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1、2023/8/8,1,药理实验研究的设计及实施中应注意的问题,2023/8/8,2,药理实验研究中，为避免今后不出现不必要的麻烦，应该充分考虑以下几方面的问题：(一)确定目标和撰写好开题报告(二)实验方法与观察指标的选定原则(三)动物实验和实验动物的基本要求(四)掌握实验设计中重复、对照、随机的原则(五)作好预实验(六)实验记录中的问题(七)撰写好论文的要点,2023/8/8,3,(一)确定目标和撰写开题报告的重要性：1.目标 进行实验设计时，首先必须明确实验研究的目标（这一目标必须集前沿性、开创性、实用性和可行性为一体）。然后，始终围绕这一目标来设计实验，切忌目标不明、贪大求全、胸中无数。大
2、量阅读文献，始终做到胸中始终有数、有的放矢。,2023/8/8,4,要明确科学研究的目的是：形成和证实予期的结论（假说），并形成进一步研究的新框架，而不是简单的收集数据。如果没有结论，数据何用？同时，你还得把所获得的结论让别人接受，并传授给别人。所以，目标和结论始终是科研工作的核心。必须始终要有明确的目标，这对于开展你的研究工作是大有益处。,2023/8/8,5,所以研究中：开始时，应有目标和完善的计划；工作结束时，应有充分的总结。但最有效率的做法是：在实验中，始终围绕目标，并及时地、不断地分析、总结。并可以随时调整实验目标，而不是等到实验完成时，才开始收集、整理数据和总结。,2023/8/8
3、,6,2.开题报告的撰写：开题报告的重要性 开题报告是研究的计划及论文的提纲，应十分重视，不应掉以轻心。开题报告不仅仅要列出各分题研究的内容，而是应按照实验研究的目的、假说、结论来精心组织。,2023/8/8,7,分成三大类：（1）引言：为什么我要做这件工作？别人巳作了哪些工作？我的主要的目的和假设是什么？（2）结果和讨论：结果可能是什么？实验和测试方法是什么？（3）结论：我所作的一切意味着什么？是否能证实或否定了什么假设？我的结论可能是什么？结果与他人不同之处何在（价值）？接下来，把每一部分再仔细组织，尽可能以 清晰、紧凑的流程图或图表来展示。,2023/8/8,8,另外须注意：如果在实验进
4、行中，你发现你得到的数据似乎可以更好的验证其他假设时，也不必担心，把它们都作出来后，再进行假设、目的和数据的其它组合。有时，当一篇论文完成时，它的目的和开始时已完全不同了。,2023/8/8,9,(二)实验方法与观察指标选定原则 1.观察指标要有专一性和可靠性，能反映被研究问题的本质：例如：用实体瘤筛选抗癌药，常以瘤重量变化作指标；而用腹水癌筛选时，则常以动物存活日期、腹水、癌细胞数作指标。又例如：动脉血压，在研究抗高血压药时，它是个特异性药理指标；但研究治疗急性肾炎的药时，则并非所有急性肾炎病人特异性指标(约20、30病例血压不升高)，而应选择尿常规和肾功能等作为重点指标。,2023/8/8
5、,10,2.观察指标必须尽量是可用客观方法定性、定量地测量的：如血压、血糖、心率、血细胞数目、体重等都是客观准确的定量数据，应尽量多用。而抑郁、愉快、麻木、头昏、疼痛等主观感觉，应尽量少用。,2023/8/8,11,(三)动物实验和实验动物要求：1.动物实验的基本要求：当前，动物实验和实验动物都要求达到实验室操作规范（good laboratory practice,GLP）和标准操作程序（standard operating procedure,SOP）。即对实验动物、实验室的条件、工作人员的素质、技术水平、操作方法，都要求标准化和规范化。,2023/8/8,12,2.国际动物实验工作的新要
6、求（3R）要求：Reduction（减少）:是指应尽量减少实验用动物数和实验的次数。Replacement（替代）：是指尽可能采用其它的方法替代动物实验，如用细胞组织培养、物理、化学等方法代替实验动物的使用。Refinement（优化）：是指对待实验动物和动物实验的工作，应尽量做到尽善尽美。,2023/8/8,13,3.微生物学和寄生虫学标准：要求选用三级实验动物：排除人兽共患病 排除实验动物本身的传染病，排除影响实验研究的相应微生物和寄生虫 使实验研究始终没有或很少有外源干扰，以有 利于实验获得可靠的数据。,2023/8/8,14,4.从实验有效性来选择实验动物：应选择合适的实验动物进行实验
