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1、药品质量标准与 注射剂安全性检查 天津市药品检验所 唐元泰,第一部分安全性研究与药品质量标准制订质量标准的目的：安全性、有效性、质量可控性药品的批准文件：批准件(批准文号)、质量标准、说明书,一.药物的非临床安全性研究,目的:为临床用药和质量标准提供依据内容：急性毒性试验（毒性反应、半数致死量、最小致死量、最大耐受量），毒性分级、为标准和其它非临床、临床试验提供依据，如异常毒性、遗传毒性长期毒性试验（积蓄毒性，靶器官、最大无毒剂量），药品、杂质、有机溶剂、重金属、农药等，为标准和临床试验提供依据,生殖毒性试验（生殖功能、致畸、围产期),说明书中孕妇用药的A、B*、C*、D*、X*,性激素、农药
2、、有机溶剂遗传毒性试验（基因突变、染色体畸变）马兜铃酸、亚硝胺、环氧化物致癌试验（致突变剂、长期用药）苯、亚硝胺、黄曲霉毒素、砷、铅、铬、镉、镍依赖性试验(精神依赖、身体依赖)镇痛、镇静药、中枢兴奋药,一般安全性试验（中枢神经系统-重金属、农药，心血管，呼吸系统，植物神经系统、消化系统、泌尿系统.过敏、刺激性、溶血试验）毒代动力学试验:推定临床剂量、限值标准内分泌毒性试验:植物激素，二恶英免疫毒性试验:免疫抑制剂，抗原性、中药非临床安全性试验为质量标准中制订杂质的测定限值提供依据，如有机溶煤残留,二.临床安全性研究,I期临床（安全性，药代）II期临床（安全有效剂量范围）III期临床（有效性，不
3、良反应和剂量）IV期临床（不良反应和剂量）为确定安全性检查限值提供剂量依据，如热原、内毒素、降压、过敏等,三.危险性评价,危险性(risk，risk level):指特定条件下有毒物质所致危害的概率。它常以特定条件下某个群体中在特定时段内发生病例的百分数进行表示；能够依据实际发生的病例数或预测未来发生的病例数，或依据实验资料外推得出的危险性 20世纪70年代前安全性评价，80年代开始危险性评价，危险性评价是制订质量标准、环保标准，以及确定安全性限值的定量依据。,有关基本概念和定义,无可见有害作用水平(no observed adverse effect level，NOAEL)与最低可见有害作
4、用水平(LOAEL)有阈效应（threshold effect）与无阈效应（致癌作用，过敏反应？）参考量(RfD):是估算人群（包括敏感的亚群）每日容许接触量,与每日容许摄入量（ADI）相同，可推导出终生接触不产生有害健康影响的接触量基准剂量(BMD):从剂量-反应曲线上与110%反应率相对应的有效剂量 估算接触量（estimated exposure dose EED），以各种来源和接触途径测定和估算的化学物总量,危险性评价过程,包括危害性鉴定、接触评价、剂量-反应评价及危险性特征判定四项内容 有阈效应评价主要计算公式:参考量RfD=NOAEL(无有害作用水平)/UFSMF 或参考量RfD=
5、BMD(基准剂量)/UFS MF UFS 为不确定系数;MF为校正系数无阈效应有定性和多种定量计算模型。危险性评价存在多种不确定因素，尚在研究过程中,RfD时选用不确定系数和校正系数,一般考虑人群变异率时采用10的UFS 动物与人之间的反应差异，一般用10的UFS 没有慢性资料，只有90天资料时采用10的UFS 而使用最低的LOAEL时采用3的系数 对不完整的资料，一般采用3-4的系数 限值制订应考虑“安全性和危险程度、适应症、临床剂量、用药时间、工艺水平、稳定性、三废污染、环保、测定方法灵敏度和精密度等因素”,例:溶剂残留量浓度限度（）计算 PDE：人每日对溶剂可接受的最大摄入量 PDE=N
6、OEL x体重调节/F1xF2xF3xF4xF5 NOEL：动物不反应量，F1 种间差、F2 个 体差、F3 研究时间、F4 严重系数、F5 可 变系数 乙腈：小鼠13周口服不反应量约50mg/kg.天 PDE=50mgx50kg/12x10 x5x1x1=4.1mg/天=1000 x PDE/剂量 乙腈：C=1000 x 4.1mg/10g=410PPm,四.药品质量标准研究工作,研究目的：为制订原料和制剂质量标准提供依据；为非临床和临床研究提供质量一致性；为药品临床用药安全、有效、质量可控提供保障研究内容：性状，鉴别，检查，含量测定，稳定性。理化性质、方法学验证、标准确定质量标准研究：与工
