磁珠分选原理及应用.ppt

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1、1/1 MD0 xxx.01,Miltenyi Biotec:免疫磁珠分选技术及应用,德国美天旎生物技术有限公司,MD0197.02,内容,MACS技术原理 MACS技术设备及分选策略 几种特殊的MACS分选 分选和分析DC细胞 分选各种T细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选,MD0347.01,MACS技术原理,MACS(Magnetic Activated Cell Sorting)：=免疫学+细胞生物学+磁力学 基于抗体对抗原的特异性识别 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连 在

2、高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的,MD0651.01,MACS 磁性分选,MACS微珠进行磁性标记,未标记的细胞先行流出,洗脱阳性分选的细胞,MD0197.02,分选前标本制备：过滤,MACS预选滤器：30m,MD0197.02,MACS 技术,设备与试剂 MACS微珠 MACS分选柱 MACS 分选器 详细分选方案*,MACS技术设备与试剂,MACS微珠：MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。特性：50nm大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性,MD0057.03,MACS技术分选的CD8+T 细胞,微珠,MACS微珠,直标微

3、珠,多选微珠,间标微珠,MACS技术设备与试剂,MACS分选柱：填充有不同规格的铁珠。铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。无菌包装。可用于分选多种细胞及亚细胞物质、细菌、病毒、mRNA和蛋白质。专利产品将磁场扩大100010000倍高纯度，高回收率,MD0061.02,在MS柱中产生的强大磁场,MACS分选柱：,MACS技术设备与试剂,MACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床,MACS技术设备与试剂,MACS分选器,MACS技术设备与试剂,autoMACS分选仪,9种程序，一机完成所有细胞分选 成本低，两个可重复使用的分选柱（2周内100次）快速（310分钟）重复性好 全自动分选，仪器操作简单

4、 适用范围广：从少量标本（105）到大量标本（4X109），进样量0.5ml-50ml 8种全血微珠，可以做常见细胞的全血分选，省去了费时的提取单个核细胞过程,MACS技术主要优势,小磁珠:50 nm（快速、不活化细胞、不沉淀）保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化 铁和多聚糖组成，可生物降解）与流式细胞仪兼容（不影响细胞光学特性、不影响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流 式分选时间）快速、简便、无菌 适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分 选各种细胞、亚细胞物质）,MD0043.02,MACS 细胞分选策略,阳性分选 去除分选 去除分选后再阳性分选 多重分选,M

5、D0044.02,MACS细胞分选策略1、阳性分选：,根据特异性标志分选细胞:阳性分选是指目的细胞磁性标记 后，作为阳性的标记组分直接分选出来。优点：高纯度，尤其是富集稀有的细胞 高回收率 操作简便、迅速,MD0044.02,MD016102,阳性分选策略,MACS 微珠磁性标记,未标记细胞先行流出,将分选柱移出磁场，洗脱阳性分选细胞,MACS细胞分选策略2、去除分选：,去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去 除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。去除分选策略适用范围：去除不需要的细胞 缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞）不需要抗体和目的细胞结合 需进一步通过阳性选择分选细胞亚

6、群,MD0044.02,MD0160.02,去除分选,磁性标记,分选未磁性标记细胞,MACS细胞分选策略3、去除分选后再阳性分选：,即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。适用范围：非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，可获得高纯度的目的细胞。,MD0044.02,1.去除非CD4+T 细胞。用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非CD4+T 细胞 磁性分选去除标记细胞 先行流出为 CD4+T 细胞 2.CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞阳性分选靶细胞 CD4+CD25+调节性T滞留在分选柱上，离开磁场后洗脱下来,去除后再阳性分选

7、CD4+CD25+双阳性细胞,MD0652.01,多选微珠标记,MACS 分选,磁性颗粒的酶解离,终止解离反应,根据第二标志进行磁珠标记,MACS 分选,MACS细胞分选策略4、多选微珠：,MACS畅销机器与分选柱,MiniMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1盒MS分选柱、1支价值7500元试剂（15088元）：可做阳性分选、小量标本、间标去除分选、分子生物学分选 Mini&MidiMACS starting kit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1个MidiMACS分选器、1盒MS分选柱、1盒LS/LD分选柱、1支价值7500元试剂（278

8、38元）：可做阳性分选和去除分选 MS分选柱：1盒25个，2763元 LS分选柱：1盒25个，4356元 LD分选柱：1盒25个，5100元 uMACS与u或者M分选柱：分子生物学分选 VarioMACS分选仪 autoMACS自动分选仪、CliniMACS分选仪,MD0044.02,MACS几种畅销磁珠与抗体,专利产品：CD133、CD303、CD304特殊产品：人类DC系列：BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304)小鼠DC系列：mPDCA微珠与抗体 干细胞产品：CD133、CD271微珠与抗体 细胞因子分泌细胞：CSA分选