7、，才能证明其阳性存在的有效性。因不同种类的动物对同一药物的反应，一般是相似的；但有的不仅有量的差异，甚至还可有质的不同。如组胺对狗，猫等可使血压；而对家兔则可使血压。因此一个药物的研究往往需要应多用几种动物，其中至少应有一种哺乳类。,2023/8/8,15,又如以高胆固醇膳食饲喂鸡、鸽、猪、兔、狗、猴，均可以诱发的高脂血症或动脉粥样硬化。但家兔主动脉粥样硬化明显，而心肌冠状动脉只有粥样小斑块，只引起小灶性心肌梗塞。而猴、猪情况与人较类似，其心冠状动脉前降支可形成较大斑块，较易引起大片的心肌梗塞。所以一般应选择一种以上的实验动物进行实验，才能证明其阳性的普遍性。,2023/8/8,16,5.有了
8、实验结果还必须反复推敲：是偶然？还是必然的？还需进一验证或重复试验，结果才具有说服力，有依据。最后，动物实验的效果还须要要与人比较，是否接近于人？如猕猴和猩猩都是灵长类，猩猩是猩猩属，猕猴是猕猴属；而人是人科人属。但因猩猩和猴在解剖学上、组织器官功能上、白细胞抗原上、染色体带型上与人都比较相似。其试验结果一般是较有说服力的。其它动物就不一定了。,2023/8/8,17,6.动物的年龄、性别、机能状态及生活环境：应根据实验目的要求，选择和安排动物，使实验更符合临床要求。如抗前列腺肥大药应选老年动物 避孕药应选性成熟的动物等 即符合代表性的原则,2023/8/8,18,7.其它因素：如动物性别、年
9、龄、体重、营养状况、饲养环境、饲养人员的素质和责任心等都可影响实验结果。,2023/8/8,19,三.各种动物或标本的特点：（一）小鼠：小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应。全世界科研工作者均采用国际公认的品系的小鼠和按标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、可重复性均较高，易得到国际认可。因此，小鼠被广泛应用于种类科研实验中，其用量最大，用途最广。,2023/8/8,20,药品的药理学试验的初筛，药物的实验治疗等，一般可选用小鼠。毒理学试验：包括急性、亚急性和慢性毒性试验、三致（致癌、致畸、致突变）试验、LD50测定等都可选用小鼠和大鼠。,2023/8
10、/8,21,二、大鼠：也是医学上最常用的实验动物之一，价格较廉，可以大量供应。其用量仅次于小鼠，大鼠体型比小鼠大，且已育成近交系，突变系和封闭群。它们还可用于生物学和遗传学特性研究。,2023/8/8,22,生理学研究：大鼠可用于垂体、肾上腺系统的研究。利用手术摘除某些内分泌器官，可以了解各腺体的作用和它们之间的互相关系。也可用作生殖生理、胚胎学、畸胎学的模型动物。大鼠无胆囊，胆管相对较粗大，可采用胆总管插管收集胆汁进行消化功能的研究。,2023/8/8,hujinguan,23,药理学和毒理学研究：常用的高血压大鼠（SHR）和中风型（SHRSP）大鼠，作心血管药物药理和药物筛选。大鼠还可作长
11、期毒理学试验研究。大鼠还可用于核医学、计划生育、胃溃疡、中毒性肝炎、肝坏死、肝硬化、实验性腹水、关节炎和老年病学、龋齿、慢性支气管炎等疾病的实验模型。,2023/8/8,24,三、兔：免疫学研究：由于抗原刺激机体后，体液免疫应答反应强烈，因此，家兔被广泛应用于制备高效价、特异性强的免疫血清。毒理学实验：利用家兔的皮肤和眼睛对化学试剂的敏感反应做化妆品、致畸因子的研究。,2023/8/8,25,生殖生理和避孕药的研究：家兔可诱发排卵，所以能准确地计算排卵时间，获得不同时间的胚胎学资料。眼科研究：新西兰兔中出现的遗传性青光眼，是很好的青光眼模型，为研究人的青光眼发病及治疗提供了理想的实验动物。也用
