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1、专题I：溶液的配制,2010年9月,2010级硕士研究生课,动物生理学实验技术,1、实验台准备,2、器皿的准备,3、药品的准备,4、浓度的确定及计算,（1）摩尔浓度 1L溶液里含有多少摩尔溶质表示的溶液浓度称为摩尔浓度，M，计算公式：,例1：蔗糖的C12H22O11分子量=342，1升水中溶解了171g蔗糖，求蔗糖溶液的摩尔浓度？例2：请配制1mM(1mol/L)蔗糖溶液100mL 例3：请配制125mM的NaOH溶液1mL,含结晶水的盐溶液摩尔浓度的配制需配制0.1M的Na2CO3溶液1mL，现有药品为Na2CO310H2O，如何配制？需称多少克？,答案：2.8610-2 g,（2）当量浓度
2、,当量浓度(N，normality)：1升溶液所含溶质的克当量数。过去常用，现只用于部分酸溶液。当量浓度与摩尔浓度的换算：与化合价有关，一当量即得失一个电子 盐酸放出一个H+，化合价为1，1N HCl=1M HCl 硫酸化合价2,放2质子，1M H2SO4=2N H2SO4,常用浓盐酸的浓度为36%，密度1.1789,（3）百分比浓度,1%NaCl：1g，100mL75%乙醇，V/V,请用95%乙醇配制75%乙醇100mL做酒精棉球,要配250mL 1M的硫酸溶液，市售的浓硫酸为密度1.836 g/cm3、浓度98%，问取多少mL这样的浓硫酸?,答案：13.6 mL,5、称量,固体：颗粒药品
3、粉末药品 膏状药品 易潮解药品 腐蚀性药品：强碱液体：挥发性液体 强酸有机溶剂,自我防护、防污染,配制标准溶液,配制步骤：例：配制1升0.01mol/L的KMnO4溶液配制标准溶液的步骤：1 计算所需溶质KMnO4的质量：n=0.011=0.01mol 质量m=0.01mol158=1.58克2 称量：称取1.58g固体KMnO43 溶解：在烧杯中用50ml左右的蒸馏水溶解KMnO44 移液：溶液必须冷却后才能转移到容量瓶中。5 洗涤烧杯3次，一并移入容量瓶6 定容7 振荡摇匀，装入试剂瓶，贴上写好的标签（浓度、时间、人）,容量瓶：用于配制标准溶液或稀释溶液，有25、50、100、250、50
4、0、和1000ml等规格。需注意:1 溶质先在烧杯内全部溶解然后再移入容量瓶。2 不能加热，不能代替试剂瓶用来存放溶液。,干粉倾倒入三角瓶时的注意事项,普通溶液的配制：量筒：多数生化试剂量杯：生理盐溶液带刻度的烧杯试管：浓度要求不高的洗涤溶液，浸泡载波片的2%盐酸，洗液带刻度的离心管,铬酸洗液：1：强洗液 重铬酸钾 150g，蒸馏水 300ml，浓硫酸 3 000ml2：中等强度洗液 浓硫酸50%，蒸馏水50%，重铬酸钾5%3：操作：将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，如发热过剧则冷却后再继续加。操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安
5、全。,蒸馏水：一蒸，二蒸，三蒸开水：自来水：去离子水：,水的选择,PH的调节,精密pH试纸：室温，自然光照pH计，用标准溶液定期标定校准,贮备溶液及其稀释,室温4 NaN3,柳硫汞 1/1000-20 50%甘油，5%,特殊溶液的配制及其注意事项,1、EDTANa2，只能溶解于pH8.0的水中2、DNA样品：浓溶液形式溶解于pH8.0以上的碱性水溶液中3、RNA样品：浓溶液形式溶解于pH5.2以下的酸性水溶液中4、蛋白溶液：浓溶液溶于中性缓冲液PBS中5、抗菌问题：0.05-0.1%叠氮钠，0.01%柳硫汞,1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常
6、用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。,2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红
7、。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。,人工染料,种类很多，应用极广。缺点是经日照易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。1、伊红：有很多种。常用的伊红Y，酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15
8、摄氏度时溶解44%）和酒精（无水酒精中溶解2%）。动物制片常用，是很好的细胞质染料2、固绿：酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。应用极广，与苏木精、番红并列为植物组织学最常用的染料。3、苏丹，脂肪染色剂。弱酸性染料，红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）,4、酸性品红：酸性染料，红色粉末，能溶于水，略溶于酒精（0.3%）。良好的细胞质染色剂，用于动物和植物切片。与甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸酸性水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。5、刚果红：酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇酸呈蓝色。染细
9、胞质时，在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木素作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。6、甲基蓝：弱酸性染料，能溶于水和酒精。应用极广。与伊红合用能染神经细胞，还用于染细菌制、原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此染色后不能长久保存。,7、碱性品（复）红：碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在细菌学制片中，常用来鉴别结核杆菌。8、结晶紫：碱性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。细胞核染色常用，用来显
10、示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其它染料染细胞核不成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。缺点是不易长久保存切片。9、龙胆紫：混合的碱性染料，结晶紫和甲基紫的混合物。能与结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。,10、中性红：弱碱性染料，红色粉末，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，故用作指示剂。中性红无毒，常做活
11、体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼氏小体的常用染料。11、番红：碱性染料，能溶于水和酒精。能染细胞核、染色体和植物蛋白质，还能染孢子囊。12、亚甲蓝或美蓝：碱性染料，蓝色粉末，能溶于水（9.5%）和酒精（6%）。细胞核染料，染色不会过深。13、甲基绿：碱性染料。绿色粉末，能溶于水（8%）和酒精（3%）常用于染染色质,试剂的保存与放置,Na2CO3、Na3PO4等弱酸强碱盐溶液不能用磨口玻璃瓶贮存？象Na2CO3、Na3PO4等弱酸强碱盐在水溶液极易水解生成OH，OH与玻璃中的SiO2成分反应生成SiO32，这种反应在磨口玻璃瓶的磨砂处（表面积大）更易进行，所以既容易损坏磨口玻璃瓶的磨砂，又易使磨口玻璃瓶的磨口与玻璃塞粘连在一起，从而导致玻璃瓶无法打开。,浓盐酸、氨水、碘及苯、甲苯、乙醚等低沸点有机物均保存在瓶内加塑料盖密封，置于冷暗处。,氢氧化钠、硅酸钠溶液等碱性物质应用胶塞，不宜用玻璃塞。苯、甲苯、乙醚等有机溶剂应用玻璃塞不宜用胶塞。,4，室温，-20,紫外可见光分光光度计,高速冷冻离心机,
