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1、尿样中氧氟沙星的含量测定,组员：胡帆、周凡漪,实验目的：1.分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星。2.比较LC-UV与LC-荧光分析氧氟沙星的区别。,背景资料：氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌药,并具分布广,吸收好,半衰期长等特点,临床广泛应用具有广谱抗菌作用。,尿样采集：受试者空腹饮水200ml排尿,留取1h后尿样作空白,一次口服OFLX片600 mg,收集1，2，3，4，5小时后的尿样，做好标记。,LC-UV法分析尿样中氧氟沙星的含量,一、实验条件：1.1 实验仪器 Agilent高效液相色谱仪，G1314B-VWD紫外检测器，色谱柱，量瓶1.2 实验试剂 氧氟沙
2、星片剂，甲醇(色谱纯)，尿样，空白尿样，HAc溶液,1.3色谱条件 色谱柱:C18 5m(250 mm 416 mm)流动相:甲醇/0.05%HAC=80：20 流速:1ml/min 进样量：20l 柱温：室温 检测波长：在250400nm处扫描，选取有最大吸收度处作为检测波长。实际过程中选用294nm作为检测波长。,二、实验方法,2.1 尿液的预处理 取空白尿样和尿样，13000r/min离心10min，取上清液经0.45m的水相滤膜过滤，保留滤液。,2.2 氧氟沙星标准液的配制 精密称取氧氟沙星片剂200 mg,置50ml容量瓶中,以流动相稀释至刻度,配成4.0 mg/ml的储备液，用流动
3、相稀释400倍，吸取20l作为进样品。,2.3 标准曲线的制作 测定时，取标准液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流动相稀释于10ml量瓶，吸取20l作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙星标准浓度对峰面积进行回归，得到回归方程。,2.4 空白尿样的配制 取空白尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取20l作为进样品。2.5 尿样的配制 取尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取20l作为进样品。,2.6 进样 先进1针标准品观察流动相配置是否合适,合适后,进1针空白尿样观察有无杂质在测定波长处影响左氧氟沙星的吸收,然后进样标准品与待测样品,标准品进样5针来检验仪器精密度。,2.7回收率实验 取
4、浓度为0.5，1，1.5 g/ml的氧氟沙星尿样，称取氧氟沙星标准品，配置为相同浓度，通过峰面积比值，测定回收率。,2.8精密度实验 取浓度为0.52.5g/ml的氧氟沙星标准品，1d内重复测定5次,测得日内RSD，隔日测定5 次,测得日间RSD。,紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量,紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量，实验操作方法除检测器设定与荧光检测器不同外（检测波长：294nm），其余设置和操作均与荧光检测时相同。,三、实验结果,荧光法测定尿样中左氧氧氟沙星浓度标准曲线图,紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度标准曲线图,精密度,日内、日间RSD 测量荧光法 日内RSD=2.6%日间RSD=3.
5、3%紫外法 日内RSD=0.8%日间RSD=2.9%,回收率实验,回收率 荧光 98.7%、101.4%、101.2%；紫外 99.6%、98.4%、99.1%。,荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线,紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星量（g）-时间曲线,荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线,紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量（g）-时间曲线,讨论,1、采用LC-UV法与LC-荧光法分别测定尿样中氧氟沙星的含量，并且比较两种方法测量结果的不同，因此要求测量过程具有对照性：待测样品，标准品，空白样品的浓度两者均相同，流动相也相同，都采用外标法，但因为分析方法的不
6、同，检测波长不同。,2、实验中所采用的尿液因为新鲜尿液，如果无法做到这点，因在尿液中加入二甲苯等防腐剂，避免尿液因细菌繁殖造成混浊，影响试验效果。而且尿样中的药物会分解，影响实验结果，因而最好是现取，实验过程中不使用时放入冰箱保存,3、由于没有标准品对照，在测定时以左氧氟沙星片作为标准品使用。而事前没有对其中左氧氟沙星的实际含量进行过标定，也不能排除片剂中的其他成分（如辅料中的抗氧化剂等）对实验结果的影响。,4、实验本来应该统计每次的尿液量，计算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出药物量-时间曲线，因为本次实验中没有精密的容器量尿液体积，只能大概估计尿液量，测算出尿液中药物的量。,5、实验中考虑到出峰时间和分离度以及实际操作的便利程度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是还是有脱尾现象，在荧光检测中特别明显。6、从实验数据，我们可以认为荧光检测器作为检测装置，灵敏度、专属性好（没有杂质峰），较紫外检测器优。,标准品中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）,尿样中左氧氟沙星出峰图（紫外检测器检测）,标准品中左氧氟沙星出峰图（荧光检测法）,尿样中左氧氟沙星出峰图（荧光检测器）,谢谢,
