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1、实验四血糖的测定及激素对血糖浓度的影响,一 实验目的,掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。观察胰岛素，肾上腺素对血糖浓度的影响。了解动物实验的基本知识和兔耳缘静脉取血的方法。,二 原理,(2)激素对血糖浓度的影响 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体4氨基安替比林偶联的酚氧化，并与4氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。,二 原理,(2)显色原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体4氨基安替比林偶联的酚氧化，并
2、与4氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。,葡萄糖O2+H2O GOD 葡萄糖酸H2O2 4氨基安替比林酚H2O2 POD 红色醌类化合物+4H2O 葡萄糖越多，生成的醌类物质就越多，颜色就越深，通过所讲过的比色法，求出它的葡萄糖含量，即血糖浓度。（标准管法）,三 操作,1准备抗凝试管：首先放入试管一小勺抗凝剂（草酸钠）。2分组。称重：Kg，共有四只兔子，两只注射胰岛素，两只注射肾上腺素。兔子抓取方法：一手抓取颈部皮肤，另一只手托臀部，把它放在天平上称重。,操作,3.注射前取血:一般多以心脏取血的方式进行。,操作,4注射激素:抓住兔子，肚皮朝上，在腹部的皮下注射，注意要抓紧兔耳以免被咬住，方法是
3、掂起皮肤，刺入皮下有落空感，然后缓慢注入激素。首先注射胰岛素0.75 mg/kg（注意记录时间）然后注入肾上腺素0.5 mg/kg，并记录时间。5制备无蛋白血虑液:这是注射前的血液，在胰岛素等待一个小时，肾上腺素等待半个小时期间制备注射前无蛋白血虑液。方法：蛋白沉淀剂4ml全血0.2ml混匀，室温放置7分钟后，在漏斗上过滤，这时标记为注射前无蛋白血滤液。,操作,6注射后再次取血7再制备无蛋白血虑液:标记为注射后8比色：最后我们用标准管法来测定血糖浓度，按表操作：,混匀，置37水浴15分钟调波长为505nm，以空白管调零，分别读取A测A标,根据标准管法求测定管血糖浓度。,加入物（ml）测定管（注射前）测定管（注射后）标准管 空白管去蛋白血滤液 0.5 0.5 处理后的葡萄糖 0.5标准应用液 蛋白沉淀剂 0.5酶酚混合试剂 3 3 3 3,四 结果与计算,C测（mmol/l）=（A测/A标）5 mmol/L(5为葡萄糖标准应用液浓度值)通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。,五 分析,(1)对家兔而言血糖正常值：2.85.2 mmol/L，验证是否在此范围。(2)从实验结果来验证胰岛素降低血糖以及肾上腺素升高血糖的作用。,thankyou,
