《子宫颈鳞状上皮病变中HPV感染.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《子宫颈鳞状上皮病变中HPV感染.ppt（50页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、病理新技术在子宫颈CIN的应用,河南省人民医院病理科 孔令非,病理学新技术,FISH原位杂交免疫组织化学生物传感器,荧光原位杂交Fluorescence in situ hybridization原理利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况,FISH,FISH操作,FISH 探针种类,CSP着丝粒探针,GLP特异性位点探针,染色体整臂探针,FISH探针的类型,全染色体涂抹探针（WCP）染色体计数（着丝粒）探针（CSP）位点特异性探针（GLP）单色特异性探针双色分离重排探针
2、双色双融合易位探针,双色双融合易位探针(IGH/BCL2）,FISH的特点,操作简单 检测快速 结果易观察灵敏性和特异性高可检测样本种类多 空间定位精确,FISH检测在临床中的应用,产前诊断血液病检测实体瘤检测,端粒，端粒酶及作用,端粒是真核细胞染色体末端的特殊NDA-蛋白结构，其DNA含大量TTAGGG重复序列，在进化中高度保守DNA酶不能复制线性DNA（端粒是线性DNA）大多数体细胞的端粒会随周期性复制而缩短，最终达到一个使染色体完整性丧失的临界点，细胞增殖停止；许多肿瘤细胞端粒酶活性增高，是肿瘤细胞增殖的关键步骤作用：保护染色体基因组免受降解或重组为染色体末端提供一种可消耗的非编码序列，
3、以缓解或取消末端复制所带来的染色体DNA进行性缩短生殖细胞具有端粒酶活性，其端粒不随年龄增加而缩短，故成为永生细胞,端粒酶由RNA，DNA及蛋白质组成，本质是一种逆转录酶端粒酶活性决定于端粒酶RNA（human telomerase RNA,hTERC)和端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)hTERC是端粒长度稳定的直接因素保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期有活性和潜在的继续增殖能力人端粒酶基因位于3q26.3，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生,宫颈脱落细胞及组织学FISH探针,CSP3,TERC,hTERC基因定
4、位于3q26.3,3号染色体着丝粒信号,All the three centers obtained similarly increasing trend of hTERC positive rates according to the severity of cervical lesions,for both cytological results and pathological diagnosis.,中国8350例子宫颈病变TERC扩增,hTERC检测临床意义,伴有hTERC基因扩增的癌前病变的病人有52%96%的恶变可能。可预测CIN1/CIN2 向CIN3发展的风险因素，其灵敏度是1
5、00%，特异性是 70%.FISH是早期诊断和风险预测的有效手段,(AJP April 2005,Vol.166,No.4),hTERC基因检测在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中有重要价值魏丽惠，李亚里，吴瑞芳，陈忠，屠铮，江静，李静然北京大学人民医院妇科，北京，中国中国解放军总医院妇科，北京，中国北京大学深圳医院妇产科，深圳，中国犹他大学医学遗传学科，盐湖城，美国该研究显示，采用FISH技术检测hTERC基因扩增可在宫颈细胞学玻片上进行，具有无创性和客观性的特点，敏感度和特异度高，在宫颈癌和宫颈癌前病变的诊断中有重要价值。hTERC基因的异常扩增可能成为宫颈病变恶性进展的早期标记物。,北京协和医院
6、郎景和教授点评：在液基细胞学检查和检测人乳头状瘤病毒筛查宫颈癌的同时，检测hTERC基因，有望成为协助宫颈癌和宫颈癌前病变诊断及预测癌前病变是否向子宫颈癌发展的重要指标，而造福广大妇女。,细胞非典型性发育异常,细胞癌变,阻止细胞正常凋亡,高危型HPV持续性感染,人类染色体端粒酶基因(hTERC)扩增,致癌基因E6/E7编码的原癌蛋白表达,TERC基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生,P16表达,E7结合RB,E6结合p53,随着宫颈病变级别增加，hTERC的阳性率增加hTERC阳性率正常或炎症组 4.2-10.6%CIN1组 26.8%CIN2组 69.23%CIN3组 83.58%宫颈癌组
