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1、实验三、寄生虫学粪便检查法（三）,一、目的 通过本次实验学习掌握线虫幼虫的检查方法、学习掌握虫卵的计数方法；了解线虫幼虫的形态。二、内容1、学习虫卵计数法a）简易计数法 b）麦克马斯特计数法 2、学习线虫幼虫检查法a）幼虫培养法 b）温水引诱法,本次实验的意义：,学习虫卵计数法的操作技术，对于我们判定宿主感染寄生虫病的强度，或者检验驱虫药使用后的效果如何，都有着重要的参考价值。,1、寄生虫排卵有一定的规律性，因此，宿主所排出的粪便中虫卵的含量就会有所很大差异，而且虫卵在同一个粪样中，分布也是不均匀的；2、粪便的浓稠程度的不同，虫卵的含量也会不同。如果要想获得较为准确的数据，不仅要克服主观上的不
2、足外，还要将被检宿主在24小时内所排出的粪便全部收集起来，经充分混合均匀后，称量好总量，按一定的比例来称取粪样，通过换算后，得出的结果才是较为准确的数据。,实验内容：,1、虫卵计数法：（只适用于线虫卵和球虫卵囊）（1）简易计数法：（2）斯陶尔法；（3）麦克马斯特计数法。2、线虫幼虫检查法：（1）线虫幼虫的培养方法；（2）温水引诱法；（3）毛蚴孵化法：,四、操作方法,1、虫卵计数法：（1）、简易计数法：取粪样（1g）加清水（1015倍）搅拌均匀过滤静置（3040分钟）倒去上清液再加饱和盐水混匀倒入青霉素瓶用吸管加满并使之凸出瓶口加上盖玻片静置（2030分钟）垂直取下盖玻片镜检并盖上另一块盖玻片（
3、一般要检三片以上）。,用吸管将粪液加满并使之凸出瓶口,（2）、麦克马斯特计数法；麦克马斯特计数板的规格：它由两块玻片所组成，其间隔距离为1.5mm，上面的盖玻片上一般有12个1 平方厘米的方格，每个计数室的体积为o.15立方厘米，容量为o.15ml。,1.5mm,1.5mm,麦克马斯特计数板,原理:,由于计数室内充满了用漂浮液制成的粪液，因此，在计数室内体积小、比重轻的虫卵漂浮在上面，而粪渣则沉于下面，当视野感觉模糊时往往所看到的是该室的底部沉渣，当清晰见到上面的线条时，才能找到虫卵，由于有线条的规范，有效地防止了漏检或重检。,麦克马斯特操作方法：取样（2g）加饱和盐水（58ml）充分混匀过滤
4、混匀后立即用吸管注入计数室内静置（12分钟）镜检。计算公式：每克粪便中的虫卵数全部计数室的虫卵总数/计数室的个数200,2、线虫幼虫的检查法：,方法：在平皿中垫上一层吸水纸-将含有虫卵的粪便（混匀）-放入平皿中（如粪便太干燥时洒适量的水，如太湿时应洒适量的炭末）-塑成半球状（压平并略高出平皿口）-放入恒温箱内（2530，夏天可放在室内，根据情况可适当洒点水，以保持吸水纸的潮湿度）-经过710天的时间-就会发育成第三期幼虫。,观察:,线虫的种类很多而它们排出的虫卵，在形态、结构和大小上极为相似，因此，以虫卵来鉴别线虫的种类是较困难的，只有通过培养出第三期幼虫（即具有感染力的幼虫），才能根据幼虫的
5、形态结构来进行鉴定。,（2）、温水引诱法：,A、贝尔曼法：该方法检出率高，适用于检查各种线虫的幼虫，包括土壤、饲料和器官内的幼虫检查。贝尔曼分离器装制：用一个直径为1015cm的漏斗，下接一条1015cm长的胶管，再接一个沉淀管，并准备一个止水夹和铜滤筛。,试管,胶管,漏斗,滤筛,操作方法：,取培养好的粪样（1020g）用两层纱布包扎好置于漏斗中的铜筛中沿漏斗边缘加入3740的温水（以淹盖粪样为佳）静置（12小时）夹好止水夹取下沉淀管吸去上清液取沉渣镜检。如果没有沉淀管时，在加温水之前应夹好止水夹，静置（12小时）后，收集下面一部分水，进行离心后取沉渣镜检。,B、平皿幼虫分离法：取培养好的粪样12g放入平皿中加40的温水（以浸没粪便为宜）静置（510）去粪便镜检平皿中的液体。C、直接检查法：取少量培养好的粪样置于载玻片上滴清水静置（30）镜检,作业：将计算方法和检查结果写出。,
