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1、病毒感染的检查方法与防治原则,第25章,病原生物学系 强华,第一节 病毒感染的检查一、标本的采集与送检 用于分离培养的标本：a、采集急性期标本 b、采集感染部位标本 c、冷藏 血清学诊断的标本：急性期和恢复期双份血清，-20保存,二、病毒的分离培养与鉴定,（一）病毒的分离培养 1.最常用细胞培养 2.鸡胚接种：主要用于流感病毒的分离 3.动物接种少用：主要用于狂犬病病毒、乙型脑炎病毒的分离,常用的细胞培养,（二）病毒在细胞内增殖的指标,1.细胞变化 CPE、多核巨细胞、包涵体2.红细胞吸附3.干扰现象4.细胞代谢改变,病毒在细胞内增殖的指标,正常细胞,病变细胞,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落
2、,1细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,形成包涵体(inclusion body),（三）病毒数量和感染性测定,1、蚀斑试验,2、ID50 或 TCID50,病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起 50%发生死亡或病变的最小量。,病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑，蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位PFU来表示。,三、病毒感染的血清学诊断四、病毒的快速诊断（一）形态学检查（二）检测病毒抗原 抗体测病毒感染脱落细胞或分泌物细胞中的抗原（
3、三）检测病毒抗体已知抗原测血清中抗体测IgM，或动态测IgG（双份血清）（四）检测病毒核酸 PCR试验 引物 核酸杂交试验 探针 基因芯片技术,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养,.,第二节 病毒感染的特异性预防,灭活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗（living vaccine）重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）亚单位疫苗（subunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine）核酸疫
4、苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫常用生物制品,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,人工被动免疫（artificial passive immunization）如：1.血清免疫球蛋白 用于甲肝、麻疹、脊髓灰质炎预防 2.高效价含乙肝病毒表面抗体的免疫 球蛋白 用于预防母婴乙肝传播,策略：阻断病毒复制周期中吸附穿入、脱壳、核酸复制、或装配释放 任一环节，从而抑制病毒复制 要求：抗病毒药物能穿入细胞选择性地 抑制病毒复制又不损伤
5、宿主细胞,第三节 病毒感染的治疗,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗,抗病毒化学制剂,反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）,一、药物治疗 1.核苷类药物 2.病毒蛋白酶抑制剂 3.天然药物如中药二、基因治疗 1.反义寡核苷酸 2.核酶 3.干扰RNA三、免疫治疗 1.中和抗体（单抗）2.治疗性疫苗3.干扰素,一、药物治疗（一）核苷类药物 1.抑制病毒基因复制 碘尿苷(疱疹净)用异常嘧啶取代胸腺嘧啶,眼疱疹病毒感染。也可渗入细胞DNA,故有毒性。无环鸟苷(啊昔洛韦)，竞争病毒复制酶。2.抑制病毒基因转录：病毒唑（二）蛋白酶抑制剂“鸡尾酒”治疗HIV，3TC加蛋白酶抑制物（三）天然药物：黄芪、板蓝根、大青叶,二、基因治疗 1.反义寡核苷酸、反义寡核脱氧核酸(反义RNA、反义DNA)与病毒DNA RNA关键基因互补 2.核酶：病毒RNA结合,切割降解靶RNA 3.感染RNA 三、免疫治疗 1.中和抗体（单抗）2.治疗性疫苗 3.干扰素,
