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1、第九章,维生素类药物的分析,概 述,维生素A,维生素D,维生素E,维生素B1,维生素C,练习与思考,返回主目录,基本要求,基 本 要 求,一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。七、熟悉本类药物杂质检查方法。八、了解维生素A三点校正法的推导过程。,返 回,概 述,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资
2、。人体不能合成维生素。,VitA、D2、D3、E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。,分类,按溶解度分,返 回,-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R:,第一节 维生素A,为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯,（一）,具有UV吸收,存在多种立体异构化合物,VitA2,VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,条件 无水无醇,CHCl3,蓝色,紫红,（BP（2000）,max为326nm一个吸收峰,max为350390nm三个吸收峰,
3、去水VitA（VitA3）,VitA,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑,立体异构体氧化降解产物合成中间体,UV法,（一）,维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸,三点校正法（法定方法）1.原理：（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。,2.波长的选择：（1）1 VitA的max（328nm）（2）2 3 分别在1的两侧各选一点,测定对象 VitA醋酸酯,=12nm,测定对象 VitA醇,1=325nm,2=310nm,3=334nm,测定法（1）基本步骤:第一步
4、 A的选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除,注意：C 为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,判断 是否在326329nm之间,在326329nm之间,改用第二法,是,否,求算 并与规定值比较,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算 A328（校正）,用A328计算,第二法,第二法,讨 论,VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波
5、长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A300：0.374A316：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228,A300/A32
6、8：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344,求本品中维生素A占标示量的百分含量？,A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+0.010.01 0+0.02+0.04,=,A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(20.663 0.592 0.553)=0.637,适用于维生素A醇,（等吸收比法）,第一法无
7、法消除杂质干扰时用此法,皂化法、6/7A法,（3）第二法,水溶性,脂溶性,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断 A300/A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max 618nm620nm,标准曲线法,（二）,返 回,第二节 维生素D,维生素D2,一、结构与性质,维生素D3,开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。,手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。,多烯：可进行紫外检测。,二、鉴别试验,1.显色反应,三氯化锑反应
8、 橙红色渐变粉红,三氯化铁反应 橙黄色,二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,2.比旋度鉴别,维生素D2,维生素D3,溶 剂,浓 度,比旋度值,无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5+107.5,+105+112,注意事项：应于容器开启30分钟内取样，在溶液配制后30分钟内测定。,3.区别反应：以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色，在495nm处有最大吸收。,4.其他方法：TLC、HPLC、制备衍生物测熔点,三、杂质检查,维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。,前维生素D的光照产物,四
9、、含量测定方法,中国药典（2000年版）采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。固定相：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）,第一法：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：1系统适用性试验：测定重复性和分离度。,2测定校正因子：A S/m S f1=-A r/m r f2=（A S m r-f1 m S A r1）/（A r1 m S）,3含量测定：mi=（f1 Ai1+f 2 A i2）m S/A S,第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液A。2净
10、化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维 生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制 备成供试液B。固定相：ODS 流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）3含量测定：取供试液B按第一法测定。,第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供 试液C。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。,返 回,苯并二氢吡喃醇,第三节 维生素E,*,*,*,dl生育酚醋酸酯,苯环+二氢吡喃环+饱和烃链,1、UV,2、乙酰化的酚羟基 易水解,緘,緘,緘,瑌,醌型化合物,杂质，需
11、检查,緘,生育红,（一）,硝酸反应,橙红色,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,血红色,=41.045.5,max=284nm,min=254nm,0.01%无水乙醇中,UV法,（三）,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷-乙醚（4：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf=0.7-生育酚 Rf=0.5-生育醌 Rf=0.9,TLC法,（四）,2.游离生育酚,杂质检查,三、,原理,酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制。,（M生育酚=430.8）,例,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/
12、L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,2.15,限量,GC法（法定方法）,（一）,GC特点,1、,选择性好灵敏度高速度快分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N2固定液硅酮（OV-17）担体硅藻土或高分子多孔小球柱温265检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标正三十二烷 n 500 R2,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近,校正因子：,W,W,K,K,%,VitE,1,2,=,稀释倍数,稀释倍数,样,对,实际工作中的计算方法
13、,（二）HPLC法 外标法 此外，还有铈量法、比色法和荧光法,返 回,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),第四节 维生素B1,HCl,Cl-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,（二）,UV,共轭双键,max=246nm,与生物碱,（三）,硫色素反应,（四）,（五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。,ChP,硫色素,2H,VitB1,H+,H+,H+,H+,S元素反应,Cl-反应,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,反应摩尔比为1：2,UV法,（二）,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,规格g/片,g/100ml,g,ChP,（每ml）相当于标示量的%=,规格g/
14、ml,ml,畗,（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析,第五节 维生素C,L抗坏血酸,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,C3OH的pKa=4.17,C2OH的pKa=11.57,一元酸,L(+)抗坏血酸活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,与碱反应,1、与AgNO3反应,2、与2，6-二氯靛酚反应,(ChP2000),氧化型,玫瑰红色,(ChP2000),（玫瑰色）,（无色）,3.其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色碱性酒石酸铜 砖红色沉淀磷钼酸 钼蓝,或盐酸,50,吡咯,USP,（蓝色）,(糠
15、醛),（戊糖）,BP,0.01mol/L HCl,三、杂质检查,1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法,指示剂 淀粉指示液,H+,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（1）酸性环境 d.HCl,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,（2）快速滴
16、定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年-胡萝卜素被发现。1905年-甲状腺肿大被碘治愈。1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻
17、病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。1922年-维E被发现。1928年-科学家发现维B至少有两种类型。1933年-维E首次用于治疗。1948年-大剂量维C用于治疗炎症。1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。1957年-Q10多酶被发现。1969年-体内超级抗氧化酶被发现。1970年-维C被用于治疗感冒。1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。,返 回,练习与思考,A型题,1.维生素B1的鉴别方法是A.三氯化铁反应 B.硫色素反应 C.柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E.双缩脲反应,2.维生素E中国药典规定的含量 测定方法为A.非水溶液滴定法 B.旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E.GC法,B型题,A。亚消基铁氰化钠反应 B.硫色素反应 C.硝酸反应 D.三氯化锑反应 E.硝酸银试液的反应 1.维生素C 2.维生素E 3.维生素B1 4.维生素A,E,C,B,D,X型题,1.用碘量法测定的药物有A.醋酸地塞米松 B.丙酸睾酮 C.维生素C D.硫酸阿托品 E.维生素C注射液,返 回,2.可用紫外分光光度法测定含量的 药物有A.维生素A丸剂 B.丙酸睾酮 C.维生素A D.硫酸阿托品 E.维生素B1片,
