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1、动物细胞融合与单克隆抗体,授课教师：杨丽娜,一、动物细胞融合,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,动物细胞融合（也称细胞杂交）是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,杂交细胞 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。,细胞A,细胞B,杂交细胞,灭活的病毒,物理法化学法,仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒,电激,聚乙二醇（PEG）,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞模上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。,灭活病毒诱导细胞融 合的原理,灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能
2、力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。,动物细胞融合,细胞融合的应用 已成为研究细胞遗传，细胞免疫，肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。,二、单克隆抗体,什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,B淋巴细胞产生抗体。,长期以来，人们为了获得抗体，采用的方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后，从动物的血清中分离所需抗体。,缺点：产量低，纯度低，而且制备的抗体特异性差。,B淋巴细胞与抗体,B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。动物体内的B淋巴细胞可以产生百万
3、种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。,1 仅用细胞培养技术可行吗？,我们所学的哪种细胞是可以无 限增殖的？,有什么方法能使B细胞产生抗体 的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,如何大量生产单克隆抗体？,利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,两次筛选的目的 第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞，骨髓瘤细胞以及同类型融合的细胞通过选择培养基
4、淘汰，筛选出B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合的细胞。第二次筛选是将产生特定抗体的杂交瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞很多种，所以需筛选出特定抗体的杂交瘤细胞。,单克隆抗体,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、灵敏度高,动物的胚胎移植,解决某些妊娠时间长、每胎产子数量少的优良种畜的繁殖速度问题。,胚胎移植技术,试管动物（婴儿）培养过程,受精卵,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,制备单克隆抗体
5、,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答：,乙,甲,a,b,c,d,e,f,(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，a和b是通过_分裂形成的，其DNA含量是体细胞的 _；c肯定是_ 细胞，乙的遗传性状与提供 _的绵羊 一致.,减数,一半,体,细胞核,乙,甲,a,b,c,d,e,f,(2)产生 甲和乙的过程分别是和（3）在形成乙是的过程中，需要将d的细胞核取出，将c细胞核移入d细胞内，此技术叫。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是（4）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是-,有性生殖,克隆,核移植,卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能。,黑毛,乙,甲,a,b,c,d,e,f,（5）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（f）子宫里，这种技术在细胞工程中叫（6）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞也有（7）在繁殖多莉羊的过程中，是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与d羊、c羊及f羊的关系是什么？,胚胎移植,全能性,不遵循，多莉羊的多数性状象c羊，个别性状象d羊，发育也会受到f羊影响。,
