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1、输血和输血技术试验,实验内容,血型鉴定抗体筛选交叉配血,血型鉴定,目的,掌握红细胞ABO血型及Rh血型鉴定,原理,ABO血型鉴定：根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A及抗B，可以将血型分为A型、B型、AB型、O型四种，利用红细胞凝集实验通过正定型、反定型准确鉴定ABO血型。Rh血型鉴定：IgM型盐水抗D试剂能够与D阳性红细胞在盐水介质中形成肉眼可见的凝集。,原理,试剂 抗A及抗B血清（商品试剂）5%A型和B型红细胞（试管法）10%A型和B型红细胞（玻片法）IgM型盐水抗D试剂标本 抗凝静脉血 EDTA-K2,红细胞ABO血型鉴定（试管法正定型）,标记两支干净的试管-A和-B
2、在标记为-A的试管中加1滴抗A试剂。在标记为-B的试管中加1滴抗B试剂。在每个试管中各加入5%受检者红细胞悬液(1份压积红细胞+19份0.9%盐水)轻轻混匀，1000g离心1分钟。检查上清液是否有溶血。轻轻重悬细胞扣，检查凝集。,红细胞ABO血型鉴定（试管法反定型）,标记两支干净的试管Ac和Bc每管加入2滴受检者血清。在标记Ac的试管中加入1滴5%A型试剂红细胞。在标记Bc的试管中加入1滴5%B型试剂红细胞。轻轻混匀，1000g离心1分钟。检查上清有无溶血。轻轻重悬细胞扣，检查凝集。判断并记录结果。,红细胞ABO血型鉴定（玻片法）,在标记的玻板上分别加一滴抗A、抗B。各加一滴10%受检者红细胞
3、悬液(1滴压积红细胞+9滴0.9%盐水)轻轻混匀，室温放置2-15分钟。观察并记录结果：凝集为阳性结果，不凝集为阴性结果，对结果有怀疑，应用试管法重新实验。,红细胞Rh血型鉴定,试管法标记一支7512mm的试管加入抗D血清1滴，加1滴5%的待检细胞。轻轻混匀，1000g离心1分钟，或3000r/min，15秒。检查是否溶血，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集玻片法在玻板上标记待检红细胞编号。加入抗D血清1滴于标记玻片中。将3545%的待检细胞1滴滴入玻片并混匀。室温放置2分钟左右观察结果。,结果判读（ABO血型鉴定）,结果判读（Rh血型鉴定）,报告方式,XXX型，Rh+/-,注意事项,玻片、试管都要
4、标记！A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，一般先加血清，再加红细胞悬液，便于核实是否漏加血清。离心时间、速度严格要求。要在光亮的背景下观察凝集,可使用光镜检查小的凝集,同时应注意观察凝集强度，有助于A、B亚型的发现，观察后立即记录。,抗体筛选,目的,掌握抗体筛选的试验方法,盐水试验法白蛋白介质法低离子强度介质法（LISS）酶技术抗球蛋白试验聚凝胺促凝技术PEG促凝技术,原理,抗人球蛋白法：IgG类抗体，由于其分子量小，与红细胞结合以后在盐水介质中不发生肉眼可见的凝集，称为不完全抗体。
5、但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现凝集。,试剂 抗球蛋白试剂阳性对照血清阴性对照血清O型红细胞生理盐水标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）,操作步骤,在标记好的试管中各加入两滴血浆和一滴5%的O型红细胞，混匀。于370C孵育一小时。用生理盐水洗涤红细胞4-6次，完全倾尽末次洗涤盐水。向得到的干细胞扣中加入1-2滴抗球蛋白试剂。1000rpm，离心1分钟。检查凝集并记录结果。,结果判读,加入抗球蛋白试剂后，如红细胞出现凝集或溶血，则结果为阳性。加入抗球蛋白试剂后结果为阴性，而加入直抗阳性对照细胞后呈阳性反应，则结果为阴性。如加入直抗阳性对照细胞后呈阴性反应，则结果不可靠，必须重复检测。,
6、操作步骤,在标记好的试管中按下表加入试剂及血清。,ABO血型鉴定 不规则抗体筛选,玻片法（正定型）试管法（正定型,反定型）,盐水法聚凝胺法抗人球法,微柱凝集试验技术,达亚美微量定型系统凝胶测试法 基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而在凝胶底部，呈阴性反应。,DiaMed 卡法结果判读,4 在凝胶柱顶端形成单一层凝集细胞。3 凝集层主要位于凝胶柱上1/3。2 凝集位于整个凝胶柱，底部仅有较少细胞。1凝集层位于凝胶柱下1/3。凝胶中细胞没有凝集
7、或溶血视为阴性。,思考题,1.红细胞ABO血型鉴定正反定型不一致原因 2.导致Rh血型鉴定出现假阳性和假阴性原因3.抗体筛选的临床意义,交叉配血Cross Match,目的,掌握交叉配血的试验方法,原理,盐水法 检查供受者之间有无ABO血型不合。用于抗体筛选阴性和不同血型骨髓移植患者的输血。,原理,凝聚胺法 凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间的距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则凝集不可逆。离心后，加入重悬液，凝聚胺的凝聚作用可通过加入枸橼酸钠而中和，使正常红细胞的凝聚解散，而抗
8、体引起的凝集仍然存在。,试剂 抗A/抗B 标准血清A1/B反定型细胞献血者血清或血浆以及5%红细胞悬液受检者血清或血浆以及5%红细胞悬液BASO polymatching 试剂盒 标本：抗凝静脉血（EDTA-K2）,操作步骤（盐水法）,标记为主侧的试管中加入受者血清或血浆2滴和供者红细胞悬液1滴。标记为次侧的试管中加入供者血清或血浆2滴和受者红细胞悬液1滴。混匀，立即1000g离心1分钟。检查是否溶血，轻轻摇动试管检查凝集。复查献血员ABO血型，患者ABO/Rh血型。判断并记录结果。,操作步骤（凝聚胺法）,取试管2支，标记主次侧在主侧管中加入病人血清或血浆2滴，加供血者5%红细胞悬液1滴。次侧
9、管加供血者血清或血浆2滴，加入病人5%红细胞悬液1滴。各加LIM液0.7ml，混匀，再各加polybrene(凝聚胺)溶液 2滴，并混合均匀。,操作步骤（凝聚胺法）,3400rpm离心10秒，倒掉上清液，管底残留约0.1ml液体。轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。最后加入悬浮液（Resuspending）2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。,结果判读,如果30秒内凝集解散，代表是凝聚胺引起的非特异性凝集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血实验不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。,思考题,1.交叉配血试验中的影响因素 2.出现交叉配血不合的可能原因,
