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1、,生化检验项目校准盐城市第一人民医院2012.12,测量系统,一套组装的和适用于特定量在规定区间内给出测量值的一台或多台测量仪器，包括任何试剂和电源。注：一个测量系统可以仅包括一台测量仪器。我们现在研究的是临床化学测量系统的校准。,生化分析仪的准备,1.由厂家根据中华人民共和国医药行业标准(YYT0654-2008)对生化分析仪进行 2.由有关计量部门根据国家标准（JJG494-2005）对仪器进行检定 3.仪器应每年检定一次，并提供按标准要求制定的统一格式检定报告，而现在是各色各样。,生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国生化分析仪检定规程JJG 494-2005进行）零点漂移波长准正确度
2、及重复性杂散光吸光度正确度吸光度重复性吸光度线性误差交叉污染率温度正确度比色杯间差距,生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国医药行业标准YYT0654-2008进行）仪器正常工作环境条件杂散光 OD值不2.3吸光度线性范围 5%范围内最大OD值不2.0吸光度准确度 OD值0.5允许误差0.025 OD值1.0允许误差0.07吸光度稳定性 OD变化0.01吸光度重复性 CV1.5%温度正确度与波动度 设定值0.3 波动度 0.2 样品携带污染率 0.5%临床项目批内精密度比色杯间差距 无波长准正确度及重复性 无,附鉴定报告,参考方法,决定性方法,厂家方法,常规分析,一级标准品,二级标准品,校
3、准 品,校准目的是准确度的传递,溯源,校准,常规实验室校准（calibration）应做的是,1.在规定条件下，为确定测量仪器(或测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。校准结果可以记录在校准证书或校准报告中。2.校准品应有溯源性（traceability）通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。,替代校准品的校准值确定,临时校准品的选择及校准,目标检测系统,一份含量和替代校准品相近的新鲜血（临时校准品）,自建检测系统,一批（20份）新鲜血
4、（分析物含量函概整个检测范围）,目标检测系统检测结果,自建检测系统检测结果,r0.975，斜率很接近1，截距保持原有水平或有所改善；各样本结果差异在CLIA88允许误差的1/4内,多 次测 定均 值,校 准,方法学 比对,替代校准品的校准值确定,经新鲜血校准后的自建检测系统,替代校准品,自建检测系统,目标检测系统,一批（20份）新鲜血（分析物含量函概整个检测范围）,目标检测系统检测结果,自建检测系统检测结果,r0.975，斜率很接近1，截距保持原有水平或有所改善；各样本结果差异在CLIA88允许误差的1/4内,多 次测 定均 值,重 新校 准,方法学 比对,更换新批号校准品,计算每1批测量的均
5、值。将均值与厂家赋值比较。从赋值和测量值的差异，可预期使用新校准品后质控靶值的变化以及患者测试结果变化。质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有统计显著差异，并必须对校准品值是否真正准确似应改为正确？做出决定。决定中要包括CLIA 88的要求特別是PT要求，并咨询厂家。,校准品的处理,冰冻产品的处理步骤：从-70或-20冰箱中取出样本，置室温（18-25）下平衡，使之完全融化，温和混匀。冻干产品的复溶步骤：从-冰箱中取出样本，置室温（18-25）下平衡，并放置在水平桌面上，轻拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水（水的温度最
6、好控制在18-22，移取体积时最好采用称重法控制），(在常规实验室不易做到）压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解，温和混匀。应按厂家提供说明书操作。,更换新批号校准品,计算每1批测量的均值。将均值与厂家赋值比较。从赋值和测量值的差异，可预期使用新校准品后质控靶值的变化以及患者测试结果变化。质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有统计显著差异，并必须对校准品值是否真正准确似应改为正确？做出决定。决定中要包括CLIA 88的要求特別是PT要求，并咨询厂家。,仪器:AU2700，AU54OO试剂：OLIYMPUS：ALT ALP 科华：ALB 东瓯：TG 中生：HCO3-校准品:OLIYMPUS：ALT
