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1、动物细胞培养在科研、生产中的应用,一、动物细胞培养在科研中的应用,POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7细胞的生长及周期的影响,Trizol提取MCF-7细胞总RNA 反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 细胞生长曲线实验血清依赖性实验 单细胞克隆形成实验 软琼脂集落形成实验 胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞 流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析Western blot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达,论文题目：中心体蛋白centrin在人胚胃上皮细胞GES1 的细胞增殖和癌化中的作用,答辩人：陈 娴指导导师：王
2、永潮 教授,实验方法,构建反义重组质粒转染细胞并筛选细胞株半定量RT-PCR（semi RT-PCR）细胞生长活性测定 细胞生长曲线测定 血清依赖性实验 平板集落形成率测定 软琼脂集落形成比较流式细胞光度术（FCM）分析细胞周期细胞间接免疫荧光实验（IEF）免疫印迹实验（western blot）,细胞转染及稳定表达细胞株的筛选,GES1细胞G418筛选浓度的选择（300ug/ml）稳定表达细胞株的筛选 GAC1 GAC3,细胞生长曲线的测定,返回,血清依赖性试验结果,平板集落形成率的比较,平板集落形成率的比较,返回,软琼脂集落形成比较,GES1 BG823 GAC1 GAC3 返回,GES1
3、表现的正常细胞分裂周期,GAC3分裂期细胞,返回,一个新的细胞周期相关蛋白ICF45基因克隆及其功能研究Clone and characterization of a novel cytoplasm protein ICF45,involved in cell cycle regulation,答辩人：郭德良导 师：何大澄 教授,ICF45 Research,Full-length cDNA 克隆及其生物信息学分析 ICF45 mRNA 在不同组织中表达分析 ICF45蛋白表达分析 ICF45 亚细胞定位研究 利用RNAi 研究ICF45细胞内功能,第五部分 利用RNAi 研究ICF45 细胞
4、内功能,1.稳定沉默ICF45基因表达的克隆细胞株建立 2 细胞形态和核变化 观察3.细胞生长和增殖能力 4.细胞周期和DNA含量变化 5 细胞凋亡率6 p53表达7.Centrosome and spindle 8.微丝形态变化,二、动物细胞培养在生产中的应用,1999年遗传免疫室工作年会报告题目,序号 题 目 时间（分）报告人,表达PreS1的CHO细胞中试培养工艺研究 10 杨芙蓉含PreS1的新型乙肝疫苗中试纯化工艺的研究 10 李 军含乙肝表面抗原S2SS1基因的质粒构建 10 王秀平表达PreS1的CHO细胞致瘤性实验及新细胞系筛选 10 阮薇琴 研究生开题报告1 优势密码子对病毒
5、基因表达调控影响的研究 10 王世峰2 CHO细胞优势密码子与外源基因表达关系的研究 10 王志云 全室工作总结 10 阮 力,小鼠金属硫蛋白基因-I 在CHO细胞中稳定表达及其在医疗方面的应用 殷慎敏 李令媛 茹炳根(北京大学生命科学学院生物化学及分子生物学系，北京，100871),摘要：将小鼠的MT-I基因插入pSV2-dhfr质粒的EcoRI位点,构建了具有SV40和MT双启动子并正向插入MT-I基因的表达载体。用改良的磷酸钙/DNA沉淀法将表达载体导入CHO-dhfr-细胞内，用不含次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)的选择培养基筛选出稳定表达MT阳性克隆D-22，经检测106细胞的 MT
6、表达量约为1.8 g，D-22细胞对Cd2+浓度抗性较之CHO-dhfr-细胞高 14倍。为了研究金属硫蛋白对正常细胞所具有的保护作用，将不同浓度的顺铂分别处理无 MT表达的CHO-dhfr-细胞和有MT表达的D-22细胞。实验发现顺铂对D-22细胞和CHO-dhfr 细胞 50%生长抑制浓度(IC50)分别是0.145 mol/L 和0.04 mol/L。上述研究表明MT 对正常细胞有一定的保护作用，因而通过诱导正常细胞提高MT的表达量，同时使用MT阻断剂阻断肿瘤组织的MT合成，这样可能会为治疗某些顽固肿瘤开辟一条新途径。关键词：金属硫蛋白(MT)；CHO-dhfr-细胞；细胞转染；基因表达
7、；顺铂,H,次黄嘌呤;A,氨基喋呤;T,胸腺嘧啶,A,(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),胸腺嘧啶激酶(TK)(Thymidine kinase),外源性途径(旁路途径),实用生物技术丛书基因克隆技术在制药中的应用,第十四章生物药物基因的克隆及其在动物细胞中表达第一节红细胞生成素的克隆及其在CHO-dhfr-细胞中的表达第二节bFGF基因的克隆及在成纤维和成骨细胞中的表达第三节tPA突变体基因的克隆及其在CHO细胞中的表达第四节以细胞因子重组质粒为佐剂的乙肝DNA疫苗的克隆及在COS-7细胞表达第五节乙型肝炎表面抗原preS2SDNA疫苗的克隆及其在COS-1细胞表达第六节融合HBcAg基因和IL-2基因DNA疫苗的克隆及其在COS-7细胞表达第十五章基因工程菌和工程细胞的培养与发酵第一节基因工程细菌的培养与发酵第二节基因工程酵母的培养与发酵第三节工程细胞的培养与发酵,