9、与分析 TH2细胞：CD294(CRTH)微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞：上皮肿瘤：CK、HEA 非血液肿瘤：CD45去除 死亡细胞去除试剂盒 分选转染细胞 分选HIV病毒、mRNA、cDNA top ten：CD133、CD34、人CD4+CD25+、小鼠CD4+CD25+CD303/CD304、人类NK、小鼠CD11c、anti-PE 微珠 小鼠干细胞试剂盒（系别阴性CD117）、CD4/CD8,MD0044.02,主要竞争对手分析,Dynal：大磁珠 主要市场：CD4、CD8等高频细胞，优势：价格 劣势：回收率低（不能做低频细胞、弱表达细胞分选）磁珠必需剪切（耗时细胞状态不佳）大磁珠（活化

10、细胞）我们的优势：纯度高、回收率高、细胞活性好 不活化细胞，不改变细胞功能 省时、省细胞 产品品种最多，有专利产品 有手动、自动、临床级产品 有强大的技术支持队伍 很好的声誉，市场占有率最高,MD0044.02,主要卖点,干细胞产品：人类：CD133、CD34、MSC试剂盒（CD271）小鼠：系别阴性试剂盒、CD117微珠 定向分化培养基 DC产品：人类：BDCA-1、BDCA-2/4 小鼠：CD11c NK产品：人类：NK细胞阴选试剂盒、CD3/CD56 T细胞产品：CD4+CD25+调节性T细胞（人和小鼠）CSA系列 CD4、CD8微珠及阴选试剂盒 B细胞产品：CD19微珠及阴选试剂盒 肿

11、瘤细胞分选：癌细胞富集试剂盒、HEA微珠、CD45阴选 单核细胞分选：CD14微珠及阴选试剂盒 间标微珠 死细胞去除试剂盒 预选滤器、FCR阻断剂、T细胞活化与扩增试剂盒 流式细胞仪抗体（价廉、包装量大、优质）,MD0044.02,识别DC和DC亚群 New,Lineage-(CD3,CD14,CD16,CD19,CD20,CD56)HLA-DR+,PDC,CD11c-CD123+,BDCA-2(CD303)+BDCA-4(CD304)+,CD123low,CD123-,CD11c+CD123low/-,MDC,MDC1,MDC2,BDCA-1(CD1c)+,BDCA-3(CD141)+,DC

12、 亚群特异性标志:Blood Dendritic Cell Antigens,BDCA-2/4+BDCA-1+BDCA-3+,CD11c+DC,CD8+DC,CD4+DC,CD11c+B220+Gr-1(Ly-6C/G)+DC,CD11c+B220-DC,Conventional DC,(“lymphoid“DC),(“myeloid“DC),CD11c CD8a,CD11c CD4,PE FITCAPC,CD11c,CD11c B220 Gr-1,Plasmacytoid DC(PDC),mPDCA-1,MACS 技术分选与分析小鼠DC细胞 New,MACS 技术分选与分析大鼠DC细胞 Ne

13、w,MD0044.02,Anti-DC(OX62)微珠 用于从大鼠外周血、淋巴和非淋巴组织中分选或者去除OX62+DC。单克隆抗体OX62识别表达于大部分大鼠DC上的整合素E2亚单位（分子量150kDa）。两个主要的树突状细胞亚群：CD4/OX41双阳性和CD4/OX41双阴性亚群。该抗原也表达于表皮TCR/+或/+的T细胞亚群和垂体前叶星状滤泡样（S100+）细胞的一个亚群，但在朗格罕氏细胞和巨噬细胞上不表达。,MACS 技术分选与分析功能性T细胞,MD0044.02,MD0420.02,MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选 New,抗原特异性再刺激,细胞因子分泌阶段,捕获试剂标记,荧光标记

14、和磁性分选,Catch Reagent,Detection Antibody,Anti-PE MicroBeads,cytokine secreting cell,secreted cytokine,MD0420.02,MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选 New,分选前,刺激组,分选后,未刺激组,*百分比均为占CD4细胞百分比,MD0420.02,MACS 细胞因子分泌细胞分析New,刺激组,未刺激组,人类细胞因子分泌细胞分选与检测试剂盒IFN-g 分泌细胞IL-2分泌细胞IL-4分泌细胞IL-10分泌细胞TNF-分泌细胞,MACS 细胞因子分泌细胞分析与分选 New,小鼠细胞因子分泌细胞分

15、选与检测试剂盒IFN-g 分泌细胞IL-2分泌细胞IL-4分泌细胞IL-5分泌细胞IL-10分泌细胞,人类干细胞分选微珠与试剂盒,CD34微珠及多选微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞 CD133微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞（MAPC）CD117微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、骨髓间充质细胞 CD45/GlyA去除分选试剂盒：用于从骨髓中阴选分选 多能成体干细胞（MAPC）CD105微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞 抗成纤维细胞微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞 多能成体干细胞（MAPC）MSC分

