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1、繁殖技术,繁殖监测技术：发情鉴定、妊娠诊断、性别鉴定、激素测定等。繁殖调控技术：同期发情、超数排卵、胚胎移植、人工授精、体外受精、显微授精、胚胎分割、性别控制、动物克隆、生殖免疫,人工授精,一、人工授精 是用人为的方法利用器械采集公畜的精液经过检查和处理后，再用器械将精液注入到发情母畜的生殖道内，以此来代替公母畜自然交配的一种科学配种方法。,二、人工授精的意义,（一）提高优良种公畜的配种效能；（二）加速家畜繁殖改良，促进育种工作的进程；（三）降低饲养管理费用；（四）防止生殖道传染病的传播；（五）提高母畜的受胎率；（六）可以扩展家畜配种的范围。,猪人工授精技术环节,一、采 精,（一）采精方法 1
2、、剪去包皮部长毛，清洁体表。2、挤净包皮积液，消毒、清洗。3、手握法采精，弃掉第一段精液。,一、采 精,（二）注意事项 1、预热：集精杯、载玻片、盖玻片、精液处理器皿、稀释液以及密度仪等。2、戴双层塑料手套。3、集精杯内一定要有4层纱布或滤纸。,一、采 精,（三）采精频率 公猪每周采精的次数。成年公猪每周采精2-3次。青年公猪每周采精1-2次。,二、精液品质检查,（一）采精量 猪的采精量一般为150300ml 国家标准：不少于100ml 可直接称重计算（1g=1mL）,二、精液品质检查,（二）颜色 正常为乳白色或灰白色。红色、褐色、淡黄色？（三）气味 正常精液无异味，略带有腥味。臭味？（四）云
3、雾状 原精，精子成群运动所产生的上下翻滚现象。,二、精液品质检查,（五）精子活力1、活力的定义 指37环境下精液中直线前进运动的精子数占总精子数的百分比。十级一分制；国标：72h内不低于0.6。2、测定方法 取1滴精液置于载玻片上并加盖玻片，在37条件下，用显微镜在200-400倍下观察活力，每样片观察3个视野，求平均值。,二、精液品质检查,3、注意事项（1）评价精子活力是根据直线前进运动精子数而定。（2）载玻片和盖玻片要在37下预热。（3）最好在暗视野中观察。（4）原精密度大时，可稀释后评定。（5）也可连接显示器观察。,二、精液品质检查,（六）精子密度 指每毫升精液中所含精子的个数。国标：至
4、少1亿/ml 1、估测法：精子间的间隙小于一个精子长度为密；间隙相当于一个精子长度为中；大于一个精子长度为稀。,二、精液品质检查,2、血细胞计数法计算室构造:计算室的高度为0.1mm，边长1mm，为一正方形，由25个中方格组成，每一中方格分为16个小方格。,二、精液品质检查,(1)精液稀释取猪常温精液，用3%的NaCl 溶液将精液稀释20倍，充分振荡混匀。(2)精子的计数将盖好盖玻片的计数板置于低倍镜下观察，首先要求找到清晰的计数室。将稀释好的精液滴一滴于计数板盖玻片的边缘使精液自动渗进计数室。,二、精液品质检查,静置2min，在400-600倍下检查。数出四角及中央共五个大方格的精子数将所数
5、到的精子数代入下式，即得出每毫升的精子数：,1ml原精的精子数=x（5个大方格内的精子数）5（等于25个大方格内的精子数）10（等于1l内的精子数）1000（等于1ml被检稀释精液样品内精子数）被检精液稀释倍数（20）,二、精液品质检查,3、光电比色法 此法快速、操作简便，但价格较高。其原理是根据精液的透光性，精子密度越大，透光性就越差。,二、精液品质检查,（七）精子畸形率 凡形态和结构不正常的精于都属畸形精子。国家标准：不高于20%测定步骤：稀释 涂片 固定 染色 镜检,二、精液品质检查,三、精液稀释,（一）稀释方法1、精液稀释应在采精后立即进行。2、采用等温稀释，根据精液温度调节稀释液温度
