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1、影响酶活性的因素,一、实验目的,通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。（以唾液淀粉酶为例）,二、实验原理,唾液淀粉酶可以分解淀粉,二、实验原理,在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活性的变化。,二、实验原理,班氏试剂：即本尼迪特试剂（Benedict），是斐林溶液的改良试剂，与醛或醛（酮）糖反应也生成Cu2O砖红色沉淀。它是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液。柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们
2、均可水解产生OH-，与柠檬酸钠-碳酸钠溶液和CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH-结合，生成Cu（OH）2，Cu（OH）2与葡萄糖中的醛基反应生成红黄色沉淀。优点：可以存放备用，避免斐林溶液必须现配现用的缺点。,二、实验原理,三、实验试剂及器材,1.试剂 碘液 蒸馏水 班氏试剂 0.1%NaCl 1%淀粉溶液 0.1%CuSO4溶液 pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液,2.器材 电炉 制冰机 白瓷板 恒温水浴锅 试管、滴管,四、实验流程,1.唾液淀粉酶的制备 取干净的水杯，盛上蒸馏水。用蒸馏水漱口。口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。,酶的特异性,3.将
3、上述各管放沸水浴中煮沸35 min，观察记录结果,1.制备稀释唾液。2.取3支试管，编号，按下表操作,1.制备稀释唾液。2.取4支试管，编号，按下表操作,3.以2号管为标准管每隔2min做碘反应。到接近浅红时，取出各管，分别做碘反应,观察结果。,4.将4只试管均放入37水浴中，5-10min取出各管，分别各取1滴做碘反应，观察结果。,温度对酶活性影响,pH对酶活性影响,制备稀释唾液。取5支试管，编号，按下表操作,以5号管为标准管，加10滴稀释唾液放37水浴中，测定淀粉水解所需时间。,4.1号管加10滴蒸馏水，24号管加10滴稀释唾液，以1min间隔，取样，做碘反应。5.观察各管颜色，确定其最适pH。,激活剂和抑制剂对酶活性影响,制备稀释唾液。取3支试管，编号，按下表操作,3.将3只试管均放入37水浴中，以1号管为标准管每隔2min做碘反应。到接近浅红时，取出各管，分别做碘反应,观察结果。,操作注意事项：1.唾液稀释（方法）2.要求器材干净，避免杂质干扰。3.取样体积尽可能准确。4.准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控制一致。,五、实验结果,根据实验结果，说明各种因素对唾液淀粉酶活性的影响情况。,