7、 95.65%正常及CIN1的hTERC基因阳性率明显低于CIN2及以上者，P 0.01 hTERC诊断CIN2或CIN2以上病变敏感度 81.40%特异度 95.04%阳性预测值 70.00%阴性预测值 97.29%,Human Papilloma Virus(HPV),环状双链DNA病毒超过120种亚型其中的72种亚型可引起肛门及生殖器疾病Low risk(LR-HPV):6,11,40,42,44,54,61,70,72,81High risk(HR-HPV):16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,63,78,82,HPV的生物学状态:游离或整合,在HP
8、V感染的早期或瞬间感染，HPV基因组以游离的环状DNA形式存在于宿主细胞核中。(Condyloma and CIN-1)持续的HPV感染，使其DNA整合进宿主DNA，标志着恶性转化。(CIN2lesions),持续性的HPV感染几乎总是发生在两种上皮的交界处（宫颈移行带、肛门和口咽）HPV通过宫颈鳞腺交界处感染基底细胞或HPV通过微创伤直接感染基底细胞临床治疗需要破坏移行带，而不仅仅是病变本身,HPV 检测及预后预测价值,阴性预测价值(NPV)约 99%women not infected with HR-HPV have 30:PPV gradually increased with age
9、 and persistent HPV infection,原为杂交法,用标记的HPV探针在组织上或细胞上进行原位的杂交，并进行显色特异性最强敏感性高直观可结合组织学或细胞学形态探针有：6/11,16/18,31/33,导流杂交法,扩增所取样本的DNA放在固定好基因探针的基因芯片上（21种亚型包括13种高危亚型16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68及5种低危亚型6,11,42,43,44和3种中国人群常见的亚型53,66,CP8304型进行杂交探针标记Biotin及碱磷酶用NBT/BCIP进行显色结果呈蓝紫色,判定标准RLU/Cutoff的比值 1=阳性,
10、50以内的数值对病情的严重程度并没有指示性，但50的数值对病情的严重程度的估计有指导意义。1=阴性，表示未检出13种高危型HPV DNA序列或标本中不含有高危型HPV DNA序列，又或者其浓度水平在测定方法的检测限度以下，不能除外潜伏感染；如果接近但小于1.0且被怀疑有高危型HPV感染，应该重新采集标本。,HC-II的应用条件,HPV test 不适用的情况：细胞学显示异型增生时年龄30岁的女性,细胞学检查结合HPV test,HPV检测方法的比较,生物传感器技术,24种HPV亚型，其中低危8种（6,11,40,42,43,44,54,70），高危16种（16,18,31,33,35,39,4
11、5,51,52,53,56,58,59,66,68,81）可检测HPV的载量子宫颈细胞中HPV的情况 单独感染 混合感染（2、3，6种HPV型）,子宫颈鳞状上皮病变中HPV感染,1.北京军区总医院病理科2.解放军总医院妇产科,CIN中需注意的问题,CIN病变也可表现为鳞状上皮的表面上皮显著的不典型增生，而非基底层细胞，是CINI的病理基础CIN病变累及腺体一般：鳞状上皮CINIII，进一步向下发展延伸至腺体，但未突破基底膜少数：鳞状上皮CINII，腺体鳞化也呈CINII，这时为表达腺体的改变，诊断为CINII累及腺体个别：在腺体鳞化的基础上出现不典型增生，甚至出现的不典型增生的程度超过表面鳞状
12、上皮,绝大多数的HPV感染可回退,Spontaneousregression,Spontaneousregression,Cancer,High-grade dysplasia,Low-grade dysplasia,Subclinical HPV infection,US Cases,300,000,11,000,1,400,000,30,000,000,HPV infection,Cervical Cancer,Spontaneous regression,持续性HPV感染导致CIN2-3,LSIL 一般由瞬间HPV感染引起HSIL 发生在那些持续性HR-HPV感染2年以上的患者大多数年轻
13、的女性(30 yrs)的HPV感染为暂时性的，将被自体免疫系统清除HPV持续性感染一般发生在老年女性,HPV感染与机体免疫反应,阴道分泌物的粘液抗微生物多肽，抗体，酸性环境及锌离子等组成第一道防线子宫颈鳞状上皮（复层上皮）形成天然屏障，组成第二道防线内在的非特异性免疫防御系统即炎症反应，构成第三道防线局部的细胞免疫监视，可启动接触性级连反应，放大传递信号，形成针对壳蛋白L1的特异性细胞免疫反应大多数的HPV感染细胞将成为HPVL1抗原递呈细胞；细胞毒T淋巴细胞和辅助T淋巴细胞可识别此细胞，并通过免疫监视和免疫清除杀灭细胞,CytoReact,用敏感的非同位素核酸杂交和免疫组织化学及免疫细胞化学