12、于角膜瘢痕和角膜移植研究。,2023/8/8,26,心血管疾病研究：家兔实验性动脉粥样硬化是20世纪初形成的模型，沿用至今。家兔可形成高血脂症、弥漫性血管内凝血、急性循环障碍、心肌梗塞、心律失常、高血压、肺原性心脏病、慢性肺动脉高压、肺心病和一过性高血压等模型。热原试验：SPF家兔对热原物质反应灵敏。常规应用于制药和药检部门检查制品的热原性。,2023/8/8,27,四、豚鼠：感染和变态反应试验：豚鼠与人肾上腺分泌产物的效应反应相似；与人的补体系统几乎可以相互转变，皮肤的迟缓过敏反应，过敏反应，皮质醇的主要成分为糖皮质激素均与人近似。豚鼠还可作许多传染病试验。如布鲁氏杆菌、炭疽杆菌、结核分枝杆
13、菌、假结核杆菌、鼠疫杆菌试验。,2023/8/8,28,维生素C的研究：豚鼠体内不能合成维生素C，当饲料缺乏维生素C时则出现坏血病。豚鼠可作为这方面的模型用于实验研究。听力试验：豚鼠的耳蜗对声音很敏感，可用于如链霉素毒性试验。,2023/8/8,29,五、狗：实验外科学研究：狗主要应用于实验外科学研究，临床医学在研究探索新的手术或麻醉方法时，如心血管外科、胸外科、断肢再植、器官和组织移植等等，常须首先选用狗作动物实验，取得经验与技巧以后才试用于临床。药理、毒理学研究:狗可选用于各种化学物品及药品的临床前毒理学实验。,2023/8/8,30,六、猫：猫的用量相对较少，主要应用于以下几个方面的研究
14、工作。生理学研究：猫具有极为敏感的神经系统，头盖骨和脑的形状固定，是脑神经生理学研究的较好实验动物。药理学研究：猫可用于脑室灌流研究药物的作用部位，药物通过血脑屏障的机理和过程。猫血压稳定，血管壁韧，心搏力强，便于手术操作，能描记出完好的曲线 故猫适用于进行药物对血液循环系统作用机理的分析研究等。,2023/8/8,31,七、灵长类：灵长类和人类的分类学地位最为接近，在形态和功能上有很多与人相似之处，因此是生物医学研究中的最佳模型。生理学研究：用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌及老年医学方面的研究。,2023/8/8,32,传染病和疫苗的研制：某些灵长类动物可感染人类所特有的传染
15、病，特别是其它动物不可复制的传染病，如脊髓灰质炎、脑炎、肝炎、麻疹、痢疾和疟疾等。药理学研究：恒河猴的生殖生理和人类非常相似，故可用做人类避孕药的研究。新的镇静剂进入临床使用前要用猴进行试验。艾滋病动物模型：用猴免疫缺陷病毒感染猕猴，可获得与人类相似的艾滋病，提供研究用动物模型。,2023/8/8,33,八、两栖类：两栖类动物主要应用生理和药理学科研与教学。用蛙腿腓肠肌和坐骨神经观察外周神经生理功能与药物对外周神经和骨骼肌的作用。刺激蛙皮肤观察反射弧，作脊髓性休克，脊髓反射分析实验。,2023/8/8,34,供药理实验的动物：既可是正常动物、麻醉动物及病理模型的整体动物实验；也可采用离体器官、
16、组织和细胞的离体实验等。,2023/8/8,35,（四）实验设计的三大原则：重复性(Replication)对照（comparison）随机性(Randomization),2023/8/8,36,1.重复性与样本的大小：（1）重复性：由于实验动物的个体差异或实验误差，在适当范围内重复愈多，则实验结果愈正确性和可靠。（但必须是在同样条件下，把实验结果重复出来，才算是可靠的实验）重复还可予测实验变异（系统误差）。,2023/8/8,37,（2）样本的大小：在进行药理实验设计时，碰到的另一问题就是该用多少动物或多大的样本？样本加大肯定能提高精密度；但是人力，物力和时间的消耗也随之增加，不符合经济原
17、则。而且单纯加大样本也不一定能排除“偏差”。所以，在实验设计中，正确估计样本大小，是一个重要的课题。,2023/8/8,38,样本大小确定的一般原则：按统计学要求，进行样本大小的设计算。根据他人的研究经验、预试的结果和实验所需的精确度来综合考虑。一般来说，计量研究，动物可少些；计数研究，动物需多些。大、小白鼠，两组对比时：计量资料每组不应少于10只；计数资料每组不少于30只。豚鼠、家兔：计量资料时每组不少于6只，计数资料每组不少于20只。猫、狗：计量资料不应少于5只，计数资料不少于10只等。,2023/8/8,39,2.对照：（1）对照的原则（4点）a.所有药理实验的设计都必须设立对照组。b.