16、选工具（CD271）new：用于从骨髓中分选间充质细胞,MD0044.02,MSC Research Tool Box-CD271(LNGFR)new,成分:,分选:CD271(LNGFR)-APCAnti-APC MicroBeadsFcR Blocking,培养:NH Expansion Medium(2x500 mL)CytoMix-CD271(LNGFR),质量控制:NH AdipoDiff Medium(12x8 mL)NH OsteoDiff Medium(12x5 mL),Introductory offer,Ads in Blood(April&Mai),MSC Researc

17、h Tool Box-CD271(LNGFR)人类MSC的标准化研究,CD271又叫做低亲和力神经生长因子受体(LNGFR),是迄今为止发现的最佳MSC分选标志，可用于直接从人类骨髓中分选MSC。分选后CD271(LNGFR)+MSCs是一群均一的MSC细胞群，而CD271阴性细胞成分中没有成纤维细胞克隆形成单位(CFU-F)活性。与贴壁培养的MSC相比，CD271分选的MSC增殖能力增强101000倍。CD271分选和扩增的MSC保留了多系分化潜能，具有分化为脂肪细胞和成骨细胞、软骨细胞、内皮细胞的可塑性。,cumulative population doubling(CPD),Ads in

18、 Blood(April&Mai),MSC Research Tool Box-CD271(LNGFR)人类MSC的标准化研究,Nadia Quirici等，Experimental Hematology 30(2002)783791,MACS小鼠干细胞分选试剂盒：Lineage Cell Depletion Kit:去除成熟和分化的造血细胞，预富集造血干祖细胞。CD117 MicroBeads：分选早期和晚期干祖细胞。Anti-Sca-1 MicroBeads：分选造血干细胞和早期造血祖细胞。CD117+Sca-1+lin细胞也有非造血分化潜能，如分化为肌细胞、内皮细胞、肝细胞、神经系统细胞

19、。CD45/Ter119微珠去除分选骨髓细胞，可以得到MAPCs,也有体外分化为多种细胞的潜能。,小鼠骨髓造血干细胞(HSC)定义为 Sca-1+、CD117+(c-kit)、Thy-1low 和lin-细胞.,MACS 技术分选人类肿瘤细胞 New,MD0044.02,上皮肿瘤细胞 根据表面抗原进行分选与分析：Anti-HEA(EpCAM)MicroBeads Anti-ErbB-2(HER-2/neu)MicroBeads根据细胞内细胞角蛋白分选与分析：cytokeratin黑色素瘤细胞分选：Anti-melanoma MicroBeads其它非造血系统肿瘤细胞:CD45 MicroBea

20、ds去除白细胞骨髓瘤细胞：CD138 MicroBeads霍奇金氏淋巴瘤/RS细胞：CD30 MicroBeads,MACS 技术分选凋亡细胞 New,MD0044.02,刺激、分化、凋亡、脱颗粒、坏死,PS暴露,PS暴露细胞被AnnexinV微珠磁性标记,磁性标记细胞滞留在分选柱上,PS暴露细胞被洗脱下来,MACS 技术分选转染细胞 New,MD0044.02,应用于功能基因、信号转导研究、药物筛选和标记技术。,MACSelect4转染细胞分选试剂盒使用pMACS4.1和自己的质粒,转染细胞,用MACSelect4微珠标记转染细胞,MACS分选转染细胞,分选后细胞可用于培养或者分析,MACS

21、 技术分选转染细胞 New,MD0044.02,优点：省时：只需2-3小时（建立一个稳定的细胞系需数周）纯度高，背景低 不影响转染细胞功能和活力 分选的细胞可直接用于培养或功能检测 可用于：原代细胞&细胞系 贴壁&悬浮细胞 稳定&短暂转染,MACS分子生物学和蛋白生化的分选,表位蛋白分选：MACS 抗His-,HA-,c-myc-,GFP-,GST-蛋白分选.生物素化分子及其靶位分选：MACS 链霉亲和素微珠 MACS 免疫沉淀：MACS 蛋白A、蛋白G微珠mRNA分选：从细胞、组织、外周血、总RNA中分选mRNA 一步法cDNA合成new,MD0044.02,MACS分子生物学和蛋白生化的分选优点：,分选柱上固定：高纯度利于灵敏的后续实验 作用温和，可获得理想的分子复合物 分选柱上分子修饰，可以减少细胞损失 MACS微珠：敏感，可用于极少量的目的分子 快速：分选mRNA仅需15分钟 免疫沉淀只需1-2小时 一步法cDNA合成仅需90分钟,MD0044.02,Miltenyi Biotec GmbH(headquarter),