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1、分析方法概述（第一部分）,定性分析与定量分析,定性分析目的 确定检材是不是某种药毒物，或确定检材中是否含有某种或某几种药毒物。过程 探查方向 初步判断 确证 方法要求 灵敏具有一定的选择性,定量分析,目的 确定某种药毒物在检材中的含量和浓度，或确定某几种药毒物分别在检材中的含量和浓度。需定量的情况 医疗中正常用药 饮食或人体中常有的成分 需根据量界定犯罪性质或法律责任的方法要求 灵敏度不一定很高（能测出即可），但需具有良好的计量关系。R/S=f（x）,定性与定量的关系,定性是定量的基础界限 有些定性方法在定性的同时就有定量关系。有些定量方法在一定条件下，本身也具有不同程度的定性意义。,随着分析
2、科学和技术的迅速发展，能应用于法医毒物分析并完成毒物的定性鉴别和定量检测任务的分析方法很多，将主要对以下分析方法，尤其是仪器分析方法进行重点介绍。,分析方法类别,方法类别,常用毒物分析方法,形态学方法外观性状鉴别,通过感观对天然药毒物的外观性状进行鉴别形状：根、茎、叶、花、果实、种子等大小：大小、长短、粗细等颜色：表面和内部的色泽表面特征：光滑还是粗糙，皱褶、槽沟、皮孔、毛茸等质地：软硬、脆韧、轻重、粘性、粉性等折断面：平整粗糙、致密疏松、断面纹路及颜色。,形态学方法显微形态鉴别,利用显微镜观察药毒物的组织结构、细胞种类和形态以及细胞后含物的种类及形态等，通过与已知物核对进行。细胞种类:纤维细
3、胞、石细胞、栅栏细胞、薄壁细胞等。后含物:如淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶、钟乳体、油珠等。,动物试验(animal test),大多毒性大，且具有较强的生理活性和特殊的中毒症状。体外检材充裕、新鲜时，可用动物作急性毒性试验或毒效试验，以预试是否有剧毒或有某类毒物存在。,青蛙毒性试验,动物试验(animal test),免疫分析法,机理：抗原抗体特异性结合方法酶免疫法（enzyme immunoassay,EIA)放射免疫法（radio immunoassay,RIA)荧光免疫法（luoro immunoassay,FIA)薄层免疫法（thinlayer immunoassay,TIA)特点：简便、
4、快速、灵敏，种类有限，试剂较贵。应用：吸毒者和运动员尿液中毒品或兴奋剂的筛查。,尿样滴入S孔内，样品在毛细效应作用下向前迁移。尿样中无吗啡存在或吗啡浓度低于阈值浓度时，因胶体金抗体全部或部分与被固定在板上的吗啡偶联物结合，使测试区（T）内出现一条紫红色的条带。当吗啡高于阈值浓度时，胶体金抗体全部与样品中的吗啡结合，未与吗啡偶联物结合，因此，在测试区不出现紫红色条带。质控区未出现红色线条，说明操作有误或试剂盒失效，结果无效。尿样中吗啡检测阈值浓度为300ng/ml。,测试区（T）吗啡偶联物和被胶体金标记的抗吗啡单克隆抗体,质控区（C）,加样孔（S）,颜色和沉淀反应,机理 大多为生物碱，能与具有氧
5、化性质的酸性试剂反应生成有色物质；或与某些试剂生成沉淀，甚至特殊晶体。方法 颜色反应:点滴板 沉淀或结晶反应：载玻片 显微镜选用原则 选择性和实用性,鸦片生物碱的颜色和结晶反应,吗啡 碘碘化镉钾 马尾松状结晶用于可疑毒品的预试。,理化方法,常用毒物分析方法,紫外分光光度法（ultraviolet spectrophotometry）荧光分光光度法（fluorescence spectrophotometry）红外分光光度法（infrared spectrophotometry）原子吸收分光光度法（atomic absorption spectrophotometry）成分大多结构复杂，一般具有
