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1、实验11 植物的组织培养,植物组织培养过程,外植体,愈伤组织,根、芽或胚状体,植物体,脱分化,再分化,(高度分化),(未分化状态),一、基础知识,什么叫外植体?,离体的植物器官组织或细胞,可选什么做外植体？为什么?,植物几乎所有的组织（根、茎、叶、花药、子房、幼胚、形成层等组织）及细胞都可做外植体。幼嫩的细胞易脱分化。植物细胞都具有全能性。,胚状体是指什么?,排列疏松而无规则,高度液泡化的薄壁细胞，未分化状态。,愈伤组织是指什么?,植物组织培养技术的理论基础是什么？,植物细胞的全能性,所有生物细胞的全能性是否一致？,(1)植物细胞动物细胞；(2)受精卵生殖细胞体细胞；(3)不同种类植物细胞全能
2、性的表达程度不同；(4)同种植物不同基因型个体间细胞全能性的表达程度不同。,植物细胞表现出全能性的条件是什么？,离体提供一定的营养物质、激素其它适宜的外界条件,你认为培养基应有哪些成分?,2、植物组织培养的培养基,培养基的成分矿质元素 蔗糖 植物激素 维生素 有机添加物 琼脂等,MS培养基,MS培养基含有十几多种化合物，配制不方便也难称量准确，可将培养基中的各种成分扩大一定倍数分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。(母液配制见下表),Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的。能满足植物细胞的营养和生理需要，适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的
3、基本培养基。,MS培养基的配制:按比例分别取适量各种成分的母液，加入烧杯，称取适量的蔗糖和琼脂，加适量蒸馏水并加热使琼脂溶解，按照需要的浓度分别加入激素，用1mol/L NaOH和1mol/L HCl溶液调节pH至5.86.0。灭菌。,调控芽和根的发生细胞分裂素/生长素大致相等时，愈伤组织继续生长而不分化细胞分裂素/生长素比例高，有利芽的发生细胞分裂素/生长素比例低，有利根的发生,3、植物激素对植物组织培养的影响,实验中使用的生长素是人工合成的萘乙酸（NAA），细胞分裂素也是人工合成的苄基腺嘌呤（BA）,MS培养基+相对较多的细胞分裂素（BA）+相对较少的生长素（NAA）发芽培养基（长丛状苗）
4、。MS培养基+相对较多的生长素（NAA）生根培养基。,二、植物组织培养的基本过程,外植体的消毒：,流水冲洗20分钟,放入70酒精浸泡10min,在5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟,在另一5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟,无菌水冲洗23次，无菌吸水纸吸干,炼苗与移栽 炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开瓶锻炼3天（以培养基上开始长出菌为宜）。移栽：去净培养基，可先在灭过菌的草炭土或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。,1、影响植物组织培养的因素有哪些？植物的材料 培养基植物激素pH值外界因素（温度，光照，通气状况，材料处理等）,四、问题讨论,2.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同
5、的生长素和细胞分裂素浓度？,不同植物、不同组织的生根和生芽对生长素和细胞分裂素浓度的需求是不一样的。因此，不可贸然使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度。可以参考已发表文献上成熟的经验，也可自己探索。,3.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？,植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成激素在植物中没有相应的分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。,切取,接种,形成愈伤组织,愈伤组织在不同培养基上，分化形成芽或根，进而形成小苗(试管苗)。,形成试管苗,试管苗大规模培养,移栽,下面是有关食醋和泡菜制作的
6、实验。请回答：(1)食醋可用大米为原料经三步发酵来制作：第一步：大米经蒸熟、冷却后加入淀粉酶，将原料中的淀粉分解成(填中间产物)，然后进一步分解成葡萄糖，这一过程可用(填淀粉指示剂)来检测，因为该试剂遇淀粉呈蓝色，遇上述中间产物呈红色。第二步：用 菌将葡萄糖转化成乙醇，这一发酵过程中，发酵瓶不应完全密闭的主要原因是。第三步：用菌将乙醇转化成乙酸，这一过程 氧气。,2009浙江高考18选6试题,(2)在泡菜发酵过程中，会产生多种酸，其中主要的是，还有少量的亚硝酸。对亚硝酸盐的定量测定可以用 法，因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸的反应产物能与N-1-萘基乙二胺偶联成 色化合物。进行样品测定时，还要取等量
7、水进行同样的测定，其目的是。,2010年浙江高考生物：“生物技术实践”模块（10分）某同学进行苹果汁制作实验，工艺如下图所示。请回答：(1)图中用KMnO4溶液浸泡苹果的目的是。黑曲霉提取液中含有的 可水解果胶，从而使果汁澄清。固定化柱中填充的石英砂通过 方式将酶固定化，酶被固定后用蒸馏水洗涤固定化柱是为了除去。,(2)实验中，操作流程A和B的先后次序为。在苹果汁澄清过程中，应关闭的流速调节阀是。要测定从固定化柱流出的苹果汁中是否还有果胶，可取一定量的果汁与等量的 混合，如果出现 现象说明果胶还没有被完全水解。为使果胶完全水解，应将流速调。(3)实验后，将洗涤过的固定化柱在低温环境中保存若干天。该固定化柱仍可用于苹果汁制作实验，说明固定化酶可被 使用。,蛭石是云母类次生硅质矿物，为铝、镁、铁的含水硅酸盐。蛭石可向作物提供自身含有的K、Mg、Ca、Fe以及微量的Mn、Cu、Zn等元素。蛭石的吸水性、阳离子交换性及化学成分特性，使其起着保肥、保水、储水、透气和矿物肥料等多重作用。,草炭即泥炭，是沼泽发育过程中的产物。由沼泽植物的残体，在多水缺氧条件下，不能完全分解堆积而成。含有大量水分和未被彻底分解的植物残体、腐殖质以及一部分矿物质。有机质含量在30以上，质地松软易于散碎，具有可燃性和吸气性。,