7、艺、临床的动态互动,四.杂质与安全性,性状和鉴别：杂质可能影响性状，干扰鉴别，影响安全性，“重视外加杂质的鉴别”.检查项目：酸硷度和渗透压：刺激性、细胞损伤（注射剂、眼药水），“渗透压的安全性”有关杂质：原辅料、试剂在生产和贮存中产生的副产物、降解物有毒杂质或普通杂质，“安全性和质控的需要”例：葡萄糖：氯化物、硫酸盐、亚硫酸盐、可溶性淀粉、蛋臼质、钡盐、钙盐、铁盐、砷盐,已知杂质检查:“质量控制和安全性需要”葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛 地高辛中洋地黄毒苷 安乃近中4N-去甲安乃近 缩宫素与升压素 青霉胺中的青霉素 四环素中的差向脱水四环素,不溶性微粒和可见异物-血管栓塞(肺,脑)形成。注射剂
8、每ml中10微米以上 不得过25粒，25微米以上不得过粒。（显微记数法，光阻法）静脉滴注用乳剂注射用混悬液，不得用于静脉注射和椎管注射。滴眼剂主药10微克中大于50微米粒子不得多于2个，不得有大于90微米的粒子。“微粒限值标准的安全性未经过临床和实验验证”,有机溶媒残留-根据毒性，致癌性分类一类:不可接受毒性，可疑或致癌.苯、四氯化碳、二氯乙烷 等，28PPm 二类:毒性不大，限制使用.乙腈410（PPm，下同）、氯仿60、环氧乙烷3880、乙二醇62、正己烷290、甲醇3000、吡啶200、甲苯890、二甲苯2170等三类：低毒、理相.醋酸、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、乙醚、丙醇、二甲亚砜等，50
9、00PPm四类：尚无足够毒理学资料，石油醚、三氯乙酸、异辛烷等,溶出度生物利用度，过量不良反应（苯妥英钠、洋地黄）缓释、控释、迟释制剂有效性、安全性的变化防腐剂、附加剂用量的限制：苯酚0.5%，甲酚0.3%，焦亚硫酸钠0.1%-0.2%，吐温80的危险性和应用在研究中（安全性、用量、质量问题）微囊、微球、脂质体制剂的安全性和质量控制：包封率、突释效应、渗漏率、氧化指数、粒径及其分布,重金属-铅，镉，汞，铬，镍，110PPm砷和硒 砷0.45PPm,硒50PPm,铅：骨髓、神经、生殖、致癌镉：骨骼、胚胎毒、肝肾、前列腺癌汞：神经(记忆、运动、视野)、多脏器毒性、垂体甲状腺铬：(6价)鼻中隔穿孔、
10、皮肤溃疡、肺癌镍：镍痒、神经、心肌传导、肺、鼻咽癌钡：心血管、麻痹、流产砷：(3价5价有机)心血管、消化道、黏膜穿孔、神经炎、染色体畸变、肺癌前变、皮肤癌硒：(高量)肝肾、动物致畸、致癌(人未定),农药残留-神经毒性:含氯农药(6660.2,DDT0.2,五氯硝基苯0.1等),有机磷（对硫磷0.05,乐果0.1,甲胺磷0.1,敌敌畏0.2等).氨基甲酸酯类(西维因2.0叶蝉散等)除虫菊类(低毒,低残留,溴氰菊酯0.5,氰戊菊酯0.2),有机氯：DDT可疑致癌、生殖毒,666肝肠肺癌,其他主要神经毒、可疑致癌有机磷：神经毒，毒性有差别，不稳定除虫菊类：鱼类毒性大氨基甲酸酯类：抗胆碱酯酶、肝肾(高
11、剂量),无菌-感染,注射剂,手术、烧伤、严重损伤局部用药微生物限度检查感染 细菌数(口服1000/g）、霉菌数（100/g）、大肠、沙门、金黄、绿脓。螨、黄曲霉毒素0.02 0.005PPm热原、细菌内毒素-发热，降压，休克（限值:L=K/M K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量,即300内毒素单位/60Kgh 或185EU/m2h,M为为人每公斤体重每小时最大供试药品剂量,特殊情况做必要调整）,异常毒性检查-急性毒性杂质(抗生素,中药注射剂,生化药品，生物制品)降压物质检查-组胺、类组胺物质(抗生素,生物制品,动物提取物),心血管反应杂质过敏反应检查-致敏物质(右旋糖酐,细胞色素C)