14、的方法检测子宫颈细胞中HPV L1 蛋白的存在，可用于细胞学涂片，组织学切片的检测。广谱的HPV L1抗体可识别大多数的HPV L1蛋白（6,11,16,18,31,33,42,51,52,56，58）。,基本原理特点,多聚物微球结合非同位素标记HPVL1DNA探针与多聚酶混合物（固态杂交液）解链及杂交过程与抗原修复过程合并标记物为碱性磷酸酶，底物为AEC原为杂交与免疫组化反应颜色重叠，提高敏感性20-30倍可检测出0.01pgHPV L1蛋白细胞核阳性表达（核膜及核）,HPV L1的存在表明HPV病毒感染处于游离状态或瞬时感染期HPV L1阳性与异常细胞学的回退密切相关在 HPV(+)的病人
15、中，HPV L1的缺失，提示存在HPV的持续感染，并有向高级别CIN发展的趋势特别有意义的是，在HR-HPV(+)的病人中，HPV L1阳性提示HPV以游离状态存在，发生高级别CIN的机率极低,HPV L1检测的临床意义,p16检测的意义,p16是cyclin依赖性激酶抑制剂，抑癌基因，可抑制CDK4、CDK6活性，降低RB的磷酸化，增强RB的功能，抑制E2F-1的释放，从而抑制细胞周期E7结合RB，释放E2F-1，促使细胞周期E2F-1的聚集（RB的磷酸化的结果）导致p16的增加p16的高表达提示HPVE7的存在,小 结,CIN的发生及发展与HPV的感染直接相关HPV CINCIN=HPVC
16、IN分为：CIN I、II、III；TBS：Ascus,LSIL，HSIL临床常用的HPV检测方法（HC-II，导流杂交）阴道小环境的HPV感染状况间接代表子宫颈HPV感染状况不知HPV的生物学存在状况生物传感仪检测子宫颈组织和细胞中的HPV类型TERC基因扩增表明细胞的增殖活性增强，提示病变向恶性发展的原动力存在p16的检测可提示HR-HPV感染，并整合宿主DNA子宫颈组织和细胞中HPV L1检测阳性，提示机体免疫可清除HPV病毒感染细胞，使CIN病变向良性发展,液基薄层细胞制片技术真空负压吸引，膜式采集技术重力沉降技术离心沉降技术其他特点：标本保存时间长，更完整，结构更清晰细胞数量更多细胞
17、平铺，不重叠更利于观察，不易漏观察可重复制片,应用范围：子宫颈细胞学检查体液细胞学检查（胸腔积液、腹腔积液、尿液、脑脊液及灌洗液等）分泌物细胞学检查（痰液）优势：明显提高阳性细胞检出率前提：具备丰富诊断经验的病理医师是关键国外细胞学医师需要获得医师资格证、病理医师资格证以后，再经过2-3年的专科培训才能从事细胞学诊断，并担负相应法律责任国内正在规范，从事细胞学诊断必须有医师资格证并注册到病理诊断,1988年，美国国家癌症研究所在马利兰州的Bethesda召开了病理细胞学会议，提出子宫颈细胞学报告的新分类，即Bethesda报告系统（The Bethesda System,TBS）,The Be
18、thesda system for Reporting Cervical Cytology(TBS),根据2001年第三届国际Bethesda工作会议要求由著名细胞病理学家Solomon和Nayar编著是目前有关子宫颈细胞学分类和诊断标准中最新，最权威的该系统的3个基本原则：在不同病理学家及病理科必须是统一的，可重复的，并富有灵活性能反映对子宫颈肿瘤的最新认识能将病理的有关临床信息传递给患者,TBS的改变是基于临床的进展和对宫颈癌生物学行为研究的进展废弃“诊断(diagnosis)”，而使用“判读(interpretation)”或“结果(result)”一词病人的最终诊断及处理方案不仅依靠细
19、胞学结果，还需整合病史、临床发现及其他实验室结果（ASCUS,HSIL)细胞学结果只是代表形成最终诊断的一个重要因素,子宫颈细胞学诊断标准的变迁,20世纪40年代初，巴氏创建了子宫颈细胞学检查方法并提出巴氏分级报告系统(以癌为中心)20世纪50-70年代，认识了原位癌和不典型增生，并分为轻、中、重20世纪70年代，Richart提出子宫颈上皮内瘤变(CIN)，认为不典型增生的细胞在本质上与原位癌的细胞无差异，是同一疾病过程在上皮内连续的、不同程度的病变，两者有共同的病因、生物学特征和自然病程，具有演变为癌的潜能，为浸润癌的前期病变。,TBS的问题,TBS与TCT的关系？AUS-US的发现率？HPV，滴虫及霉菌检出阳性率低？,HPV L1,HPV,Cytology Test,HPV,Precancer,Cancer,子宫颈癌的预防策略,Currently:,Future?,HPV DNA Test,Vaccine,Cytology Test,谢谢！,
