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1、CML患者定量PCR国际标准化意义及展望,目 录,CML分子学监测标准化的背景及挑战分子学监测标准化的解决方法国内目前的PCR报告及国际标准化PCR报告范例,2,随着格列卫治疗时间的延长疾病负荷呈现下降趋势,检测MRD需要高度灵敏的检测技术,Radich JP.Blood.2009;114:3376-3381.,Dx,诊断；FISH,荧光原位杂交,分子学监测的优势,采用实时定量聚合酶链反应PCR（RQ-PCR）进行分子学反应的检测该检测与常规细胞遗传学反应检测相比更灵敏，超过3个对数级 对外周血样进行RQ-PCR检测，相对于骨髓样本检测更方便,Radich JP.Blood.2009;114:
2、3376-3381.,分子学反应对疾病预后的意义,分子学反应的程度、持续时间及早期获得与长期疗效的改善相关获得MMR与较高的EFS率、PFS率相关,1.Branford S,et al.Leukemia.2003;(17):2401-2409;2.Quintas-Cardama A,Blood.2009;113:6315-6321;3.Mller MC,et al.Blood.2008;112(11):129;4 Hughes TP,et al.Blood.2008;112(11):129-130;5.Press RD,et al.Blood.2006;107(11):4250-4256;6.
3、Iacobucci I,et al,Clin Cancer Res.2006:12,3037-3042:7.Cortes J,et al,Clin Cancer Res;2005;11:3425-3432;8.Paschka P,et al.Leukemia;2003;17:1687;9.Press RD,et al.Clin Cancer Res.2007;13:6136-6143;10.Kantarjian H,et al.Cancer.2008;112:837-845.,分子学是未来CML治疗的监测趋势分子学监测需要统一标准（国际标准，IS）：IRIS研究：3个参与实验室采用BCR作为对
4、照基因，将30例CML患者的平均BCR-ABL水平定义100%国际标准（IS）：将每一个实验室测定值与IRIS基线相比如减少3-log（0.1%），定义为获得MMR,CML分子学监测的标准化：背景,6,Hughes et al.,Blood.2006 Jul 1;108(1):28-37.,BCR-ABL的国际标准（IS）的定义,IRIS 基线,IRIS MMR；减少3-log,当地测定,转换因子/对照样本,国际标准,BCR-ABL转录本水平高,（其他对照基因？）,不同的引物/探针,7,已经制定 了一套国际标准（IS），来统一不同实验室获得的BCR-ABL值1,2,分子学监测的标准化,1.Br
5、anford S,et al.Blood.2008;112:3330-3338.2.Hughes T,et al.Blood.2006;108:28-37.,IRIS：国际随机干扰素和STI571研究,IRIS研究涉及实验室阿德莱德实验室曼海姆伦敦,其他实验室,国际标准（IS）,样本送检,比较不同实验室获得的分子学结果,获得转换因子,IS标准化,转换因子,8,未进行基线标准化严重影响患者疗效的正确评估,0.001%,0.1%,0.01%,1%,10%,100%,107,108,109,1010,1011,1012,BCR-ABL比率(IS),白血病细胞数,MMR,标准化基线,未获得MMR,2例
6、患者与各自的基线值相比均减少3-log，但是仅有患者A获得MMR,单个患者的基线,9,缺乏转换因子导致实验室无法准确报告患者的疗效,0.001%,0.1%,0.01%,1%,10%,100%,107,108,109,1010,1011,1012,BCR-ABL比率(IS),白血病细胞数,MMR,标准化基线,0.11%,x 0.83(cf),=0.09%ISMMR,0.1125%IS未获得MMR,x 1.25(cf),0.09%,没有CF，实验室无法报告患者是否获得了MMR,10,目 录,CML分子学监测标准化的背景及挑战分子学监测标准化的解决方法国内目前的PCR报告及国际标准化PCR报告范例,
