基因工程的基本操作程序习题.docx

《基因工程的基本操作程序习题.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基因工程的基本操作程序习题.docx（12页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、基因工程的基本操作程序习题一、选择题（每小题3分，共39分）1o下列关于基因工程的叙述，错误的是（）A.目的基因和受体细胞均可来自动物、植物或者微生物B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达2。下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是（）。A. 一种限制性核酸内切醐只能识别一种特定的脱氧核甘酸序列B.限制性核酸内切酶的活性受温度影响C.限制性核酸内切酶能识别和切割RNAD.限制性核酸内切酶可从原核生物中提取3.如图是利用基因工程技术哺育转基因植物，生产

2、可食用疫苗的部份过程示意图，其中 Pst I、Sma I、ER I、Apal为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是（）。A.图示过程是基因工程的核心步骤B.表达载体构建时需要用到限制酶Sma IC.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来D .除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构4。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（）A.过程获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序B.将多个抗冻基因编码区挨次相连成能表达的新基因,不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白C.过程构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才干进行筛选D.应用DNA探针技术，

3、可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其彻底表 达图中挨次表示限制酶、DNA聚）5 .下图为DNA份子在不同酶的作用下所发生的变化, 合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是（A .B .C . OD .6 .下列关于基因工程的叙述，不正确的是（多选）（）A.基因工程时常以抗菌素抗性基因为目的基因B.细菌质粒是基因工程常用的运载体C.通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA,用另一种处理运载体DNAD.为哺育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体7 .天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B,而开蓝色花的 矮牵牛中存在序列已知的基因Bo现

4、用基因工程技术哺育蓝玫瑰,下列操作正确的是 （ ）Ao提取矮牵牛蓝色花的mRNA,经逆转录获得互补的DNA ,再扩增基因BB.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC.利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D0将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞8 .北极比目鱼中有抗冻基因,其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列 重复次数越多,抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关 叙述正确的是（）。A.过程获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序B.将多个抗冻基因编码区挨次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗 冻蛋白

5、C.过程构成的重组质粒缺乏标记基因,需要转入农杆菌才干进行筛选D.应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其彻底 表达9。将ada（腺甘酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导人大肠杆菌并成功表达腺甘酸脱氨 酶。下列叙述错误的是（）A .每一个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒B .每一个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C.每一个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaD .每一个插入的ada至少表达一个腺苜酸脱氨酶份子10 .下列叙述符合基因工程概念的是（）.A . B淋巴细胞与肿瘤细胞融合,杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因B.将人的干扰素基因重组到质粒后导

6、入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株C.用紫外线照射青霉菌,使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株D .自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上11 .在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（）.A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B,用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C.将重组DNA份子导入烟草原生质体D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞12 .下列关于转基因植物的叙述，正确的是（）。A.转入到油菜的抗除草剂基因,可能通过花粉传入环境中B.转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加C .动物的生长激素基因

7、转入植物后不能表达D .如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题13 .下列关于基因工程的叙述，错误的是（）。A.目的基因和受体细胞均可来自动、植物或者微生物B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具能C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达二、填空题(共51分)1。科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA份子重组，并且在 大肠杆菌体内表达成功。请根据图回答问题：(1)此图表示的是采取 合成基因的方法获取基因的过程.(2)图中DNA是以为模板，形成单链DNA,在酶的作用下合成

8、双链DNA,从而获得了所需要的基因。(3)图中代表 DNA,含基因o(4)图中表示 。2。下图表示利用基因工程哺育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题。(1)若限制能I的识别序列和切点是一1GATC-,限制识别序列和切点是 GJGATCC,那末在过程中,应用限制酶 切割质粒，用限制酶 切割抗虫基因。(2)将通过过程得到的大肠杆菌涂布在含有 的培养基上,若能够生长说明已导入了普通质粒或者重组质粒,反之则说明没有导入.(3)要确定抗虫基因导入后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，则在个 体水平上的鉴定过程可简述为：.经筛选分析,该植株细胞中含有一个携带抗 虫基因的DNA片段，因此可以把它