7、 ALP 新鲜血传递OLIYMPUS：ALB TG 中生:HCO3-,使用新鲜病人血清传递重新赋值校准品，将生化封闭系统上的溯源性传递给开放 系统，有助于开放系统对测试结果进行追溯，保证测试结果的准确和可靠。,校准品的浓度 校准需哪几个浓度水平？,ISO 11095:1996标准3个（对于初次校准应该增加校准水平的数量）EURACHEM“分析方法的目标适用性”指南包括空白至少6个浓度水平Commission Decision 2002/657/EC规定：包括零浓度至少5个浓度水平ISO 15302:2007标准规定了4个校准水平LGC/VAM“校准曲线的制备”指南规定7个校准水平（包括空白）I
8、SO 8466-1:1990甚至要求10个浓度水平,校准方法的选择,符合朗伯比尔定律用包括水空白在内的两点校准抗原抗体及乳胶增强反应用多点校准,这是不同批号空白OD值,所选5个项目为水空白与校准品两点线性校准,校准包含哪个浓度范围？应指多点法，范围为线性范围,校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。校准范围也定义为分析方法的工作范围。校准标准物必须在与准备测量或注入样本相一致的浓度水平。常规实验室有难度,每个浓度水平重复几次？至少重复三次,ISO 11095:1996标准要求每个校准水平至少重复两次，并建议尽可能多次。为了评价残余标准变异的稳定性，至少要重复分析两次，需要这种信息来决定哪个回归
9、模型是最合适。但每个校准水平重复分析一般不会超过5次。,AU5400，AU2700最多可测4次，自动去除漂移大的一次数值，取另外3次平均值。较稳定项目可测2次。,空白对校准的影响？如何评价？,要求校准设计包括空白或零浓度水平如果空白或零样本产生了一个信号，表明与分析物有相同的信号产生基质；如LP（a），IMA要用专门零浓度水平替代水空白，否则样本会出项负值，因为零浓度水平OD值比水空白高如果空白或零样本不产生任何信号，则在校准实验中可以排除空白或零浓度水平。不能，应每日都要添加试剂，应作为对试剂好坏的检测手段。还可以间接观察灯泡，比色杯等其它情况。,这是不同批号空白OD值曲线图,空白OD值曲线
10、图,校准周期的确定,理想情况下，医学实验室在进行每一批次样本检测前，需重新对测量系统实施校准。或根据实验室自身检测系统具体运行情况规定相关项目的校准实施频率。至少应按照制造商规定的频率下进行校准程序(应验证)。若检测仪器零件进行更换后，或仪器进行保养后，或检测试剂批次进行更换后，必须重新进行校准程序。,校准系统的有效性检查必须与初次校准清晰地区分开来。ISO 11095:1996 认为校准系统的有效性检查，至少有2个、最好是3个校准水平通过控制图监控校准作用的有效性。卫生部临检中心正确度验证计划（小分子代谢物、脂类、酶、GHB、血细胞）与EQA靶值比较此步骤应做的，我室通过观察试剂空白和校准曲
11、线图及室内质控图，判断校准是否成功。,这是不同批号空白OD值,“校准”的验证,如何对“校准”进行验证？1.与以往的K值进行比较（记录每次校准的K值）。此项我室已在做请看原始数据表但未形成图表 2.连续校准10日进行验证 可将校准品作为控制品分析，每日测量2次，共10日，绘制控制图；如需要我室可以做，但有的项目每天都校准怎么做？质控靶值变化大于1.0的SD，可认为有统计显著差异，并必须对校准品值是否真正正确做出决定。？,校准过程需要讨论的其他问题试剂因素 应该维持在日常工作状态这样才能与患者样本同步贮存稳定性有效期标准，-10%？开瓶稳定性标准，K值cv2%？！新旧混合使用 不同批号使用,校准过
12、程需要讨论的其他问题人员因素 人员应相对固定科领导是否对校准重视有无制定校准SOP制定的校准SOP太简单，甚至有错误；只有校准SOP，无记录或审核要求；无校准出问题的纠正措施文件和记录，以及评审与改正的措施；能否严格要求技术人员执行SOP。,为什么用校准品后得到的K值与理论K值不一致？校准品是如何定值的？方法不一样（参考方法）仪器不一样（最好的仪器，每次定值前都必须对仪器进行校准）试剂不一样（最好的试剂）测试次数不一样（多次测定结果）,校准品测量次数：对校准K值的影响？取平均K值？校准K值用理论K值，说明书K值，实测K值？空白测量：对校准K值的影响？校准周期：对校准K值的影响？更换不同批号校准品：对校准K值的影响？校准的核查：是否有核查程序？,我室从2007年开始了江苏省参比实验室的建设活动。在近5年时间内，收集了本室在检项目校准时的试剂空白与校准品OD值，F值。试剂空白测量：对校准K值的影响？校准周期：对校准K值的影响？更换不同批号校准品：影响可接受,K值测定,校准周期：对校准K值的影响？,ALT不同批号校准品,ALP不同批号校准品,试剂空白测量：对校准K值的影响？,
