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1、粗脂肪的提取和定量测定索氏提取法,一、实验目的,掌握用索氏提取法测定粗脂肪含量的原理及操作。熟悉重量分析的基本步骤。,二、实验原理,脂肪是丙三醇（甘油）和脂肪酸结合成的脂类化合物，能溶于脂溶性有机溶剂。本实验利用脂肪能溶于脂溶性溶剂这一特性，用脂溶性溶剂将脂肪提取出来，借蒸发除去溶剂后称量。整个提取过程均在索氏提取器中进行，通常使用的脂溶性溶剂为乙醚，或沸点为3060的石油醚。用此法提取的脂溶性物质除脂肪外，还有游离脂肪酸、磷酸、固醇、芳香油及某些色素等，故称为“粗脂肪”。同时，样品中结合状态的脂类（主要是脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。,索氏抽提法测定脂肪最大的不
2、足是耗时过长，如能将样品先回流12次，然后浸泡在溶剂中过夜；次日再继续抽提，则可明显提高提取率。,三、实验器材,1.BS210S型电子天平：参见左图北京赛多利斯天平公司生产，公用。操作指南：调整水平度，插上电源，启动“ON/OFF”开关，按一下回零挡“TARE”，使屏幕上显示0.0000。推开玻璃门，轻轻将样品置于称量盘上，关上玻璃门，待屏幕上显示的数字稳定后记录下来，即为样品的重量（g）。注意，每次称量前都必须按一下回零挡“TARE”，使屏幕上显示0.0000。称量室内尤其是称量盘上必须保持清洁、干燥；若有药品撒落，立即用软毛刷清理干净。,2.HH-2型数显恒温水浴锅,操作指南：调整水平度，
3、插上电源，启动“,3.101C-3型电热鼓风干燥箱,操作指南：插上电源插头，按下绿按钮（电源开关）和黄按钮（鼓风开关），将“设定/测量”按钮置于设定挡，调节“温度设定”旋钮，使显示器中的数字为所需的温度，再将“设定/测量”按钮置于测量挡，此时显示器中的数字表示烘箱内的实际温度。将加热旋钮（一共有3个）打到适当的挡位，烘箱开始加热。此时绿灯亮，当温度达到所设定值时，红灯亮，烘箱停止加热。以后烘箱会一直通过不断的加热-停止过程来保持恒温，红绿灯也会相应地交替闪亮。请注意，本实验由于设定温度为120，故在取出被烘干物品时，请戴上手套。,4.索氏提取仪,由冷凝管、抽提管和平底烧瓶三个部件组成，通过标准
4、磨口相对接。,搭建装置：用铁架台、只十字夹、只龙爪、根乳胶管和套索氏提取仪来搭建装置。注意按照由下而上的顺序来搭建，参见图2-7图2-11。固定点分别是平底烧瓶的颈部和提取管的颈部，索氏提取仪的高度以平底烧瓶的瓶颈略高于恒温水浴锅的液面为宜。注意：用龙爪夹玻璃仪器时，要先用手找好感觉，不能太紧（否则会夹破）也不能太松（否则会打滑而导致索氏提取仪的标准磨口接口漏气）。,5.其它器材：,不锈钢镊子、药勺、滤纸、铁架台、十字夹、龙爪、手套、乳胶管。,四、实验试剂,称取样品的重量根据材料中脂肪的含量而定（参考表1-1）。通常脂肪含量在10%以下的，称取样品1020g。脂肪含量为50%60%的，则称取样
5、品24g。,表1-1几种干的植物种子和种仁中油脂的百分含量,将样品在80100电热鼓风干燥箱内烘去水分，一般烘4h，烘干时要避免过热。样品颗粒不宜太大，一般要在研钵中研碎样品。样品若是液体，应将一定体积的样品滴在滤纸上，在6080电热鼓风干燥箱内烘干后，再进行实验。,实验试剂,.花生仁。.石油醚：C.P.，沸程3060。,五、实验操作,准备工作：将恒温水浴锅的水温事先加热（80）。务必保证提取管和烧瓶内干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120烘干。折滤纸斗：取一张11cm的滤纸，折成筒状，再将其一端折起来封死，便做成了滤纸斗。称样：先将数粒花生仁去皮，在碾钵中用碾锤彻底捣碎作为实验样品。
6、参照实验设备和器材，将滤纸斗在电子天平上称重，然后用药勺取勺（约2g）样品装入滤纸斗中，把滤纸斗的开口处折起来封死；防止样品泄出滤纸斗。调整滤纸斗的高度，使其放在抽提管中时略低于虹吸管的上弯头处。将装好样品的滤纸斗放在电子天平上称重，两质量之差即为样品的质量。,提取：将索氏提取仪按照图2-7图2-11所示，从下至上安装。首先安装好烧瓶，并调整其高度，使其刚好能浸入水浴锅中的水中。将装置从水浴锅的水中取出，继续安装提取管，把装有样品的滤纸斗放入提取管内，向提取管中缓缓倒入石油醚直至液面达到虹吸管上弯头部，正好虹吸一次；再向提取管中倒入石油醚，使其液面达到第一次液面的一半。用乳胶管将冷凝管与自来水
7、管相连，将冷凝管安装到提取管上，检查一下，确保所有接口均对接完好（不漏气，不打滑）。轻轻打开自来水（冷凝用），将索氏提取仪整个装置放入恒温水浴锅中加热提取（水温80左右），请观看软件中的视频索氏提取仪的安装。提取时间24h，约虹吸20次以上，记录每次虹吸所需的时间和虹吸次数。附注：若要将样品的粗脂提取完全，提取时间至少为12h以上。由于实验时间的限制，我们的提取率只能达到80左右。,回收石油醚：提取2h后，当石油醚在提取管中的液面即将达到虹吸管的上弯头处时，从水浴锅中取出索氏提取仪装置，室温冷却510min；取下平底烧瓶，将提取管的下端口插入回收瓶中，倾斜装置，提取管中的石油醚会虹吸而流入回收
8、瓶中，达到回收的目的。再装上平底烧瓶，继续放入恒温水浴锅中加热直至冷凝管下端无石油醚滴下，表明平底烧瓶中的石油醚已经蒸干。注意：必须蒸干后才能放入干燥箱烘干，否则会引起火灾。取下平底烧瓶，回收提取管中的石油醚。,称量粗脂质量：将平底烧瓶放入120的电热鼓风干燥箱中烘15min，取出冷却后称重（须戴手套，以免烫伤）。再将平底烧瓶用洗涤剂洗净，于120的电热鼓风干燥箱中烘干（约15min），取出冷却后称重，两者的质量之差就是粗脂的质量。,清洁 从提取管中取出滤纸斗，清洗提取管，整理好桌面上的仪器和试剂，并注意清洁自己的操作台，请老师验收，实验报告当场交给老师。计算 样品粗脂的含量（%）=（粗脂的质量/样品的质量）*100%,图2-9 索氏提取仪示意图,左：烧瓶的安装（注意高度）右：提取管的安装,左：冷凝管的安装 右：水浴加热中的索氏提取仪,记录与计算汇总,