9、看做是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的Fl代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的。(4)过程所用的现代生物技术称为,从遗传学角度来看，据细胞通过过 程，能形成棉植株的根本原因是细胞具有 O3. 干扰素是病毒侵入人体后由淋巴细胞产生的一种免疫活性物质,它具有广谱抗病毒的 作用。利用现代生物技术生产干扰素的流程如下：(1)过程产生的物质A是, CDNA文库(大于/小于)人的基因组文库。(2)过程用到的工具酷是 J过程需先用 处理受体细胞，过程通常采用 技术。(3)过程和的关键技术分别是、o(4)基因工程的核心步骤是图中的(填标号)o4. (2022安综31)家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将

10、人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养,可提取干扰素用于制药。(1)进行转基因操作前，需用 酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自CDNA文库的干扰素基因片段 正确插入表达载体的 和 之间。(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成份应包含：扩增缓冲液(含Mg2,)、水、4种脱氧核糖核甘酸、模板DNA、O(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的 中空薄壁小玻璃珠放入反应器中,这样可以，增加培养的细胞数量，也有利 于空气交换。5. (2022天津理综，7 1)下图是哺育

11、表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线. 图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨玉青霉素抗性基因，BamH I、HindIIK Sma I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答问题.(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体,需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 (填字母代 号)。A .启动子B . tetRC .复制原点D . ampR(3)过程可采用的操作方法是 (填字母代号).A.农杆菌转化B.大肠杆菌转化C.显微注射D.细胞融合(4)过程采用的生物技术是.(5)对

12、早期胚胎进行切割,经过程可获得多个新个体.这利用了细胞的 性.(6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 (填字母代号)技术。A.核酸份子杂交B.基因序列分析C.抗原一抗体杂交D . PCR6. (2022上海卷)人体细胞内含有抑制癌症发生的P53基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测。(1)目的基因的获取方法通常包括 和 O(2)上图表示从正常人和患者体内获取的P53基因的部份区域。与正常人相比，患者在 该区域的碱基会发生改变，在上图中用方框圈出发生改变的碱基对,这种变异被称为(3)已知限制酶E识别序列为CCGG,若用限制酶E分别彻底切割正常人和患者的 P53基因部份区域(见上图)，那末正

13、常人的会被切成 个片段，而患者的则被切割成长度为对碱基和 对碱基的两种片段。(4)如果某人的P基因部份区域经限制酶E彻底切割后，共浮现170、220、290和460个碱基对的四种片段,那末该人的基因型是(以P+表示正常基因,P表示 异常基因)。7. (2022福建卷;转基因抗病香蕉的哺育过程如图所示。质粒上有Pst 1、Sma I、EcoR I、APal等四种限制酶切割位点.请回答下列问题。(1)构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶,对 进行切割。(2)培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长,欲利用该培养基筛选已导入抗 病基因的香蕉细胞,应使基因表达载体A中含有,作为标记基因.(

14、3)香蕉组织细胞具有,因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香 蕉组织细胞哺育成植株。图中、挨次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的8. (2022高考全国新课标卷40)根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA份子后产生的片段，其末端类型有 和.(2)质粒运载体用EcoR I切割后产生的片段如下：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用ECORl切割外,还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 O(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是i产物是i若要在体外获得大量反转录产

15、物，常采用 技术。(5)基因工程中除质粒外，和 也可作为运载体.(6)若用重组质粒转化大肠杆菌,普通情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细 胞,原因是。9。(2022福建高考32)现代生物科技专题.肺细胞中的Iet7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强,会引起肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：(1 )进行过程时,需用 酶切开载体以插入Iet7基因。载体应用RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为。(2 )进行过程时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养.

