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1、第四节 动物细胞的培养条件和培养基,细胞体外培养基本条件:无菌营养充足,防止有害物质氧气,随时清除代谢有害物质良好的生存外环境及时分种,一、动物细胞的培养条件器材的清洗和消毒 器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 器材的消毒灭菌 物理消毒 化学消毒,水质:电阻值大于18M,去热原。pH:7.27.4 渗透压:290300mOsm/kg 温度:370.5 C 空气:氧的饱和质60%,氧分压 40.7kPa,二、动物细胞的培养基的种类和组成,分3类:天然培养基合成培养基无血清培养基,天然培养基 血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定合成培养基 DME、MEM、DMEM、HAM F12、RPMI16
2、40,氨基酸维生素糖类无机盐其它成分添加小牛血清：,添加小牛血清的作用提供生长因子和激素提供贴附因子和伸展因子提供结合蛋白提供必需脂肪酸和微量元素,无血清培养基提高重复性减少微生物污染供应充足稳定产品易纯化避免血清因素对细胞的毒性减少血清中蛋白对生物测定的干扰,无血清培养基加入添加剂生长因子和激素结合蛋白贴附因子和伸展因子有利细胞生长的因子和元素,第五节 动物细胞培养方法和操作方式,一、动物细胞大规模培养的方法依细胞种类:原代培养、传代培养依培养基:液体培养、固体培养,依培养器和方式:静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培养、中空纤维培养、固定床或流化床培养,从生产实际分为:悬浮培养 贴壁培养
3、 贴壁-悬浮培养,悬浮培养 让细胞自由的悬浮于培养基内 生长繁殖。贴壁培养 让细胞贴附在某种基质上生长 繁殖的培养方法。贴壁-悬浮培养,贴壁-悬浮培养 微载体培养 包埋和微囊培养 结团培养,二、动物细胞培养的操作方式,分批式操作半连续式操作灌流式操作,第六节 动物细胞生物反应器及其检测控制系统,一、动物细胞生物反应器的类型及 其基本结构搅拌式生物反应器气升式生物反应器中空纤维式生物反应器透析袋或膜式生物反应器固定床或流化床式生物反应器,搅拌式生物反应器,气升式生物反应器,中空纤维式生物反应器,平床式中空纤维式生物反应器,透析袋或膜式生物反应器,固定床或流化床式生物反应器,CellGen plu
4、s生物反应器,二、动物细胞生物反应器的检测控制系统,培养过程需检测的物化参数 直接在线检出 取样离线检测 检测后计算 主要参数的检测和控制方法,主要参数的检测和控制方法,温度 pH 在培养初期，控制进氧量 当细胞密度提高后控制 NaHCO3的量,溶氧 搅拌 进出液流量 其它,第七节 动物细胞制药的前景与展望,一、提高产量降低成本和改进质 量方面的研究二、转基因动物的研究三、组织工程的研究,一、提高产量、降低成本和改进质量方面的研究,为了提高产量,要提高细胞表达水平。为降低成本，须改进培养基配方。为改进产品质量，关键是糖基化质量。改进工艺，生产设备等,二、转基因动物的研究,自1982年Palimiter提出用转基因 动物来生产药用蛋白以来，发展迅 速。优点：产量高成本低质量与天然一 样。现还有不成熟之处。对动物和人的 健康的影响。,三、组织工程的研究,组织工程：通过对大量细胞的培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于 临床，或用培养的细胞进一步加工构 成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管、人造骨等并用于临床治疗。,