6、紫外吸收或荧光。现场收缴纯品药物制剂或较纯的毒品可直接用光谱法检验。植物、掺假毒品、生物检材，因成分复杂，一般需与色谱联用。,光 谱 法,咖啡因的紫外光谱图,气相色谱法（gas chromatography GC）高效液相色谱法（high performance chromatography HPLC）薄层色谱法（thin layer chromatography TLC）毛细管电泳法（capillary electrophoresis CE）,色 谱 法,Diagram of Chromatograph,A：全谱扫描方式总离子流图,；B：毒鼠强的质量碎片图；,根据物质分子量、断裂碎片质量大小
7、及结构特征信息的质谱分析法。各类质谱法及多级色质联用法,质谱分析法（mass spectrometry MS）,Mass Spectrometry:A Tool with Increasing Analytical Potentials,SampleIntroduction,Ion Source,Mass Analyzer,+,+,+,Sample Introduction:Gas Phase(GC)Liquid Phase(LC)Solid,Ion Source:EICIESI FABSIMSAPCIMALDI,Analyzers:QuadrupolesSectorsIon TrapFTMS
8、TOF,海洛因,O3-单乙酰吗啡,O6-单乙酰吗啡,乙酰可待因,海洛因及其相关药物质谱图,各类分析方法的效用,上述各类分析方法由于所依据的原理不同，实行的操作方法不同，以及应用的场合不同，不同的作用和效果。主要有以下两类效用。,毒物分析可靠性控制,事先熟练地掌握检测方法。应该对所用检测方法的适用场合、操作中的细节、正常与不正常现象的辨认和处理、结果正确性的辨析等方面，都有充分把握。这就必须有一些措施能保证所做分析工作的可靠性,检验工作不应临时照搬书籍刊物上记载的方法，因为其中有些方法并不切合实用。而对其中可适用于实际工作的方法，若没有亲身体验也是难以把握的。在建立一种新的分析方法时，尤其应该对
9、方法的效能进行验证。,另外法医毒物分析工作中涉及的一些组成复杂检材中的毒物，常需经分离净化等处理，容易使分析结果产生较大误差，所以验证其可靠性尤为必要。方法认证有其具体的内容和实施办法。,作为提供科学证据的法医毒物分析的检验结果和鉴定结论，必须保证其科学性、公证性和权威性。除了需对分析方法进行认证而外，还需实施毒物分析实验室的规范化管理和质量控制建设。,认证分析方法的主要项目,法医毒物分析对方法的要求主要是准确和灵敏。对于组分复杂的检材，首先要求有良好的分离净化效能。（下一学时）,法医毒物分析工作所出具的检验结果或鉴定结论必须科学、公正和权威。而鉴定工作涉及的检材复杂，且待检物未知，含量低微，
10、所以分析质量控制尤为重要。除了对分析方法进行认证而外，对毒物分析实验室的规范化建设，建立有效的技术和质量管理体系也非常重要。,毒物分析实验室规范管理和分析质量控制基本框架,认证分析方法的主要项目纯度和收得率 方法的准确性分析方法的灵敏性线性与检测范围专属性耐用性论证的实施方法模拟试验 空白试验 已知对照试验 随行参比法,国际标准化组织（international standard organization，ISO）对行业实验室有国际化的认可准则。1991年法庭毒物学协会（society of forensic toxicology，SOFT）和美国法庭科学协会（American associa
11、tion of forensic science,AAFS）曾共同发布了法庭毒物学实验室准则（forensic toxicology laboratory guidelines），2002年又在该准则基础上进行了修改和完善，为毒物分析实验室的规范化提供了技术和管理要求。,毒物分析实验室规范管理和分析质量控制基本框架,质量控制应贯穿毒物分析实验室接受和实施毒物检测的各个环节，主要包括人员综合素质，环境设施条件，仪器设备验收、使用、保管、降级及报废制度，合格的实验动物，合格的标准对照品、基准物质，标准操作步骤（standard operating procedures，SOP），检材的采集及保护链，分析步骤，报告结果和资料归档等内容。最终的检验报告和鉴定结果应有行业质量控制专职人员进行质量分析和核查。,毒物分析实验室规范管理和分析质量控制基本框架,
