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1、家兔急性肾功能不全,实验目的,复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判断、分析致病因素及导致急性肾衰的可能发病机制。,实验原理,肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功能受到影响，从而导致肾功能不全。,ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回漏或肾细胞损伤等均可导致GFR的降低。本实验通过皮下注射1HgCl2造成家兔急性肾
2、小管性坏死。通过本实验学习复制急性中毒性肾衰动物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红排泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰时肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分析急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化加深理解。,实验对象,家兔23kg。,实验药品与器材,1HgCl2、生理盐水、25氨基甲酸乙酯、06酚红、20葡萄糖、10NaOH、手术器械一套，注射器、试管、加样器、721分光光度计、水浴锅、离心机。,实验步骤,复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注射1HgCl2(o810mlkg)造成急性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮下或肌肉注
3、射等量的生理盐水(10mlkg)作为对照组兔。,实验步骤,观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿量。家兔称重，耳缘静脉注射25氨基甲酸乙酯40mlkg，待动物麻醉后，固定于兔台。,实验步骤,家兔心脏采血35ml置于一干燥管中（不抗凝），放置10min后，3000r/min离心15min，小心吸取血清置于另一干燥管中，备测血肌酐,实验步骤,如果心脏采血失败，则颈总动脉采血颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管放血3ml备测血肌酐,实验步骤,分离右侧颈外
4、静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约15cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检查。,实验步骤,在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片 刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定，用于收集尿液。,实验步骤,酚红排泄率测定：1)两组家兔分别耳缘静脉注射o6酚红溶液(1mlkg)，接着从颈外静脉插管处注射20葡萄糖溶液(30mlkg)。收集从开始注射酚红起15min或30min的尿液。换算成单位时间的尿量(mlmin)。,实验步骤,将收集的
5、尿液倒入500ml量筒内，加10NaOH lOml，用自来水补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径相同的试管中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。,实验步骤,肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。正常情况下从静脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红排泄率分别30%与45%。,实验步骤,血清和尿液肌酐含量测定苦味酸沉定蛋白法原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，两者比色之差为血及尿中肌酐。按表1、
6、表2的操作步骤测定血清及尿液肌酐。,表1 血清肌酐测定,实验步骤,混匀，37OC水浴30 min，以510nm波长比色，空白管调零，读OD值，然后，各管加50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD值。计算：Crp(mg%)=OD测OD测/OD标OD标0.01/0.2100 正常值:0.70.8mg%(1mg%=88.4mol/L)。,表2 尿肌酐测定,实验步骤,混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀，以530nm波长比色，空白管调零，读OD值。计算：Cru(mg%)=OD测/OD标0.05mg100ml/0.1ml,实验步骤,尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比值20；功能性肾衰时比值4
7、0。,内生肌酐清除率(Ccr)：,能较准确的反映肾小球滤过率(GFR)Ccr=Cr尿尿量（ml/min）/Cr血为此，实验步骤收集尿液必须采集有“记录单位时间的尿量”的尿液样品做尿肌酐Cr尿测定，才能与血肌酐Cr血比，计算出GFR。肌酐能自由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收，但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可忽略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近，可以代表肾小球滤过率。,实验步骤,肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓质条纹、色泽等。,思考题,1试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性肾功能不全的主要发病机制是什么？2哪些实验结果可说明肾血流量减少也参与升汞中毒性肾衰的发生机制？为什么肾血液量会减少？3.急性肾功衰时，家兔的尿液有哪些变化？为什么？,