6、。3、将稀释液沿着精液容器的壁缓慢加入精液中，边加入边搅拌。4、如需高倍稀释，应先低倍稀释，然后再高倍。,三、精液稀释,一定要提前1-2h配制好稀释液。,三、精液稀释,（二）稀释倍数的计算例：一头种公猪新鲜精液的精子活力为0.7，密度是3亿/ml。国家标准要求母猪输精时要求有效精子数不少于25亿，输精量为80ml。本次采得的精液可稀释多少倍？1ml原精液中有效精子数=3亿/ml0.7=2.1亿/ml 稀释后1ml精液中有效精子数=25亿80ml=0.3125亿/ml 稀释倍数=2.1亿/ml0.3125亿/ml=6.726倍,三、精液稀释,（三）精液的分装1、活力不低于0.7，才可分装，分装过
7、程中要做到轻、快、稳，避免操作过程中物理损伤。2、要排空输精瓶或袋内空气，延长精子存活时间。3、国家标准要求输精剂量为80-100ml。4、包装应标明产品信息。,四、精液保存,1、缓慢降温到17（1h-2h），放入恒温箱保存。2、精液瓶最好平放，以增大接触面积。精液每隔4h-8h摇动一次，摇动时应轻缓均匀。,输精方法1、母牛的输精 1）阴道开张器输精法 操作时一手持开张器，打开母牛阴道，借助光源找到子宫颈口，另一只手握吸有精液的输精器，伸入子宫颈12皱褶处(23cm)，慢慢注入精液。2）直肠把握输精法 一只手伸人直肠内把握住子宫颈，另一手持输精器，先斜上方伸入阴道内进入510cm后再水平插入到
8、子宫颈口，两手协同配合，把输精器伸人到子宫颈的3-5个皱褶处或子宫体内，慢慢注入精液。,2、母猪输精 输精时，把输的精导管涂以少量润滑剂，插入阴道内，先斜上方伸人，避开尿道口后再平直前进，边旋转边进入子宫，当遇到阻力时，将输精管稍向后拉，然后再向前伸人。胶管到达子宫后，接上吸有精液的注射器，缓缓注入精液。精液温度不要低于25，否则不能刺激子宫收缩造成精液倒流。输精完毕后，慢慢抽出输精管，按压母猪臀部并使猪安静片刻，以防精液倒流。,3、母羊的输精 绵羊和山羊都采用阴道开张器法，其操作与牛相同。由于羊的体型较小，为工作方便，提高效率，可在输精架后设置一坑，或安装可升降的输精台架。在一些地区，有人采
9、用由助手抓住羊后肢使其倒立保定，也较方便。,4、母马(驴)的输精 母马的输精器由一条长60 cm左右，内径2 cm的白色橡胶管和一个注射器组成。输精时，右手提起输精管，用食指和中指夹住尖端，使胶管尖部隐藏在掌内，伸人母马阴道内，找到子宫颈的阴道部，用食指和中指撑开子宫颈，同时左手向子宫内导入胶管，将输精管插入子宫内10-15cm，提起注射器，并推压活塞使精液慢慢注入，然后从胶管上拔下注射器，再抽一段空气重新装在胶管上，推人，使输精管内的精液全部排尽。输精完毕后，把胶管轻轻抽出，并轻轻按压子宫颈使其合拢，防止精液倒流。,猪人工授精技术注意事项,严格的无菌观念，如采精时带双层手套；输精时确保有公猪
10、在场，但输精前1h不见面；每头母猪输精2次，可提高7%的妊娠率；避免用力挤压精液瓶，让精液在子宫收缩力和重力作用下进入体内，抚摸和压背等方式；输精过程要慢，至少5min，输精结束后将输精管留在阴道内3min，并抚摸。拍打？,人工授精技术的改良,仿生输精技术,深部输精技术,胚胎生物技术,主要内容 胚胎移植的概念 胚胎移植的意义 胚胎移植生理学基础 与基本原则胚胎移植的技术程序,一、概念,胚胎移植（embryo transfer，ET)也叫受精卵移植。它是将体内、体外生产的哺乳动物早期胚胎移植到同种的生理状态相同的雌性动物生殖道内，使之继续发育成为正常个体的新技术。所以也称为人工受胎或借腹怀胎。其
