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1、第一章 血液标本采集和血涂片制备,在自动化检验仪器应用普遍的现代临床实验室中，基础性的血液标本的采集和处理是检测前质量保证的主要环节。,正确采集血液标本是获得准确、可靠检验结果的关键。,第一节血液标本采集,一、血液标本类型,二、血液标本采集方法 血液标本的采集方法按采集部位可分为皮肤采血法、静脉采血法和动脉采血法。（一）皮肤采血法 主要用于需要微量血液的检验项目和婴幼儿血常规检验。皮肤采血法所获得的血液标本是微动脉血、微静脉血和毛细血管血混合的末梢全血。,1采血针皮肤采血法（1）器材准备（2）部位选择：采血针皮肤采血法的部位与评价见表1-1。,（3）采血方法：见表1-1-1。,（4）注意事项：
2、见表1-1-0。,2激光皮肤采血法 激光皮肤采血法属于非接触式采血法。该方法具有感染机会少、痛感轻和工作强度低等优点。,（二）静脉采血法 静脉采血法是临床广泛应用的采血方法，所采集的静脉血能准确反映全身血液的真实情况，因其不易受气温和末梢循环变化的影响，而更具有代表性。静脉采血法根据采血方式可分为普通采血法和负压采血法。,1普通采血法普通采血法，即传统的静脉采血方法。,2负压采血法负压采血法又称为真空采血法，具有计量准确、传送方便、封闭无尘、标识醒目、刻度清晰、容易保存、一次进针多管采血等优点。,（1）主要器材：负压采血系统由双向采血针、采血管构成（图1-1）。负压采血管的种类和用途见表1-2
3、。,（2）静脉选择和消毒：与普通静脉采血法相同。,图1-1 负压采血系统,图1-2 多管血液标本采集顺序,（三）动脉采血法 动脉采血法的步骤与方法、注意事项见表1-2-4、表1-2-5。,三、血液标本的处理、运送与保存,（一）血液标本检测前预处理 1分离血清或血浆 2分离细胞 3添加剂的选择 为了快速获得血清有时还要使用促凝剂和分离胶等。常用添加剂的用途和特点见表1-3。,（二）血液标本运送 血液标本的运送可采用人工运送、轨道传送或气压管道运送等，无论采用哪种运送方式，都应该注意以下3个原则。,实验室要制定标本接收的标准文件。因不同的检验项目对标本的要求不同，还要制定拒收标准。因“让步”而接收
4、的不合格标本，其检验报告单上应注明标本存在的问题，在解释结果时必须特别说明。,需要注意的是，标本拒收不但造成检验费用增高和时间浪费，还可能延误诊治甚至危害患者。因此，涉及血液标本采集的所有工作人员，都必须在标本采集、转运和处理各个环节进行全面而规范的培训。,（四）血液标本保存 血液标本保存应当在规定的时间内、确保标本特性稳定的条件下，按要求分为室温保存、冷藏保存、冷冻保存（表1-3-3）。,（五）检测后血液标本的处理 根据实验室生物安全通用要求要求：将操作、收集、运输及处理废弃物的危险减至最小。将其对环境的有害作用减至最小。,第二节血液标本采集的质量保证 标本采集是检测前质量管理的主要内容，检
5、测前的大部分工作是由患者、医生、护士、运送人员及检验人员在实验室以外的空间和进入检验过程前完成的，临床实验室难以监控这一过程中的每个环节。,一、血液标本采集环境要求与生物安全（一）环境要求 应该人性化设置，空间宽敞，光线明亮，通风良好，血液标本采集的台面高低和宽度适宜，座位舒适。（二）生物安全 1防止交叉感染 2环境消毒,二、血液标本采集的过程要求（一）检验申请单 检验申请单或电子申请表中应包括患者最基本的信息，以识别患者和经授权的申请者，同时应提供相关的临床信息。相关的临床信息至少包括姓名、性别、年龄，以用于解读检验结果。,（二）标本采集和处理的具体要求 实验室应向负责采集标本的人员提供标本
6、采集和处理的具体要求（表1-4）。,（三）标本信息完整性与接收 血液标本可通过检验申请单溯源到特定的个体，实验室不应接收或处理缺少标识的检验申请单和标本（表1-4-1）。,三、血液标本采集及检测结果的影响因素（一）饮食和生理状态 患者饮食和生理状态对检验结果的影响见表1-5。,（二）药物 药物干扰检验结果主要有4条途径：影响待测成分的物理性质。参与检验过程的化学反应。影响机体组织器官生理功能和（或）细胞活动中的物质代谢。对机体器官的药理活性和毒性作用。,（三）采血操作1采血时间2采血部位3采血时体位4压脉带的使用（四）其他1输液。2溶血（表1-6）3某些抗凝剂对标本的影响4低温保存对标本的影响
7、,*假设HCT为0.50,第三节 血涂片制备与染色 外周血涂片检查是最有益的血液系统疾病检查手段，能为临床提供大量的信息。因此，血涂片制备和染色的质量直接影响血细胞形态的检验结果。一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定的空隙，边缘整齐。,一、血涂片制备（一）载玻片要求 制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度。新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。已用过的载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤剂的水中煮沸20min，用热水将肥皂和血膜洗去，再用自来水反复冲洗，擦干或烤干后备用。,（二）血涂片制备方法 1手工推片法（1）薄血膜推
8、片法（表1-4-2）：临床常用的方法，主要用于观察血细胞形态及仪器法检测结果异常的复查。,（2）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。,2自动涂片法 目前有许多型号的自动血液分析仪，配备有血涂片仪和染色仪，可以按照检验人员的指令执行自动送片、取血、推片、标记和染色等任务。【方法学评价】良好的血涂片是血细胞形态学检查的前提。血涂片制备的方法学评价见表1-7。,【质量保证】薄血膜
9、推片法的质量保证项目与评价见表1-8，血涂片质量问题及可能的原因见表1-9。,（一）染料 1碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特点见表1-10-0。,（二）染色方法 1Wright染色法（1）染色原理 1）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同，对各种染料的亲和力也不同（表1-10）。,2）pH值的影响：血细胞多种成分属于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随着溶液的pH而定。因此，血细胞染色对氢离子浓度十分敏感。,染色时常用缓冲液（pH6.46.8）来调节染色时的pH值，以达到满意的染色效果（表1-11）。,
10、（2）试剂 1）Wright染液：Wright染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用：溶解伊红和亚甲蓝。具有很强的脱水作用，可以固定红细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。2）磷酸盐缓冲液（pH 6.8）,（3）染色方法与结果判断：染色方法见表1-11-1。,2Giemsa染色法（1）染色原理：与Wright染色法基本相同。Giemsa染色法加强了天青的作用，提高了噻嗪类染料的效果。（2）试剂：染液放置越久，其染色效果越好。,（3）染色：Giemsa染色法的步骤与方法见表1-11-2。,3Wright-Giemsa染色法 Wright-Giemsa染色法结合了Wright染色法和Giemsa染色法的优点。在Wright染液配方的基础上，每1.0g Wright染料添加0.3g Giemsa染料。染色步骤与Wright染色法相同。【方法学评价】血涂片染色的方法学评价见表1-12。,【质量保证】染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH密切相关。Wright染色的质量保证见表1-13。血涂片染色不佳的原因及纠正措施见表1-14。,