12、.溶血，凝集-血液系统毒性反应，静注刺激性-致炎症和疼痛的制剂(浓度、给药途径)升压物质升压素（垂体提取物）,化学药品-聚合物(变应原，抗生素，分子排阻色谱法)、晶体和手性药物(生物特异性)中药注射剂：蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子，“干扰试验与方法研究”医疗器械-细胞毒性试验,生物相容性试验(细胞,组织，血液变化)生物制品-病毒外因子检查，外源性DNA残留，菌体残留，抗生素残留,第二部分注射剂的安全性检查,一、注射剂安全性检查法项目设置,1.中药注射剂安全性检查法项目设置,中药安全性检查项目有热原（细菌内毒素）、过敏反应物质、血压反应物质、异常毒性、溶血与凝聚、刺激性等项，根据注射剂的用
13、法与用量和危险性评定设定相应检查项目。,如注射液为肌内注射，可设异常毒性、热原（内毒素）、过敏反应物质等检查项。“必要时设刺激性项”如注射液为静脉注射，必需设包括异常毒性、热原（内毒素）、过敏反应、降压物质、溶血与凝聚等所有安全性检查项，其中热原(内毒素)检查项,应以热原检查为主。“临床类过敏反应与降压物质有关应加以重视”,2.对化学药品（包括生化药品）中注射液安全性查项目设置,如注射液为肌内注射,而且原料为化学合成,一般可不设异毒、热原(内毒素)、过敏、降压、刺激性、溶血等检查项。但动植物和微生物发酵提取物、临床剂量大者应经相关研究后，考虑设定除降压物质和溶血外的安全性检查项目如注射液为静脉
14、注射，必需有内毒素（热原）检查项,以内毒素检查为主，如该药有解热作用或毒性较大(如抗肿瘤药),影响热原检查，设内毒素检查项较合理。如药品严重干扰内毒素检查，则用热原检查合理,如注射液原料来自中药、动物脏器和微生物发酵液提取，若有可能混入毒性杂质而又缺乏有效的理化分析方法，则应考虑异常毒性试验。如注射液为静脉注射且含有原料来自中药提取物,并有可能混入具有溶血和血细胞凝聚物质时，应考虑设溶血和凝聚检查项。用于鞘内、腹腔、眼内注射者应设刺激性或细胞毒检查项,如注射剂原料来自中药、动物脏器和微生物发酵液提取,并有可能混入异源蛋白或未知致敏原，如无可靠灵敏的的蛋白检查方法且临床有较高的过敏反应的发生率，
15、应考虑设过敏反应检查项。(蛋白质测定、确定致敏性)如注射液为静脉注射，原料来自中药、动物脏器和微生物发酵液提取,有可能混入组胺、类组胺等降血压和类致敏反应化合物时,应考虑设降压物质或组胺类物质检查项目。,3.用于注射剂辅料安全性生物检定检查项目设置,注射剂和眼用制剂的辅料使用面广、使用期长、使用量大、来源复杂，与药品的安全性直接相关，应重点控制。应在质量标准中配合理化分析方法设安全性生物检查项目，品种的剂量限值应根据辅料的来源、性质、用途、用法用量而定。辅料均应按用途设“微生物限度”检查项，直接用于无菌制剂应设“无菌”检查项。,来源于动植物、微生物发酵提取的辅料，用于注射剂时，如无相关的理化测
16、定方法,应参照注射剂安全性检查的要求考虑设“过敏反应物质”、“降压物质”、“异常毒性”等检查项。用于鞘内和腹腔注射剂、眼用制剂的专用辅料根据其使用最高浓度应考虑设“剌激性”检查项。,二、安全性检查项目方法和限值确定指导原则,1.热原(细菌内毒素)检查,热原检查：家兔法，临床一次最大剂量的25倍（中药注射剂35倍）作为限值。细菌内毒素检查：限值L=K/M，K为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kgh）表示，M为人每公斤体重每小时最大供试品剂量，以ml/（kgh）、mg/（Kgh）或U/（Kgh）表示。人均体重以60kg计，体表面积以1.62平方米计。,.内毒素限值设定：L=K/
17、M 1.确定每小时最大剂量：以一次量,小儿用量和重病用量 2.国外药典中热原和内毒素剂量仅作参考,应以计算值为基准再考虑安全系数.3.感染、肿瘤、心血管、中枢疾患、小儿用药和复方，应适当提高要求，M选用临床每小时最大剂量的23倍。4.复方、输液、工艺易污染者从严，复方输液内毒素限值采用0.50EU/ml，热原剂量以10mL/Kg 5.给药途径,按肌内-静滴-静脉-同位素-鞘内顺序从严 6.确定内毒素限值前，应经试验了解药品的最大无干扰浓度，必要时说明排除干扰方法。7.原料和各制剂一般应基本一致 8.由于生产工艺、临床剂量变化和干扰等因素影响可适当考虑调整限值并作说明,美国、日本部分药品规定限值
