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1、小鼠肝组织RNA提取及RT-PCR,一、试剂及材料,1、小鼠肝脏2、DEPC处理过的EP管、PCR管3、Trizol、氯仿、异丙醇、DEPC水,二、实验原理,TRIZOL：异硫氰酸胍+苯酚,裂解细胞，RNA与蛋白质分离，将RNA释放到溶液中。,促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层。,RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。,三、实验步骤,RNA提取1、新鲜肝组织置EP管中，加200l Trizol充分研磨后，补加800l Trizol，枪头吹匀。2、加入200l 氯仿，剧烈震荡15秒，4 12000g离心15min
2、。3、将上层水相移至洁净EP管中，加入500l异丙醇颠倒混匀。4、4 12000g离心10min。5、弃水相，EP管开盖干燥，溶于50l DEPC水中。,RT-PCR：RNA的反转录+cDNA的PCR,RT-PCR操作步骤,5x Prime Script Buffer 2 l Prime Script RT Enzyme Mix 0.5 l Oligo dT primer(50 m)0.5 l Random 6 mers(100 m)1 l 提取的RNA 0.5 l RNase Free 水 5.5 l 37 15min 85 5 sec,10 l,PCR10 x PCR Buffer 5 l dNTP 4 l 模板DNA 2 l引物1 2 l 引物2 2 lTaq 酶0.5 l H2O 34.5 l,50 l,94 5 min 94 30 sec 54 30 sec 72 30 sec 72 7 min,25 cycle,1%琼脂糖凝胶电泳观察结果,
