿素形成氨和CO2，以致培养基的pH值升高，使酚红由黄变为粉红色为阳性，而白色念珠菌为阴性。,2023/8/5,真菌,39,谢谢,2023/8/5,真菌,40,临床标本 直接检查 分离培养 其它方法核酸 直接 25 35 检测 检测 动物检测 镜检 抗原 抗体 试验 菌落观察 固定标 墨汁 KOH法 本染色 染色 镜检 小培养 生化 荧 革 P 亚 反应 光 兰 A 甲 S 基 蓝,