18、对照组与实验组之间应除用药、处理的区别之外，其他条件（如实验动物、实验方法、仪器、环境及时间等）应尽可能一致。d.在动物种属，性别、窝别，年龄，体重，健康状况等方面也应尽量相同。,2023/8/8,40,c.对照组动物数：把对照组动物安排得比试验组动物少一些是错误的；其实按 t 公式，10个对照与20个治疗动物、20个对照与10个治疗动物的结果可靠性是相同的。最经济的是两组动物数相等。当然，如果经过预试，估计试验组会有较多的动物在实验结束前死亡，试验组动物数也可适当增加。,2023/8/8,41,(2)对照形式：根据实验研究的内容的不同，有：a.空白对照：是指在不加任何处理的“空白”条件下进行
19、观察的对照。较少使用。b.假处理对照；即除研究的药物外，对照组的动物要经受同样的处理（如麻醉、手术、餵饲或注射不含药物的溶媒或生理盐水等）。这种对照的可比性好，常使用。c.标准对照；以已知的标准值或正常值作为对照如 长毒中，药物对血细胞的影响等。d.组间对照：在实验中，设定若干组，各组间互为对照，平行进行对比，最常使用。（后面有专门论述）。,2023/8/8,42,3.随机化：由于药理实验的对象为生物样本，本身存就在有差异。因此，除设立“对照组”外，样本的分组的随机化也十分重要，因为 随机化可以避免有意或无意造成的“偏差”。如采用随机表。要注意随机不等于随意。,2023/8/8,43,举例：完
20、全随机设计法：该法主用于单因素、大样本的实验。即先将全部动物编号，按统计学书中的“随机数字表”，任取一段数字，依次排配各个动物的编号。,2023/8/8,44,除3,2023/8/8,45,(五)预实验 预实验是必要的，它是正式实验前的一亇重要步骤，也是实验设计的实践探索。根据预实验的结果或经验教训，可对原始的实验设计作必要的修正，是完善实验设计的一个不可缺少的步骤。,2023/8/8,46,一般通过预备实验可解决以下问题：1.修正实验动物种类和例数。2.检查实验的观察指标是否客观、灵敏和可靠 3.改进实验方法和熟练实验技术操作。4.探索试验药物的剂量，确定正式试验用药剂量 5.发现值得进一步
21、研究的线索。,2023/8/8,47,(六)实验记录 通过预备实验后，应拟出正式实验时的记录的格式，并打印成册。以保证正式实验能有条理、按秩序地进行，不至遗漏重要的观测指标和项目，保证结果的完整性和正确性。,2023/8/8,48,实验记录一般应包括以下内容：1.实验动物：品种、体重、性别、标记，编号等。2.实验药物：来源、批号、剂型，浓度，剂量及给药途径等。3.实验环境：实验时间(日期，钟点)，室温，湿度等。4.实验方法、步骤及进程：详细的时间记录。5.观测指标结果的记录：包括原始描记图纸等的搜集。6.实验工作者：如轮值安排的记录。,2023/8/8,49,（七)论文撰写 1.每次实验告一段
22、落后，对所获结果须随时作出统计、整理、分析处理及思考。有时可发现一些问题，便于及时小结，有利于改进下一步工作，少走或不走弯路，为最后撰写打下所坚实的基础。,2023/8/8,50,题目：画龙点睛，反映全文的精华摘要：最重要的部分！背景写清,结果有数据,结论要推敲前言：交代来龙去脉方法与结果：是人家能重复的方法讨论：结合你的发现，忌变成综述文献：要充分，引高和新的文章 图表：规范，精致下面具体讨论如下：,2023/8/8,51,前言,文章的第1或2段应该完全用来写前言。要特别注意写好开头几句话，最好是简洁地陈述工作的目的，并指明该工作为什么重要。如为什么研究？什么意义？创新在什么地方（也可包括有
23、待解决的问题）？,2023/8/8,52,材料,受试药物的规格和来源 主要检测仪器、试剂等 动物的情况 统计学方法,2023/8/8,53,方法和结果,方法是人家能重复的方法。结果一般用图表，数据表达。方法和结果撰写应按逻辑顺序、不是实验时间顺序。应包括统计学分析结果。,2023/8/8,54,方法和结果分段应明确，并有副标题（可用黑体字标明）。尽可能使副标题具体，并且内容丰富（可使读者清楚地通览全文，并迅速找到他们感兴趣的内容）。结果中的正文是为解释数据的，因而是次要的，尽量压缩，文章越短，越易读。,2023/8/8,55,结论 结论应是由一些简短的短语和句子组成。除非是为了特殊的强调，一般
