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1、实验五 网织红细胞计数,一、试管法,【目的】掌握网织红细胞试管法的原理及操作方法。【原理】网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝色网织状或点粒状,可与完全成熟的红细胞区别。,【操作】1加染液2加血染色3制备涂片4观察5计数 6计算7报告方式,【注意事项】1染液质量直接影响网织红细胞计数的准确性。煌焦油蓝染液长期普遍应用,但溶解度低,易形成沉渣吸附于红细胞表面;新亚甲蓝对Ret染色力强且稳定,是WHO推荐使用的染液。试剂应定期配制,以免变质沉淀。瑞氏染液复染可使网织红细胞数值偏低。2染色时间不能过短,室温低时,可放置37 温箱或
2、适当延长染色时间。染液与血液的比例以11为宜。,3因网织红细胞在体外仍继续成熟,其数量随着保存时间的延长而递减,所以标本采集后应及时处理;标本染色后也应及时测定,因染料吸附可人为增高网织红细胞计数值。4选择红细胞分布均匀、网织红细胞着色好的部位计数。由于网织红细胞体积较大,故应兼顾血片边缘和尾部。,二、玻片法,【目的】掌握网织红细胞玻片法的原理及操作方法。【原理】网织红细胞胞质内残存少量核蛋白体和核糖核酸(RNA)等嗜碱性物质,经煌焦油蓝或新亚甲蓝等染液活体染色后呈蓝色网织状或点粒状,可与完全成熟的红细胞区别。,【操作】1加染液 2加血液 3制备涂片 4观察 5计数 6计算 7报告方式,【注意事项】同试管法。,