16、研究发现，Iet7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细 胞提取 进行份子杂交，以直接检测Iet7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 (RASmRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。10. (2022天津高考7)生物份子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质一DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。据图回答：(1)过程酶作用的部位是 键，此过程只发生在非结合区DNA,过程酶作用的部位是曜。(2)、两过程利用了酶的 特性.(3)若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，需要过程的测序结果与 酶的识别序列进行对照，以确定选用何种酶。(

17、4)如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合，则其识别、结合DNA序列位基因的(5)以下研究利用了生物份子间的特异性结合的有(多选) A.分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提取rRNAB.用无水乙醉处理菠菜叶片,提取叶绿体基粒膜上的光合色素C.通过份子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位D.将抑制成熟基因导入番茄,其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终 止后者翻译,延迟果实成熟。(2022江苏高考32)图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部份碱基序列。现有Mspk BamHL Mbok Sma I4种限制性核酸内切酶，它们识

18、别的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GiGATCC、 1GATC、CCCiGGG。请回答下列问题(1)图1的一条脱氧核甘酸链中相邻两个碱基之间挨次由连接.(2)若用限制酶Smal彻底切割图1中DNA片段，产生的末端是末端，其产物长 度为O(3)若图1中虚线方框内的碱基对被TA碱基对替换，那末基因D就突变为基因d 从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Smal彻底切割，产物中共 有一种不同长度的DNA片段。(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒，那 么应选用的限制酶是.在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，普通需要用添加 的培养基进行

19、培养。经检测，部份含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最可能的原因是 。答案1【解析】基因工程中有3种工具,但工具酶惟独2种。工具酶本质为蛋白质,载体 本质为小型DNA份子，但不一定是环状。标记基因的作用一筛选、检测目的基因是否导 入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因,表达产物为带颜色物质等.受体细胞中 常用植物受精卵或者体细胞(经组织培养)、动物受精卵(普通不用体细胞)、微生物一大肠 杆菌、酵母菌等。普通不用支原体,原因是它营寄生生活；一定能用哺乳动物成熟红细胞, 原因是它无细胞核，不能合成蛋白质.【答案】D2。解析考查基因工程中工具酶的有关知识。限制性核酸内切酶的

20、化学成份是蛋白质， 它的活性受到温度和PH的影响；限制性核酸内切酶的特点是能识别双链DNA中特定的核 甘酸序列，可在特定的位点进行切割，但不能识别和切割RNA；限制性核酸内切酶主要是 从原核生物体内分离出来的。答案C解析图示过程为基因表达载体的构建过程,是基因工程中的核心步骤.构建过程中需要 将目的基因完整切割下来，此时要用到限制酶Pst I、ER I。抗卡那霉素基因是标记基因， 目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞。基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子 和标记基因等。答案B4。【解析】过程中通过逆转录法获得的目的基因,可用于基因工程，但该目的基因中 不存在内含子和非编码序列，因此不能用

21、于比目鱼的基因组测序;将多个抗冻基因编码区相 连形成的能表达的新基因可能再也不是抗冻基因;利用农杆菌的目的是将重组质粒导入受体 细胞,而不是筛选重组质粒；应用DNA探针技术,可以检测受体细胞中是否成功导入了目的基 因，但不能检测目的基因是否彻底表达。【答案】B5 . C 限制酶可在特定位点对DNA份子进行切割；DNA聚合酶在DNA份子复制时 将脱氧核甘酸连接成脱氧核甘酸链；DNA连接酶可将限制酶切开的磷酸二酯键连接在一起； 解旋酶的作用是将DNA双链解开螺旋，为复制或者转录提供模板.6 . ACD 基因工程时常以抗菌素抗性基因为标记基因;质粒是基因工程常用的运载体： 通常用同一种限制酶切割目的

22、基因和运载体，以获得相同的黏性末端;受体细胞可以是受精 卵，也可以是体细胞。D .为哺育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受 精卵为受体7 .【答案】A【解析】提取矮牵牛蓝色花的mRNA,逆转录得到DNA,然后扩增，可获得大量的基 因B,A正确；从基因文库中获取目的基因，只要根据目的基因的相关信息和基因文库中的 信息进行筛选对照即可，不需要用限制酶进行切割,B错误；目的基因与质粒的连接需要用 DNA连接酶，而不是DNA聚合能，C错误;目的基因需要和运载体连接后形成重组质粒再 导入，而且应该用农杆菌进行感染,而不是大肠杆菌，D错误。8 .解析将多个抗冻基因编码区相连成能表达的新基因

