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1、实训二 细菌形态的观察,微生物与发酵工艺,细菌的形态微小(以m计)，借助于放大4001000倍的光学显微镜，可以观察到它们个体的基本形态球状、杆状和螺旋状，其中杆状细菌最为常见，球菌较少，螺旋状的最少。此外尚有极少数细菌为星状，而有的具柄，有的具鞘，有的带附属物。近年来在高盐、高热、高酸等极端环境中还发现了一些形态更为特殊的细菌，如三角形、方盒形、圆盘形、叶状等形态特异的古生菌。细菌的形态是由多基因调控的，除诱变因素以外，在正常的外界环境中，细菌的形态具有稳定的遗传性。亲代与子代的形态基本一致。,单个细菌个体微小，肉眼不可见。但是由一个细菌细胞用无性繁殖所产生的数以亿计的子细胞聚集在一起而形成
2、的群体菌落，在营养琼脂固体培养基上即可目测，不同细菌的菌落形态各异(参阅实训一的结果)。将多个细菌菌体接种在营养琼脂斜面上，所生长出的细菌群体称为菌苔。不同细菌经直线接种在营养琼脂斜面上，会出现诸如丝状、带刺状、小突起状、念珠状、薄膜状、扩展状、树状、假根状等非沿直线生长的各种形态。,细菌在液体培养基中静止培养，在液面会出现絮状、环状、浮膜状和膜状等形态。而振荡通气培养，则每个菌体均匀生长、繁殖，数目增加，菌液混浊。,一、实验目的 1.认识细菌的基本形态。2.学习掌握细菌压滴片及悬滴片的制作方法。,1.压滴法 将细菌悬液滴于载玻片中央，加上盖玻片置于显微镜下观察。此法是研究微生物形态最简单、最
3、基本的方法之一。2.悬滴法 将细菌悬液滴于盖玻片中央，翻转，置于凹玻片的凹窝中央，由于细菌不受盖玻片的压力影响，所以此法常用于观察并区别细菌运动的方式，也可观察细菌的繁殖方式，及孢子萌发等。3.利用暗视野显微镜的观察。利用黑暗背景、被检物构成亮点的特性，可进行细菌运动方式的观察。,二、实验原理,1.菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)大肠杆菌(Escherichiacoli)普通变形杆菌(Proleusvulgaris)枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)黏质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)细菌三种基本形态的染色片2.用具 显微镜、载玻片
4、、凹玻片、接种环、纱布、镜头纸、镊子、盖玻片、特种铅笔、无菌水、凡士林油、火柴、酒精灯、玻片架、香柏油、二甲苯等，722s型分光光度计，0.85NaCl溶液。,三、实验材料和用具,1.压滴标本制作 取清洁载玻片，放在酒精灯的右侧桌面上，用记号笔在玻片右侧注明观察菌体的名称。点燃酒精灯，取一小滴清洁的无菌水放于玻片中央。用无菌操作取出少许菌苔，于玻片水中，涂匀(见图2-3)。用镊子取清洁的盖玻片。由一端与玻片的菌液接触，徐徐放下盖玻片，注意避免产生气泡。将压滴标本放于显微镜下观察。,四、实验方法,无菌操作制片示意图,1一接种环火焰灼烧灭菌；2一在火焰3cm处拔出硅胶泡沫塞(或棉塞）3一斜面管口火
5、焰灼烧灭菌，4一挑取菌苔5一从斜面试管中取出接种环，管口火焰灼烧再次灭菌，6一在火焰3cm处塞上硅胶泡沫塞(或棉塞)7一涂片8一再次火焰灼烧接种环灭菌,四、实验方法,2.悬滴标本制作 取清洁的凹玻片和盖玻片各一片；用火柴杆取少许凡士林涂于盖玻片的四角；在盖玻片中央用接种环蘸取一小滴无菌水，然后用无菌接种环取少许菌苔在水滴上轻沾一下，注意水滴大小要适宜，放菌苔时不要使水滴破散；,四、实验方法,将凹玻片翻转向下，使凹窝中央对准盖玻片中央液滴，然后轻压。使凹玻片与盖玻片粘合紧密，以免蒸发，然后很快将凹玻片翻转，使盖片向上。将制作好的悬滴片置于显微镜下观察。,四、实验方法,压滴标本,四、实验方法,压滴标本制作过程,1.在油浸物镜下观察细胞三种基本形态的染色片。2.用无菌操作制金黄色葡萄球菌的压滴片，置油镜下观察。3.用无菌操作制大肠杆菌的悬滴片，置油镜下观察细菌的运动。,五、实验内容,1.绘图表示细菌的三种形态。2.试述油镜的使用方法。3.描述所观察的细菌菌苔形态。4.报告所检测的大肠杆菌菌悬液的OD值。,六、实验报告,1.怎样观察细菌形态?细菌未染色时，用油镜观察有何困难?2.试述无菌操作的步骤及其要领。,七、思考题,
