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1、种子生活力测定,一、种子生活力测定的必要性,(一)种子生活力(Seed viability)的概念 种子生活力指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力。在一个种子样品中全部有生命力的种子，应包括能发芽的种子和暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子。,(二)种子生活力测定的必要性,测定休眠种子的生活力，有利于正确评定种子品质。处于休眠状态的种子，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。快速预测种子的发芽能力，以便在短期内了解种子发芽状况。,（三）种子生活力测定的方法,根据测定原理，种子生活力测定方法可分为生物化学法、组织化学法、软X射线法和荧光分析法四类。具体的方法有四唑染色法、溴麝
2、香草酚兰法、中性红法、二硝基苯法、红墨水染色法、软X射线法等。正式列入国际种子检验规程和我国农作物种子检验规程的生活力测定方法是生物化学(四唑)染色法。,二、四唑测定法,(一)四唑染色的测定原理 四唑（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）是一种可渗透进种子组织中的无色溶液。它在种子组织里参与活细胞的还原反应，从脱氢酶上接受氢离子，自身被还原成红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲替，沉积在活组织处使其显红色，而死种子或种胚的某一部位无生活力时，则不显红色。DPNH2+TTC DPN+TTCH+HCl(辅酶H2)(四唑)(辅酶I)(甲替)(氯化氢)据此，可鉴别种子有无生活力及无生活力种子死组织的部位。
3、,(二)四唑测定的特点,四唑测定具有原理可靠、结果准确、不受休眠限制、方法简便、省时快速、成本低廉等特点。所以四唑测定是世界公认、广泛应用、实用方便、省时快速、结果可靠、深受欢迎、最有发展前途的种子生活力测定方法之一。,(三)四唑测定的适用范围,根据1996国际种子检验规程规定，四唑测定可适用下列方面的快速测定种子生活力：测定休眠种子的发芽潜力；测定收获后要马上播种种子潜在发芽能力；测定发芽缓慢种子的发芽潜力；测定发芽末期未发芽种子的生活力；测定种子收获期间或加工损伤(如热伤、机械损伤、虫蛀、化学伤害等因素)种子生活力，并按染色局部解剖图形查明损伤原因；解决发芽试验中遇到的问题，查明不正常幼苗
4、产生的原因和杀菌剂处理或种子包衣等的伤害；查明种子贮藏期间劣变衰老程度，按染色图形分级，评定种子活力水平；时间紧迫，调种时快速测定种子生活力。,（四）四唑测定程序,1.配制溶液 常用的四唑溶液浓度为0.1%1.0%。0.1%和0.5%的溶液常用于切开种胚种子的测定，而1%的溶液常用于不切开种胚种子的测定。2.试验样品的数取 每次至少测定200粒种子，从经净度分析后并充分混合的净种子中，随机数取，每重复100粒或少于100数的若干副重复。如是测定发芽末期休眠种子的生活力，则只用试验末期的休眠种子。,3.种子预措预湿,种子预措预湿的目的是使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备，促进活组织酶系
5、统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。(1)预措：指在种子预湿前除去种子外部的附属物和在种子的非要害部位弄破种皮。(2)预湿：方法有两种；一是缓慢吸湿，这种方法是将种子置于湿润的纸上或纸间吸湿，适用于直接浸在水中会吸水过快而引起种皮破裂的种子,或过分干燥的种子及陈种子。二是水中浸种，让其充分吸胀。,4.染色前的样品准备,（1）目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子的全部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚的主要构造，必须按其胚的营养组织的位置和特性，采用适当的方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。（2）方法：准备方法因种子构造和胚的位置不同而异（详见农作物种子四唑染色技术规定）。,5
6、.四唑染色,将已准备好的种子样品放入染色盘中，加入适宜浓度的四唑溶液以完全淹没种子，置于35恒温箱内进行染色反应。所用染色时间因四唑溶液浓度、温度、种子种类、样品准备方法等因素而异。到达规定时间或染色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗后即可鉴定。,6.观察鉴定,肉眼，手持放大镜或10100倍的体视显微镜进行观察。观察鉴定时，确定种子是否具有生活力，必须根据胚的主要构造和有关活营养组织的染色情况进行正确的判断。具体鉴定标准见农作物种子四唑染色技术规定。依据鉴定标准，将各部分分开和计数。,7.结果表示与报告,计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过生活力测定重复间的最大容许差距
7、的规定，平均百分率计算到最近似的整数。在GB/T3543.1结果报告单“其他测定项目”中要填报“四唑测定有生活力的种子%。对豆类、棉籽和蕹菜等需增填“试验中发现的硬实百分率”，硬实百分率应包括在所填报有生活力种子百分率中。,农业和园艺种子四唑准备示意图,禾谷类四唑染色鉴定图谱,三、种子生活力测定的其它方法,(一)溴麝香草酚蓝法（BTB）BTB是一种酸碱指示剂，碱性呈蓝色，酸性呈黄色。测定原理是种胚活细胞具有呼吸作用，放出的CO2溶于水为H2CO3，H2CO3解离成的H+和HCO3-使种胚周围酸度增加，BTB由蓝色变为黄色，而死种子无呼吸作用，仍呈蓝色，据此即可鉴定种子有无生活力。,（二）中性红
8、法,中性红原呈红色，在碱性条件下呈淡黄色。测定时，将种子倒入中性红的碱性溶液淹没种子当活种子进行呼吸作用时，放出CO2使碱性溶液趋于中性，中性红的红色即得以呈现出来。若溶液未变红则说明该粒种子为死种子。,（三）二硝基苯法,二硝基苯渗入有生活力的细胞后，由于细胞的呼吸作用，将间二硝基苯还原为硝基苯羟氨，在氨的作用下，硝基苯羟氨显深红色。而无生活力的种子胚不会被染色，因此，可根据种胚染色情况鉴定种子有无生活力。,（四）组织化学法,1.染料法 测定原理：有生活力的种子种胚活细胞原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，染料等大分子物质不能进入活细胞内，因而有生活力的种子胚部不能被染料染色。2.软X射线法 常用软X射线仪进行测定。测定前需将种子预湿后进行渗钡处理，然后将渗钡处理后干燥的种子置于软X射线仪上进行观察。凡是死组织，由于渗入钡离子吸收了X射线，呈不透明且较暗；但钡离子不能渗入活组织，因而活组织较透明且较亮。,