23、,合成的蛋白质为新的蛋白质,不 能得到抗冻性增强的抗冻蛋白,故选项B正确；过程是利用反转录法合成廿的基因，由于没 有非编码区和编码区中的内含子，不能用于比目鱼基因组测序;用作载体的质粒，必须具有 标记基因才干便于检测和筛选；应用DNA探针技术，可检测转基因抗冻番茄中目的基因的 存在和转录，但不能检测是否成功表达,故选项A、C、D错误。答案B9。【解析】受体大肠杆菌成功表达腺甘酸脱氨酶，说明每一个大肠杆菌细胞至少含有 个重组质粒,且每一个ada至少指导合成一个腺昔酸脱氨酶份子。重组质粒的形成需先用限 制 性核酸内切酶切割目的基因和质粒形成相同的黏性末端，再在DNA连接醐的作用下连 接起来，连接起

24、来的序列中会含有限制性核酸内切酶的识别位点.不同的限制性核酸内切 酶识别位点不同,不是每一个限制性核酸内切酶的识别位点都能插入ada, C项错误。【答案】C10.解析基因工程是在生物体外，通过对DNA份子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物 的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内 表达,产生出人类所需要的基因产物.所以B为基因工程，而A为动物细胞工程，C为诱变育 种，D无人为因素不属于基因工程.答案B11解析 限制性核酸内切酷用于提取目的基因和切割载体,烟草花叶病毒的遗传物质 是RNA,不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误;DNA连接酶可以连接具有相同黏

25、性末端 的目的基因和载体，B项正确;受体细胞可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原 生质体，C项正确;目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除 草剂的能力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，D项正确.答案A12o解析抗除草剂基因导入到油菜的染色体后则可以通过花粉传入环境中；转抗虫基 因的植物可杀死无抗性昆虫，对昆虫的抗性具有选择作用，所以会导致昆虫群体抗性基因频 率增加；转基因技术打破了繁殖隔离，动物的生长激素基因转入植物后可以表达；来源于自 然界的目的基因导入植物体后，可能破坏原有的基因结构,具有不确定性，外源基因也可能 通过花粉传播,使其他植物成为“超

26、级植物等，所以转基因技术存在着安全性问题.答案A13.解析 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞，但由于它和目的基因是相 互独立的，并不能促进目的基因的表达。答案D二、填空题1 .答案：（1）人工 胰岛素原目的（2）胰岛素原信使RNA 逆转录（3）重组胰岛素 原（4）将重组DNA份子导入受体细胞解析:本题是对基因工程操作程序的考查。操作时.，首先要获取目的基因,然后让目的基 因与载体结合构建成重组DNA份子，再通过一定方法把重组DNA份子导入受体细胞使其 扩增和表达2 .解析本题极易出错的部份有：在第（1）小题中没有看清目的基因插入的位置，从而不 能确定用限制酶【还是来切割质粒还是切割

27、抗虫基因。第（3）小题检测抗虫性状在个体 水平上是否表达，应该让害虫吞食转基因棉花的叶片，观察害虫的存活情况，这个地方也有 出错的,主要没有看清是在哪个水平上进行检测的。在切割质粒时应遵循一个原则：不能同时将两个标记基因切开，至少保留一个，所以只 能用陶切割，而从目的基因两侧碱基序列可知，只能用酶I才得到含目的基因的DNA片 段。如果导入了重组质粒，此时重组质粒中四环素抗性基因能正常表达，而氨茶青霉素抗性 基因已被破坏,所以涂布在含有四环素的培养基上，能够生长的话，说明导入了重组质粒（普 通质粒）。如果把携带一个抗虫基因的DNA片段看做杂合子，可以认为是Aa,自交产生的 Fl中仍具有抗虫特性的

