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1、实验一 可见分光光度计性能检查,一、实验目的二、实验原理三、试剂与器材四、仪器的使用方法五、实验步骤,主要内容,1、掌握T6新悦-可见分光光度计主要性能的检定方 法和仪器的使用。2、熟悉仪器的主要性能和技术指标。3、了解仪器的基本结构。,一、实验目的,紫外可见分光光度法（ultraviolet-visible spectro-photometry,UVS）是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法。Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。A=b c,可见光区400760nm紫外光区200400nm,二、实验原理,结构示意图：
2、光源单色器样品池检测器信号显示装置一、主要部件（一）光源：可见分光光度计钨灯=320-2500nm 紫外分光光度计氢灯，氘灯=150-400nm（二）单色器：将光源连续光谱按波长顺序色散并选出所需单 色光。（三）吸收池：普通玻璃和石英玻璃。（四）检测器：光信号变成电信号（光电管、光电倍增管）。（五）信号显示装置：将输出信号经处理转换成透光度或吸光 度再显示或记录下来。,二、实验原理,1、试剂：氯化钴溶液2、6、10mg/ml。2、器材：T6新悦可见分光光度计 玻璃吸收池；100ml烧杯；镜头纸；滤纸；一次性吸管,三、试剂与器材,四、仪器的使用方法1、开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成。
3、预热1h。2、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入吸光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按MODE键进行切换。,3、设置测量波长：在测量界面下，按GOTO 键 在数字键盘上键入波长数值 按ENTER键4、设置吸收池模式和个数：按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。（1）按上翻键，设置吸收池类型：1CELL固定池，只有一个吸收池可用于测量。5CELL五联池，最多有五个吸收池可用于测量。8CELL八联池，最多有八个吸收池可用于测量。,（2）按下翻键，设置吸收池个数。例如：如果实验需要6个吸收池进行测量，那么吸收池类型应设置为8CELL，吸收池个数设为6。注意：1、设定
4、的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳。2、设置吸收池个数的正确操作是按下翻键进行选择，而非在数字键盘上键入。如键入2，钨灯将被关掉。,5、自动校零：按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面。在1号吸收池中放入空白溶液，按ZERO键进行空白校正。注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正。,6、测量样品：从2号吸收池开始，依次放入样品，按START键，仪器测量全部样品，然后显示出最
5、后一个样品的吸光度值。读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值。7、打印结果：在已连接打印机的情况下，按PRINT键打印数据。8、结束测量：按SHIFT/RETURN键，从读数界面返回测量界面，关闭电源。注意：关电源后，系统中存储的数据结果将丢失。,测量全部完成后，切换到测量界面，然后关闭仪器电源。用蒸馏水清洗吸收池，倒扣于滤纸上晾干；如果吸收池污染严重，冲洗后置于7080的酒精中浸泡。将用过的仪器、试剂等放回原位。,五、实验步骤1、仪器外观检查2、稳定度检测3、波长准确度（校正）与波长重复性4、线性误差检查5、透光度重现性检定6、杂散辐射率7、吸收池的配套性检定,1、仪器外观检查,2、稳定度检测
6、 零点稳定度：波长设置500nm，将吸收池推杆推 至最顶端，按“zero”键，调节吸光度为0，观察3min，记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度。技术指标：0.002/3min,四、实验步骤,3、波长准确度（校正）与波长重复性：（1）波长准确度（校正）系统自动检测内置镨钕玻璃片808.0nm的特征波长，时间大约1min。检测完成后，系统显示实测波长值。=示-808 1nm时，按enter键校正，=示-8081nm时，不需波长校正，按键，再按enter，系统返回系统应用界面。,（2）波长重现性检定 以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶液(6mg/ml)在510nm处的吸光度（英文缩写为A或AB
7、S）。逐一作3次测量，记录吸光度值。代入公式计算波长重复性,并绘制波长吸收曲线。,结果分析：重现性应小于0.4nm。,注意：吸收池不得有气泡。倒溶液至三分之二处即可。,4、线性误差检查：测量界面。（1）设置波长键：=510nm（2）设置吸收池个数：（3）空白校正：（4）测量：将2、6、10mg/ml的CoCl2溶液分别倒入2、3、4号吸收池中，按START键开始测量，记录吸光度读数。测量三次。,计算并分析结果：线性误差计算公式：,结果分析：,5、透光度重现性检定 以蒸馏水为参比，测定6mg/mlCoCl2510nm处的透光度（英文缩写T），分别测定3次，记录读数。,结果分析：重现性应小于0.1
8、5。,6、杂散辐射率 以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2在 360nm处的透光度，即为仪器在此波长处的杂散辐射率。技术指标：杂散辐射率0.1,7、吸收池的配套性检定检查方法：700nm分别测定蒸馏水透光度，空气调零，其中最大读数与最小读数之差，应不超过规定值。0.5%。,注意事项,1、吸收池为光学玻璃制造，其透光面不能与硬物接 触，也不得用手触摸，池外溶液只能用擦镜纸将 毛面摺里面，沾去溶液或顺一个方向轻拭，不允 许用力来回擦试，以免有灰尘磨损透光面。测定 时透光面上不得留有水珠或纤维。2、不同型号的仪器其技术指标要求会有一定的差别。,预习实验二 荧光分析法测定尿中维生素B2的含量预习重点：1、方法原理 2、标准曲线,