11、中，提供胚胎的个体称为供体(donor)，接受胚胎的个体称为受体(recipient)。,Pronucleus 8 cells embryo,Morula early blastocysts,二、胚胎移植的意义,1.能充分发挥优秀母畜的繁殖潜力。,2.能节省种畜的引进费用，便于品种资源保存。,3.可以加速品种改良步伐，扩大良种畜群,应用MOET核心育种方案，公牛的遗传评定时间可缩短40，生产性状的年遗传进展比常规的人工授精提高20,4.能诱发母牛怀双胎。,但是 部分后代会没有生殖能力，因此多在肉牛上应用。,5.可以防止畜群中疾病的传播和克服母畜不孕,在美国科罗拉多州立大学，一头长期屡配不孕的母
12、牛通过胚胎移植，在15个月内得到30头犊牛。,6.研究的手段,例如,体外受精(in vitro fertilization),性别控制,转基因动物等。,三、胚胎移植的生理学基础与基本原则,（一）生理学基础,1、母畜发情后生殖器官的孕向发育2、早期胚胎的游离状态3、子宫对早期胚胎的免疫耐受性4、胚胎遗传物质的稳定性,（二）基本原则,1、胚胎移植前后所处环境的同一性：1）供体和受体在分类学上的相同属性；2）胚胎发育阶段与受体发情时间上的一致性3）胚胎发育阶段与受体解剖部位的一致性,2、胚胎发育的期限 一般配种3-8d采集胚胎3、胚胎的质量 质量的好坏直接影响移植结果4、经济效益或科学价值,四、胚胎
13、移植的技术程序,供体和受体的选择超数排卵处理供体母畜的配种胚胎的收集胚胎的检查胚胎的保存与培养胚胎的移植,1.供体和受体的选择,供体应具有相当高的育种价值供体生殖机能应处于较高的状态受体应非优良品种受体健康状况良好供受体发情时间应接近或一致,意义：让每个供体提供更多的胚胎处理时间：牛：预计自然发情时间的前4天，或发情周期的第16-17天羊：发情周期的第12-15天，促性腺激素处理的第二天或第三天，注射PG,胚胎移植的技术程序,2.超数排卵处理,3.供体母畜的配种,4.胚胎的收集,气球充气,气球封闭子宫体,子宫体远端冲洗胚胎,冲胚液充满子宫角,回收冲胚液,手术法冲胚（surgical flush
14、ing）,胚胎过滤系统,胚胎评级,胚胎移植的技术程序,5.胚胎的检查,6.胚胎的保存（embryo preservation）,异种活体保存胚胎常温保存1525 胚胎低温保存010 冷冻保存,手术法移植,胚胎移植的技术程序,7.胚胎移植,非手术法移植,性别控制技术,一、性别控制技术的概念和意义（一）概念 是指通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一门生物技术,（二）意义,1、使限性生产性状（泌乳）和受性别影响的生产性状（肉用、毛用）能获得更大的经济效益。2、充分利用良种资源，加快优良个体繁殖速度。3、是增强良种选育的强度和提高育种效率,二、性别控制技术的方法,(一)利用流式细胞仪分离X精子和Y精子（二）早期胚胎的性别鉴定 1、核型分析法 2、SRY-PCR法 3、免疫学方法,But in 1996 and 1997 and thereafter,Hello Dolly（1996年7月5日2003年2月14日）,转基因猪研究与应用方向,提高生长速率,异种器官移植,减少排污,生物反应器,改善肉质成份,提高抗病能力,医学疾病模型,提高瘦肉率,转基因生物新品种培育,国家中长期科技发展规划重大专项,国家专项拨款161亿元，国家发改委、农业部、科技部和地方财政等配套款项可高达300亿元以上，专项将历时13年（2008-2020年）。,