28、植株占总数的比例为错误！。把一个细胞培养成一个植株的技术称为 植物组织培养.答案（1） I （2）四环素（3）让害虫吞食转基因棉花的叶片，观察害虫的存活 情况，以确定其是否具有抗虫性状 错误！ （4）植物组织培养 发育成完整个体的全部遗 传物质解析（1） CDNA来自mRNA的逆转录或者根据mRNA的碱基序列人工合成，CDNA 文库小于基因组文库.（2）构建基因表达载体用到限制酶和DNA连接酶。将目的基因导入 大肠杆菌须用Ca2-处理受体细胞;导入动物细胞用显微注射法.（3）过程的关键技术是 胚胎移植，过程的关键技术是细胞核移植.（4）基因工程的核心步骤是基因表达载体的 构建，即。3 o解析

29、本题综合考查基因工程、细胞工程和PCR技术,意在考查考生对基础知识的 理解。胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理可以将动物组织分解成单个细胞;基因表达载体包括启 动子、目的基因、终止子、标记基因等，其中启动子和终止子有利于目的基因的表达，标 记基因有利于目的基因的检测；PCR技术中需要原料（4种脱氧核甘酸）、缓冲液、模板 DNA,引物和耐热DNA聚合酹等；在生物反应器中放入多孔的中空薄壁小玻璃珠的目的: 一方面有利于细胞的贴壁生长，避免接触抑制；另一方面有利于气体交换。答案（1）胰蛋白（或者胶原蛋白）（2）启动子 终止子（3）对干扰素基因特异的DNA引物对TaqDNA聚合酶（4）扩大细胞贴壁生长的附 着

30、面积4。解析 （1）由图示可知:需用Hindlll和BamH 1限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白 基因，因酶切后tetR四环素抗性基因结构被破坏而ampR氨茉青霉素抗性基因结构完好,故用 含氨苇青霉素的选择培养基可筛选含有重组载体的大肠杆菌。（2）启动子是一段特殊的DNA 序列,是RNA聚合酶识别和结合的位点，可调控基因的特异性表达.（3）过程表示把重组 载体导入受体细胞的过程,当受体细胞为动物细胞时，常采用显微注射法。（4）过程表示把 早期胚胎移植到代孕母牛子宫的过程，属于胚胎移植技术。（5）经过程得到新个体是细 胞全能性的体现。（6）人乳铁蛋白基因是否成功表达，关键看是否有其表达产物即人乳铁

31、蛋 白，可用抗原一抗体杂交法检测该蛋白是否存在.答案 Hincnn和BamH I氨茉青霉素（2）A （3）C（4）胚胎移植技术（5）全能 （6） C5.解析本题主要考查基因工程相关知识。（1）目的基因的获取方法有直接分离和化学方法人工合成两种；（2）子细对照正常人与患 者的基因序列可知是CG碱基对变为了TA碱基对,这种变化属于基因突变;（3）正常人P53基 因有两个限制前E的识别序列，彻底切割后可产生三个片段,患者P53基因中有一个限制酶E 的识别序列发生突变，且突变点位于识别位点内，这样患者就惟独一个限制酶E的识别序 列，切割后产生两个片段，分别为290+170=460对碱基,220对碱基；

32、(4)正常人的Ps3基 因经限制酶E彻底切割后产生三个片段，290对碱基、170对碱基和220对碱基,患者产生两 个片段460对碱基和220对碱基，则该人的基因型应为P-P-.答案(1)从细胞中分离通过化学方法人工合成(2)见下图基因碱基对的替换(基因突变)(3) 3 460 220 (4) PP-解析 本题考查基因工程的有关知识。(1)从图可看出，惟独Pst I、EcoR I两种酹 能保持抗病基因结构的完整性,所以构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶Pst I、 EcoR I两种酶，对抗病基因的DNA和质粒进行切割。(2)卡那霉素能抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗

33、病基因 的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有抗卡那霉素基因，以此作为标记基因。(3)香蕉组织细胞具有全能性，因此,可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织 细胞哺育成植株。图中、挨次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的脱分化和再分化.答案 Pst I、EcoR I含抗病基因的DNA、质粒(2)抗卡那霉素基因(3)全能性脱分化、再分化6。【答案】(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoR I切割产生的相同E COli T4(4) mRNA (RNA) cDNA (DNA) PCR(5)噬菌体动植物病毒等(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱【解析】(1)当限制酶

34、在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时， 产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的则是平末端.(2)为使运载体与目的基因相连，不同的限制酶应切割出相同的黏性末端，它们必须 要能识别相同的核甘酸序列，并且使每条链中相同的两个核甘酸之间的磷酸二酯键断开.(5) DNA连接酶，根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类:一类是从大肠杆菌中分 离得到的，称为E8iDNA连接酶;另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4DNA连接 酶。(4)反转录是以RNA为模版来合成DNA的过程.可以在体外短期内大量扩增DNA的 技术叫PCR (多聚酶链式反应)(5)基因工程中除质

35、粒外，还有噬菌体的衍生物、动植物病毒等.(6)大肠杆菌细胞外有细胞壁和细胞膜，能阻挠其他物质的进入，只能通过Ca2+处理 细胞,使细胞处于能吸收周围环境中DNA份子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。7o【答案】(10分)(1)限制性核酸内切酶(或者限制) 启动子(2)胰蛋白(6) RNA RAS 蛋白【解析】(1)过程表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行 切割以便于目的基因的插入(限制性核酸内切酶,简称限制酶，写其他的不得分)；启动子是 一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶结合和识别的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可 驱动转录过程.(2)过程表示动物细胞培养，培养过程中

36、浮现接触抑制后可以用胰蛋白前处理，使 之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养。(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录,可用份子杂交技术来进行,从细胞中提取 mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息 “肺组织细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达就增强，引起肺癌”导入Iet7基因后， 肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白质含量减少进而导致 癌细胞受抑制。8【答案】(1)磷酸二酯键，肽键专一(3)限制性核酸内切酶(4)启动子(5)ACD【解析】(I)DNA晦作用的部位是DNA的磷酸二酯键,蛋白晦作用的

37、部位是肽键。(2)过程利用了各种酶催化一种或者一类化学反应的特性,即专一性.(7) DNA要构建重组质粒，需要用限制性核酸内切酶切割，再与质粒重组.(4)RNA聚合酶识别和结合在基因的启动子上，驱动基因转录。(5)蛋白酶能特异性的酶解蛋白质，份子杂交手段也是利用各物质份子结合的特异性， 抑制成熟基因转录出的mRNA与催化成熟酶基因的mRNA碱基互补结合，也具有特异性, 光和色素易溶于有机溶剂，与酒精并非特异性的溶解，所以选ACDo9o【答案】(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖平 537bp、790bp . 661 bp (3) 4(8) BamH I 抗生素B同种限制酶切割形成的末端相同,部份目的

38、基因D与质粒反向链接【解析】(1) DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖一磷酸-脱氧核糖”连接.(2) Smal识别的序列为GGGCCC,切割后会产生平末端;图1所示的DNA份子中含有 两个Sma I的识别位点，第一个识别位点在左端534bp序列向右三个碱基对的位置；第二个 识别位点在右端658bp序列向左三个碱基对的位置，从这两个位点切割后产生的DNA片段 长度分别为534+3, 796-3-3, 658+3,即得到的DNA片段长度分别为537bp, 79ObP和661 bp.(3)在杂合子体内含有基因D和基因d,基因D的序列中含有两个识别位点，经过Smal 彻底切割会产生537bp.

39、 79ObP和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识 别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段,综上，杂合子中分离到该基因 的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段。(4)能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamHl和识别 序列为GATC的MboL若使用MbOl会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B 抗性基因，所以要用BamHl来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基 因,便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌。因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目 的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补,可能浮现目的基因反向连接在运 载体上的情况，导致基因D不能正确表达。