实验四酵母核糖核酸的分离与组分鉴定.ppt

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1、实 验 四 酵母核糖核酸的分离与组分鉴定(P159),【目的】,掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法了解核酸的组分,掌握鉴定核酸组分的方法,酵母核酸中RNA含量较多;一般提取的RNA主要是rRNA,与蛋白结合在一起形成核糖核蛋白(RNP);RNA溶解性:溶于水,溶于稀酸、稀碱溶液,不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂;RNA的等电点在,DNA的等电点在4.2左右;碱提法、盐提法在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此得到RNA的粗制品。,【原理】,核糖核酸含有核糖、碱基(嘌呤碱、嘧啶碱)和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。磷酸+钼酸铵 磷钼

2、酸铵核糖+地衣酚试剂 墨绿色化合物嘌呤碱+硝酸银 嘌呤银化物(白色),【原理】,【试剂和器材】,器材研钵刻度试管、普通试管刻度离心管搅拌棒量筒、移液管、滴管恒温水浴锅台式离心机,【试剂和器材】,试剂酵母片0.04mol/LNaOH溶液1.5mol/LH2SO4溶液冰醋酸浓氨水,95%乙醇0.1mol/LAgNO3溶液三氯化铁浓盐酸溶液苔黑酚乙醇溶液定磷试剂,(一)RNA的提取,【实验方法】,3片干酵母片,于研钵中充分研磨,放入刻度试管加0.04mol/LNaOH 10mL,沸水浴加热30min(搅拌),取出加乙酸4滴,使提取液呈酸性,2500rpm,离心15min,弃沉淀,取上清加入等体积95

3、%乙醇,边加边搅拌,静置5min,2500rpm,离心5min,弃上清,沉淀即为RNA粗制品,RNA粗制品+5mL1.5mol/LH2SO4,沸水浴加热10min,制成水解液。组分鉴定嘌呤碱:1mL水解液+5滴浓氨水+1mL0.1mol/L AgNO3,观察有无白色絮状嘌呤银化物沉淀。核糖:1mL水解液+2mLFeCl3-HCl+0.2mL苔黑酚乙醇,沸水浴3min,观察溶液有无墨绿色出现。磷酸:1mL水解液+1mL定磷试剂,沸水浴3min,观察溶液中有无蓝色沉淀生成。,(二)RNA的组分鉴定,【实验方法】,说明各试管中现象解释原因得出结论,【结果与分析】,RNA提取实验过程中各操作步骤的作用是什么?心得,【讨论与心得】,

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