18、的差异,2005版和2010版检查品种的增加研究多数品种用不同鲎试剂研究结果比较一致，用0.1250.5EU/ml灵敏度可以进行限值检测有的品种需要用0.030.06EU/ml鲎试剂（盐酸布比卡因、甲磺酸酚妥拉明）如用0.03EU/ml鲎试剂才可检测,宜采用热原检查,少数品种最大不干扰浓度相差较大,可能与注射剂处方和鲎试剂差异有关 抑肽酶 0.75u/ml 14u/ml 妥布霉素 0.5mg/ml 0.125mg/ml 丝裂霉素 1mg/ml 0.0125mg/ml 葡萄糖酸钙注射液 0.3125mg/ml；5mg/ml 氯唑西钠 5mg/ml 1.25mg/ml,不同生产厂的样品，反应差异较
19、大 氟康唑注射液，原液2mg/ml 无干扰，有的12倍稀释才无干扰 尿激酶 5000u/ml 增强；有的无干扰 不同鲎试剂对同一样品较大差异 注射用派啦西林钠 10mg/ml；1.25mg/ml 替加氟注射液 8mg/ml 无；8mg/ml增强；有的2.67mg/ml抑制,2010版中国药典与国外药典比较,2.过敏反应物质检查：(1).测定注射剂对豚鼠腹腔(或皮下)和静脉给药的无毒性反应剂量(2).致敏和攻击剂量应小于该途径豚鼠的最大无急性毒性反应剂量.如原液无毒性则用原液按药典方法检查(3).研究时可用半成品（中药提取物）或成品致敏,至少在14、21、28天分别攻击一次,同时进行过敏介质Ig
20、 E的测定。确定激发最佳时间 以原料内控为主，或以原料致敏，成品激发，可缩短测定时间，提高质量,3.异常毒性检查：(1).经急性毒性试验确定该注射剂的小鼠静脉注射后72小时的急性毒性数据（LD50或LD1）,有条件时，由不同实验室或不同种动物来源的LD50和LD1数据，如观察时间延长、以反应作指标、改变动物和途径必须另行试验。(2).确定异常毒性限值应至少小于LD50的1/4（1/41/8）或小于LD1的1/3（1/31/6），如给药剂量1ml/只、2g/kg、或临床日用量的100倍以上、仍未见毒性反应或死亡，可以0.8ml/20g作为检查限值。,4.降压物质检查:,(1).主要检查与药效无关
21、的降压物质,避免出现临床类过敏反应质量事故。方法可参考降压物质检查法(猫法)，观察降压反应.。如正常产品有降压作用，而降压作用与其功能主治有关则可不设该检查项。(2).确定注射剂降压物质检查限值确定前，应确定该注射剂正常产品对家猫无血压反应的最大剂量值(注射容量一般为0.21ml/kg)。,(3).以无血压反应的剂量值的1/21/4或人一次用药剂量1/55倍公斤剂量以作为降压物质检查剂量限值，给于限值剂量时（给药时间510秒）。检查时与标准品比较（组胺）(4).用对照品判断猫血压反应的灵敏度,降压对照品用0.1g/kg磷酸组织胺，静脉给药后血压反应值应大于1.67kPa(20mmHg)。本法灵
22、敏、精密，也可用组胺类物质检查法作为降压物质检查的代用方法,5.溶血与凝聚检查：(1).对注射剂原液和稀释液进行溶血与凝聚实验研究,指标观察可增加显微镜下红细胞计数比较和观察凝聚,确定无溶血和凝聚的最大浓度。(2).以无溶血和凝聚最大浓度的1/21/4作为限值浓度,观察溶血和血沉时间,经比色，并轻度振摇后显微镜下观察凝聚和红细胞计数,判断是否符合要求,6.刺激性检查：家兔血管刺激试验、肌肉刺激试验和眼刺激试验中，眼刺激试验比较适用，动物可反复使用，灵敏度较高、重现性较好。（方法有待规范化研究）可考虑小鼠腹腔注射扭体反应（包括通透性测定）法，用少量小动物，同时观察刺激性和疼痛，但需要进行适用性和方法学的考查，应积累数据。,7.细胞毒性试验,可参照医疗器械的相同检查方法（L929、V79、CHL等细胞，克隆法、染色法、琼脂法）需要进行适用性和方法学的考查，检查浓度应低于最高无细胞毒浓度。本方法灵敏、重现性好，既观察细胞毒，又与刺激性有一定联系，作为药品生物检定中动物试验的替代方法有现实和长远的实用价值，应考虑研究推广。,谢 谢本文内容为个人意见、欢迎批评指正,
