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1、微生物的常规鉴定技术,微生物的常规鉴定技术,一、形态结构和培养特性观察 二、生理生化试验,一、形态结构和培养特性观察,形态结构：染色（形状、大小、排列方式）、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性培养特性：菌落(colony),细胞的特殊结构,菌落特征描述,大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征,特殊结构菌落特征,细菌菌落的共同特征 湿润、粘稠、易挑起（菌体和基质结合不紧密），质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。但不同细菌的菌落也具有自己特有特征，例 无鞭毛、不能运动的细菌。球菌菌落 常形成较小、较厚、边缘较整齐的菌落；有鞭毛的细菌菌落 较大、扁平，边
2、缘波状、锯齿状等；有荚膜 较大且表面光滑，无荚膜者则表面较粗糙。有芽孢 表面常有皱褶且很不透明。,各类微生物的菌落特征,根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。,放线菌的结构,二、生理生化试验,微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。,二、生理生化试验,、糖酵解试验、淀粉水解试验 3、V-P试验 4、甲基红（Methyl Red）试验 5、靛基质（Imdole）试验6、硝酸盐（Nitrate）还原试验,二、生理生化试验,7、明胶（Gelati
3、n）液化试验 8、尿素酶（Urease）试验 9、氧化酶（Oxidase）试验 10、硫化氢（H2S）试验11、三糖铁（TSI）琼脂试验 12、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验,其他鉴定手段,染色体DNAG+Cmol%含量 生物体的遗传物质DNA中四种碱基G、C、A、T的排列和比例是DNA特性的决定因素。染色体DNA G+Cmol%含量即DNA的碱基组成具有种特异性且不受菌龄和外界因素的影响,成为细菌分类和菌种鉴定的重要指标 测定方法：纸层析法纸、浮力密度法、高效液相色谱法、热变性温度(Tm)测定法、连续荧光检测法,微生物与乳酸菌的鉴定,参见伯杰氏细菌手册与乳酸细菌分类鉴定及方法,API
4、微生物鉴定试剂条,法国梅里埃公司生产,3、V-P试验,某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。,4、甲基红（Methyl Red）试验,肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基pH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。,5、靛基质（Imdole）试验,某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。,6、硝酸盐（Nitrate）还原试验,有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。,
