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1、第四章 药物定量分析与分析方法验证,China Pharmaceutical University,中国药科大学药物分析教研室,第四章 药物定量分析与分析方法验证,定量分析样品前处理方法 定量分析方法特点 药品质量标准分析方法验证,1,2,3,一、定量分析样品前处理方法,Pretreatment of sample used in quantitative analysis,定量分析样品前处理方法,概 述,泛影酸,碘番酸,碘苯酯,概 述,概 述,磺溴酞钠,三氯叔丁醇,酒石酸锑钾,富马酸亚铁,概 述,概 述,含金属有机药物,卡巴胂金属有机药物,定量分析样品前处理方法,直接测定法含金属或C-M不牢
2、固的有机金属经水解后测定法卤素联脂肪碳链（溶于适当溶剂再水解）直接回流后测定 碱化回流后测定 硫酸水解后测定经氧化还原后测定法卤素联芳环牢固（一般用于测碘）碱性还原后测定法如泛影酸 酸性还原后测定法如碘番酸 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量,不经有机破坏的分析方法:,经有机破坏的分析方法,湿法破坏 HNO3-HClO4 HNO3-H2SO4 H2SO4-MSO4 金属以高价态存在干法破坏：无水碳酸钠或氧化镁，注意温度氧瓶燃烧法,空心,A.燃烧瓶 B.铂丝网 C.D.盛固体样品滤纸及其折叠法 E.F.G.称取液体样品方法,A,G,F,E,D,C,B,氧瓶燃烧装置及称样方法,氧瓶燃烧法,
3、样品 吸收液 测定方法含氟有机药物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝 分光光度法含氯有机药物 NaOH溶液 银量法 汞量法 分光法含溴有机药物 H2O2-NaOH液 或NaOH液-银量法 分光法 硫酸肼饱和液含碘有机药物 NaOH液-银量法 碘量法 硫酸肼饱和液 汞量法 分光法,碘苯酯含量测定,取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOH T.S.2ml与H2O 10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约35min，以除去剩余的溴蒸气，加KI 2g，密塞，摇匀，用Na
4、2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2,二、药品质量标准分析方法验证,指导原则 药品质量标准分析方法验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则 缓释、控释制剂指导原则 微囊、微球与脂质体制剂指导原则 细菌内毒素检查法应用指导原则,第三节 药品质量标准分析方法验证,目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求 效能指标：评价分析方法的尺度 效能指标包括:精密度,准确度,检测限,定量限,选择性,线性与范
5、围,耐用性,(1)准确度（accuracy）：测量值与真实值接近的程度 表 示:回收率 测定方法：回收试验 加样回收试验,(2)精密度（precision）：,定 义:同一样品多次测量值之间相互接近的程度表 示：标准偏差(s),相对标准偏差(RSD)重复性:同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性:不同实验室，不同人测定的精密度,(3)专属性（specificity）:,指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性)。,(4)检测限（limit of detection，LOD）：药物能被检出的最低浓
6、度(g/ml)测 定:信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限（1imit of quantitation，LOQ）：药物能被定量测出的最低浓度(g/ml)测 定:信噪比法(S:N=10:1),第三节 药品质量标准分析方法验证-性能指标,(6)线性与范围（linearity and range）：待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围 线性关系：Y=a+bx（r=0.9999)线性程度：相关系数(7)耐用性（robustness）:测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等,第三节 药品质量标准分析方法验证-性能指标,检验项目和
7、验证内容：,已有重现性验证，不需验证中间精密度 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充 视具体情况予以验证,第四节 生物样品分析的基本步骤,1.药物从蛋白结合或缀合物中释出 蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀 盐酸水解 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH 7.011.0使肽键降解),定量分析方法的验证-生物样品分析,（一）特异性内源性物质不得干扰原药、代谢物（二）标准曲线r0.9900，至少5个浓度，不许外延（三）精密度和准确度RSD15、20相对回收率85115（80120）,（四）最低定量限LOQ35倍t
8、1/2，或1/101/20倍Cmax（五）样品稳定性室温、冻融、冰冻长期（六）提取回收率（绝对回收率）一般低于100，须稳定（七）质控样品已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以确保定量测定的准确度,定量分析方法的验证-生物样品分析,样品 固相净化 及 反相高效液相色谱法测定血浆中茶碱,伍朝筼等 药学学报,1989,24(10):769773,血浆样品 净化后空白血浆 净化前空白血浆,Column Zorbax C18 5m 2.5cm4.6mm 254nmPrecolumn YWG-ODS 9-11m 54.6mmMobile Phase:甲醇-醋酸钠(0.05mol/L pH3.0)5050,50 100 150 200,25,20,15,10,5,茶碱(g/ml),(min),五例病人血浆茶碱浓度测定,6.4,12.8,19.225.6 32,3,2.4,1.8,1.2,0.6,0,茶碱(g/ml),标准曲线,Y=9.56610-2X+6.15310-3 r=0.9995,
