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1、第四节 免疫学应用,免疫学防治,免疫预防：利用各种生物或非生物制剂来建立机体的免疫应答，以达到预防疾病的目的。,用免疫学原理，防病、治病所 采取的措施,免疫治疗：应用免疫学原理，针对疾病的发生机制，增强机体的免疫功能，以达到治疗目的所采取的措施。,特异性免疫类型,自然免疫,人工免疫,自然主动免疫：自然感染,自然被动免疫：IgG通过胎盘、初乳SIgA,人工自动免疫：接种疫苗、类毒素,人工被动免疫：动物免疫血清、胎盘球蛋白等,（一）免疫学预防,1.人工免疫的概念和种类 通过人工的方法使机体获得免疫力，包括人工自动免疫、人工被动免疫。（1）人工自动免疫：是指给机体接种疫苗、类毒素等抗原物质,刺激机体
2、产生特异性免疫应答，以获得免疫力的方法，也称预防接种。主要用于传染病的特异性预防。（2）人工被动免疫：是给人体输入抗体等制剂，使机体获得特异性免疫力。临床多用于治疗和紧急预防。,人工自动免疫与人工被动免疫的比较,（1）死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。如伤寒、乙型脑炎、霍乱、狂犬病疫苗等。（2）减毒活疫苗是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。,2.人工自动免疫常用生物制剂,（3）类毒素：外毒素 类毒素,0.3-0.4%甲醛,灭活疫苗与减毒疫苗比较,3.人工被动免疫生物制品抗毒素：外/类毒素马A
3、b人丙种球蛋白：血浆和胎盘丙种球蛋白细胞因子单抗/基因工程抗体人工被动免疫注意事项注意防止超敏反应早期和足量不滥用丙球,被动免疫不能激活免疫系统，故不能产生记忆反应，其保护作用是短暂的。,温馨提示,4 新型疫苗,1）亚单位疫苗：提取有效免疫原成分。如HA、NA，HBSAg 2）合成肽疫苗：人工合成抗原肽。3）基因工程疫苗 编码免疫原基因载体体内 酵母菌、大肠杆菌（体外培养）如：重组抗原疫苗、重组载体疫苗、DNA疫苗、转基因植物疫苗,5.计划免疫 我国儿童计划免疫程序,人工自动免疫的注意事项,接种对象：免疫功能低下、与病原体接触机会多、易感者。接种剂量、次数和间隔时间：死疫苗：23次，间隔710
4、天。活疫苗接种一次。类毒素接种2次，间隔需46周。接种途径：死疫苗：皮下；活疫苗：皮内注射、皮上划痕和自然途径接种，脊髓灰质炎疫苗以口服为佳，流感、腮腺炎疫苗以雾化吸入为好。接种后反应：常于接种后24小时发生，表现为局部红肿、疼痛、淋巴结肿大。禁忌症：高热、严重心血管疾病、急性传染病、恶性肿瘤、甲亢、活动性肺结核、糖尿病和免疫缺陷病等患者，均不宜接种疫苗。,（二）免 疫 治 疗,（二）免 疫 治 疗,二、免疫学诊断,目的：用于多种免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷 病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移 植排斥反应和肿瘤等）的诊断、疗效评估、发 病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的 定性、
5、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受 体的检测等。方法：检测抗原和抗体的体外实验 免疫细胞的测定,（一）体外免疫学检测,1.体液免疫检测 抗原与相应抗体在体内外均可发生特异性结合，体外可出现凝集、沉淀等反应现象。据此可利用已知的抗原（抗体）检测未知的抗体（抗原），抗原抗体结合反应也称为血清学反应。具有特异性、可逆性、可见性、比例性等特点。常见的血清学反应有凝集反应、沉淀反应及免疫标记技术等。,凝集反应,定义：颗粒性抗原+抗体凝集现象（颗粒性抗原：细菌、细胞等）,沉淀反应,定义：可溶性抗原+抗体沉淀现象（可溶性抗原：血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等）大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂
6、扩散故也称免疫扩散。,单向琼脂扩散试验,是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于测定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。,含抗体的凝胶,沉淀环,双向琼脂扩散试验,是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。,对流免疫电泳,是先将待侧血清标本作琼脂凝胶电泳，血清中各蛋白
7、组分被分成不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应的位置形成沉淀弧。该法常用于血清蛋白种类分析，以观察Ig的异常增多或缺失。,定义：是用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体的试验技术。通过检测标记物来反映抗原抗体反应情况，间接测出待检抗原或抗体的含量。本法特异性强，敏感性高。,主要的免疫标记物,类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物
8、Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定,是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，HRP和碱性磷酸酶，AP)标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。酶联免疫吸附试验(ELISA)：是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法等。测定可溶性抗原或抗体酶免疫组化法：测定组织中或细胞表面的抗原。,酶免疫技术,概念：用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，FITC)与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的
9、抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。有直接、间接及补体结合荧光法。直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。,荧光免疫技术,间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。补体结合荧光免疫法：此法是在间接法的第一步抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3抗体进行示踪。,(RIA),是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技术。它
10、将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使检测的敏感性达pg水平。常用于标记的放射性核素有I125和I131。常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的测定。,放射免疫技术,放射免疫测定法(RIA)示意图,是以硝酸纤维薄膜为载体吸附抗原，用胶体金标记代替酶标抗体的免疫标记技术。斑点金免疫层析实验（一步金法）：HCG,免疫胶体金技术,2.细胞免疫检测,免疫细胞数量检测免疫细胞的功能检测,淋巴细胞类型和数量的测定（1）E花环试验：E花环试验可用于检测T细胞数目。EA花环试验可用于检测B细胞数目。（2）荧光免疫法：常采用间接免疫荧光法。（3）流式细胞术：用流式细胞仪（FCM)。,花环试验
11、示意图,免疫细胞功能的测定-T细胞功能测定,体内法：用生物抗原或化学抗原作皮内试验。OT-PPD皮试 SD-SK皮试,体外法：T细胞增殖试验（淋巴细胞转化试验）形态学检查 3H-TdR掺入法,淋巴细胞转化试验（形态学示意图）,原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。,淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图,细胞毒试验（51Cr释放法）示意图,（二）体内免疫学检测,1.体液免疫检测（1）型超敏反应皮肤试验：,变应原：青霉素免疫血清植物花粉浸液,方法：皮内注射或划痕，20min观
12、察结果,结果：局部红斑、丘疹1cm或无红肿但局部有氧感，或全身不适者为阳性，有相应的IgE存在。,（2）中和反应皮肤试验：,临床常用的有检测对白喉及猩红热有无免疫力的锡克及狄克实验。,毒素抗毒素中和实验,微量外毒素 前臂屈侧皮内,阳性：局部红肿。表示受试者对此种外毒素无免疫力。,阴性：无反应。表明体内有相应的抗毒素中和外毒素，机体对此有免疫力。,2448h,2.细胞免疫检测,（1）特异性抗原皮肤试验：主要有结核菌素、白色念珠菌素、皮肤毛癣菌素等,皮试抗原。皮内注射定量抗原后于2448min观察结果，少数则要4872min判定结果（如OT实验）。（2）植物血凝素（PHA）皮肤实验：PHA是一种常用的非特异性有丝分裂原，注射于前臂屈侧皮内，612min后局部出现红斑和硬结，2448min达高峰。PHA皮肤实验敏感性高，安全可靠，临床常用于检测机体的细胞免疫水平。,