7、11,如何正确定义分子学反应,ELN recommendations,Baccarani M,et al.J Clin Oncol.2009;27(35):6041-6051.,*国际量表的标准是：100%作为标准的基线;0.1%为比较基线下降3-log,12,BCR-ABL/BCR比率(%),100,自获得CCyR开始的时间（月）,CCR,3,6,9,12,15,澳大利亚,英国,美国,0.001,0.01,0.1,1,10,各个实验室的中位BCR-ABL值,采用标准化使各中心接近MMR水平的BCR-ABL结果可比（IRIS研究）,13,102,BCR-ABL/ABL,K562,10-2,10
8、-3,10-4,10-5,10-6,对照,1,2,9,14,16,21,22,19,实验室,101,100,10-1,10-2,10-3,10-4,对BCR-ABL/ABL K562 RNA样本采用标准化后结果可比较,14,参照方法与区域法在转化为IS前后的平均差异和95%一致性限度,采用目前分析系统中的验证方法来比较19个区域法转换前：平均差从低于7.7倍到高于8.1倍不等转换后：大多数区域法的平均差为1.2倍,Branford S.et al.,Blood 2008;112:3330-3338,1.0的差值表明无差异,15,国际标准化的意义,是测定CML患者残留疾病的常见标准，适用于科学文
9、献中或者在临床研究中作为治疗终点准确测定CML的关键分子学治疗目标测定的是残留疾病的绝对值，而不是相对值,16,中国PCR标准化展望,北京大学人民医院实验室,实验室 1,实验室3,实验室2,实验室4,实验室n,国际参照实验室,CF,17,目 录,CML分子学监测标准化的背景及挑战分子学监测标准化的解决方法国内目前的PCR报告及国际标准化PCR报告范例,18,国内某医院RQ-PCR报告,19,CML 国际标准化PCR报告1,来自不同实验室的实时定量聚合酶链式反应（RQ-PCR）报告的组织方式不同，可能包含不同的信息。一些实验室正致力于使用国际标准（IS）将检测和报告方法进行标准化，以便在不同实验
10、室之间进行结果比较。,无论报告的形式如何，也不管是否使用了国际标准，报告应提供以下信息,采样日期和送达实验室的日期,1,1,1,20,对样品的质量和来源进行评价,2,本例中使用的为标准化基线（IS）计算出的BCR-ABL/ABL的比值，用百分比表示；但对某些实验室来说，可能是同在那家实验室进行评估的未治疗患者的基线）原始数据转换为IS（CF 0.83 x 0.034=0.02822）,3,原始数据（即实际数量）,4,本次随访时患者BCR-ABL与对照基因的比值（BCR-ABL/ABL）,5,2,3,4,5,对照基因拷贝的数量说明数据是否可靠和可重复，并有助于确定样品质量是否合格,6,6,CML
11、 国际标准化PCR报告2,21,倍数改变：较最后一次分析：-0.1 较最低水平：N/AMMR：是,100,10,1,0.1,0.01,0.001,%BCR-ABL/ABL（IS）,MMR（基线下3个对数级）（0.10%IS）,3/15/2010,6/15/2010,9/15/2010,12/15/2010,3/15/2011,6/30/2011,9/30/2011,说明：该检测能发现转录水平大于1/100,000（0.001%）的BCR-ABL易位e13a2、e14a2、e1a2。主要断裂点（或者b2a2和b3a2 或者e13a2和e14a2）和次要断裂点（e1a2）也可相应地称为p210和p
12、190。所有结果应与相关的临床表现以及细胞遗传学、组织病理学和免疫表型进行综合考量。,7,8,8,9,解释这两个比例如何进行比较（本例是指距基线或最低水平的倍数改变；有些实验室使用的是距基线的对数级减少）,7,如何定义主要分子学缓解（MMR）以及患者是否已满足这一定义,8,此患者之前的检测结果显示出随时间的变化趋势,9,RQ-PCR检测的灵敏度（对于阴性结果）,10,10,11,11,结果解读：100%是一个标准化的基线，体现诊断时按照国际标准所观察到的平均值以评估日期为横坐标将PCR结果作图显示：该患者的BCR-ABL转录水平不断下降，目前已获MMR,CML 国际标准化PCR报告3,22,分子学是未来CML治疗的监测趋势，不同实验室测定值应该根据国际标准（IS）进行标准化BCR-ABL检测结果及RQ-PCR检测报告标准化有利于：1.不同研究中心之间进行直接比较 2.正确评估治疗疗效，做出最佳的治疗决策，确保患者最大获益 3.临床试验参与所必需的,总 结,23,