24、不要重复在结果部分已经有的内容。结论不仅仅只是一个总结，还可巧妙地增加一些新的，更高层次的叙述，并且应该明确的表明本人工作的意义。,2023/8/8,56,讨论,实验结果的本质？表现的规律？与他人相关结果的比较更好？对结果的分析解释。结果的重要意义。影响结果因素的探讨。存在的问题论的分析和讨论。,2023/8/8,57,参考文献文献都要要认真看过，不要弄错全 个人复习的全部有关的文献近 近期、部分过期文献的累列新 新、旧观点都应罗列,2023/8/8,58,6.论文的投稿,选择高一点的刊物注意刊物的读者范围可投石问路注意不同刊物投稿要求写好投稿信,2023/8/8,59,（八）中药药理实验研究
25、设计的特殊性：,2023/8/8,60,中药药理实验设计除应注意上述药理试验设计的基本内含外，还应注意中药药理研究的特殊性，即在实验设计中，一定要以中医药的基本理论为指导，既要面向现代化、面向世界与未来，又必须留意和遵循中医药的传统经验、理论和方法。在中药药理实验研究中，应特别注意以下几点：,2023/8/8,61,1.受试中药及制剂的质量标准化问题：中药生药品种复杂，如不经品种鉴定，其实验研究结果就很不可靠；不同的药用部位、产地，采集季节、贮藏以及加工炮制等都可能影响到其药理作用；供试制剂的制作、提取、保存等等也将影响实验结果。因此，有时为同一名称的中药或同一种制剂，其实验结果往往是各地的报
26、导，甚至同一实验室，不同批次药物的实验结果都可能不尽相同，甚至相反。所以，中药药理实验中，严格控制各种因素的影响，十分重要，也很难。,2023/8/8,62,2.中医药理论、传统经验与现代药理、药化研究的配合的问題：中药药理的实验研究，目前尚未形成独立、系统的方法，而几乎都是沿用现代药理实验方法来进行。实践中，若脱离了中医药理论与传统的经验，只强调提取中药的有效成份，采用现代药理学的方法来进行研究，就非常容易丢失中医药的理论与传统经验。,2023/8/8,63,但另一方面，又必须加强药理、药化、制剂、鉴定等的配合，对中药有效成份进行分离提取，并在此基础上进行深入、细致的药理研究，才有助于进一步
27、揭示中药或复方的作用机制，为改进药物制剂、降低药物毒性、提高药物疗效及发现药物的新作用等提供依据。所以两者缺一不可。,2023/8/8,64,因此，在中药药理实验研究中，应当注意“粗细结合”，既对辨证论治与复方用药的特点，以及中药复方的整体综合的效应，予充分的考虑和重视；又必须加强药理、药化的配合，对中药有效成份进行系统的药理研究。例如对一个中药或复方进行初筛或初步研究时，可从“粗制剂”着手进行；但若须进一步进行深入、细致研究时，则应在分离提取的基础上进行。,2023/8/8,65,3.关于“证”的动物病理或生理模型的采用问題：目前中药药理的实验研究中，巳探索创制了一些类似临床的各种“证”的动
28、物病理或生理模型，在此基础上来作研究，这也是中药药理研究的一大特色，且十分重要，并己取得了一定的效果。例如观察发现在临床病例和实验动物中，肾阳虚都表现为下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的功能下降；而且运用补肾阳中药治疗后，上述功能下降的状况就可得到恢复。所以，可采用肾阳虚“证”的动物病理模型，结合下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的功能，进行补肾阳中药治疗的实验研究，既论证了补肾阳中药的药理作用；又对中医肾阳虚与补肾阳药的本质有所阐明。,2023/8/8,66,4.尽量采用现代化的仪器设备与方法，以提高中药实验研究的质量与水平：中药药理的实验研究除可采用传统的一般药理实验方法外，还可运用新方法（生化、免疫、生物物理学及临床药理学等），采用新技术（如放免、质谱分析、基因芯片技术等)，绕过局部，全方位地进行研究(从整体、组织器官、细胞、亚细胞和分子水平)，才有望有所突破，将实验引向深入，更有利于进一步阐明中医、中药的作用本质。,几本参考书,
